大肠癌组织CD44v6的表达及其临床意义
第三军医大学学报1999年第21卷第12期
徐钊 张霞 房殿春 晋华源 阎晓初 王东旭
提 要 目的：探讨血清透明质酸(HA)及大肠癌组织中CD44v6的表达对大肠癌预后的判断价值。方法：60例大肠癌患者血清HA含量采用放免法检测，大肠癌组织CD44v6的表达采用免疫组织化学ABC法。结果：60例大肠癌组织中，有CD44v6检出者45例，占75%，Dukes c、D期及有淋巴结转移者其CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期及无淋巴结转移者(P＜0.01)，CD44v6的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化及类型无关；Dukes c、D期及有淋巴结转移的患者其血清HA水平明显高于Duke A、B期及无淋巴结转移的患者(P＜0.01)；随着CD44v6表达增强，血清中HA水平亦逐渐增加。结论：血清中HA水平及大肠癌组织中CD44v6的表达可以作为判断大肠癌患者预后的指标。
关键词：CD44v6 大肠癌 预后
CD44是一种分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，它能与多种配体分子结合，参与细胞与细胞之间、细胞与基质之间的特异性粘附。人类CD44基因位于11号染色体短臂上，CD44基因的外显子按剪接方式不同分为标准型CD44(CD44s)及变异体CD44(CD44v)［1］。近年来许多研究发现CD44v与肿瘤细胞的生长、浸润、转移及预后密切相关。本研究采用免疫组化法检测CD44v6在大肠癌组织中的表达与临床病理指标的关系，并采用放免法检测患者血清中CD44v6的配体透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的变化，藉以探讨CD44v6在评估大肠癌患者预后中的作用。
1 材料与方法
1.1 标本来源
60例大肠癌选自本院1997年4月至1998年1月行大肠癌根治术的病人。病例纳入标准：均经手术病理证实，无肝肾功能异常，无内分泌疾病及其它部位恶性肿瘤，无放化疗病史者。其中男37例，女23例，平均年龄56.9岁(22～76岁)。取少许手术切除的肿瘤组织常规10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，片厚5μm。经HE染色证实高分化腺癌18例，中分化腺癌31例，低分化腺癌11例。Dukes分期：A期10例，B期22例，C期16例，D期12例。有淋巴结转移24例，无淋巴结转移36例。另外10例正常大肠组织同时进行免疫组化染色。
1.2 方法
采用免疫组化ABC法，CD44v6单克隆抗体及ABC试剂盒购自北京中山生物技术公司，以PBS代替一抗作为阴性对照，抗原经胰酶或/和微波修复后，室温下操作，切片脱蜡至水；0.3%过氧化氢阻断10 min；非免疫血清封闭10 min；一抗4°C孵育过夜；二抗孵育37°C30 min；三抗37°C30min；DAB显色，镜下观察，显出黄色颗粒后终止反应；苏木素复染，中性树胶封片。结果判定，根据染色的程度和范围分为4级：强阳性(++)：阳性细胞占整个切片的70%以上；阳性(+++)：阳性细胞占整个切片的30%～70%；弱阳性(+)：阳性细胞占整个切片的10%～30%；阴性(-)：阳性细胞占整个切片的10%以下。
1.3 HA的检测
于手术前清晨空腹抽取静脉血，室温放置2h后离心分离血清，-20°C保存备用。HA放免试剂盒购自上海海军医学研究所生物技术中心，检测严格按试剂盒说明书进行。
1.4 统计学处理
采用t检验及χ2检验处理相关数据，P＜0.05为相差显著，P＜0.01为相差非常显著。
2 结果
60例大肠癌组织中，CD44v6表达阳性者45例，占75%，而癌旁大肠粘膜及正常大肠组织未见有CD44v6表达(0/70)，两组相差非常显著(P＜0.01)。CD44v6的表达与淋巴结转移及Dukes分期明显相关，有淋巴结转移组CD44v6的表达明显高于无淋巴结转移组(P＜0.01)；Dukes c、D期CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期(P＜0.01),见表1。而CD44v6的表达与患者年龄、性别、分化程度和组织学类型无明显相关性(P＞0.05)。
表1 大肠癌CD44v6表达与淋巴结转移及Dukes分期的关系
tab 1 Relationship between expression of CD44v6,lymph node metastasis and dukes stage in patients with colorectal carcinoma
| |
n |
Expression of CD44v6 |
| -～+ |
++～+++ |
| Lymph node metastasis |
| With |
24 |
7(29.1%) |
17(70.9%)## |
| Without |
36 |
24(66.7%) |
12(33.3%) |
| Dukes stage |
| A |
10 |
7(70.0%) |
3(30.0%) |
| B |
22 |
14(63.6%) |
8(36.4%) |
| C |
16 |
6(37.5%) |
10(62.5%)** |
| D |
12 |
4(33.3%) |
8(66.7%)** |
##：P＜0.01 patients with lymph node metastasis group vs without；**：P＜0.01 Dukes stage C、D vs A、B HA与肿瘤大小、分化程度无明显相关性，而与Dukes分期和有无淋巴结转移明显相关，见表2。
表2 大肠癌患者血清HA与临床病理指标的关系
tab 2 Relationship between serum HA concentration and clinicopathological parameters in patients with colorectal carcinoma
| |
n |
HA(X±s,ng/ml) |
| Size(cm) |
| ＞5 |
24 |
247.5±22.6 |
| ＜5 |
36 |
169.4±153.2 |
| Differentiation |
| Well |
18 |
152.7±116.2 |
| Moderate |
31 |
216.3±214.7 |
| Poor |
11 |
246.1±214.6 |
| Lymph node metastasis |
| With |
36 |
122.4±127.7** |
| Without |
24 |
323.0±209.9 |
| Dukes stage |
| A |
10 |
92.6±24.2 |
| B |
22 |
131.8±157.1 |
| C |
16 |
265.6±175.4## |
| D |
12 |
340.5±240.6## |
**：P＜0.01 patients with lymph node metastasis group vs without;＃＃：P＜0.01 Dukes stage C、D vs A、B 本组60例大肠癌组织中CD44v6的表达与患者血清中HA含量的关系见表3。随着组织中CD44v6表达增高，血清中HA的含量亦呈上升趋势，CD44v6强阳性表达的患者，血清中HA含量明显高于CD44v6阴性的患者(P＜0.01)。
表3 大肠癌患者组织中CD44v6含量与血清中HA含量的关系
tab 3 Relationship between CD44v6 expression level in tissues and concentration of serum HA in patients with colorectal carcinoma
| Expression of CD44v6 |
n |
Concentration of HA(X±s,ng/ml) |
| +++ |
13 |
324.1±228.7** |
| ++ |
16 |
203.3±198.7 |
| + |
16 |
186.2±195.9 |
| - |
15 |
116.5±49.2 |
**:P＜0.01 +++vs +
3 讨论
有研究表明，正常大肠上皮细胞CD44蛋白表达以CD44s为主，且局限于腺管基底部，未发现有CD44v的表达［2］。本研究亦发现正常大肠组织及癌旁大肠组织CD44v6表达阴性，同国外报道一致。本研究发现大肠癌细胞膜中存在不同程度的CD44v6的异常表达，阳性率为75%，提示CD44v6同肠癌的发生与发展可能有关。
Takeucki［3］采用Northern杂交和RT-PCR技术，检测60例结肠癌组织中CD44的表达，发现癌组织中CD44v8～v10表达明显高于癌旁组织，在结肠癌肝转移患者中，CD44v8～v10的表达明显高于无肝转移者，肝转移灶中CD44v8～v10的表达又明显高于原发灶，提示CD44v8～v10在结肠癌肝转移中可能发挥重要作用。而Wielenga［4］对不同时期结直肠癌肿瘤细胞CD44表达类型进行分类研究后发现，在结直肠癌早期，不含v6的CD44蛋白表达增加，而在肿瘤的进展期，含有v6的CD44蛋白表达增加，并在肿瘤的早期转移中起重要作用。本文采用免疫组化方法，发现CD44v6与结肠癌淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移者CD44v6表达明显高于无淋巴结转移者，并且发现CD44v6的表达与结肠癌的Dukes分期明显相关，Dukes c、D期CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期，与国外报道基本一致。本文未发现CD44v6的表达与肿瘤分化、类型及大小相关。
HA作为CD44的配体，在肿瘤转移中亦具有重要的作用。国内许洪卫等［5］的研究表明在结直肠癌患者中，Dukes c期和/或有淋巴结转移的患者，其血清HA水平明显高于Dukes A、B期和/或无淋巴结转移的患者。本研究亦发现大肠癌患者血清HA水平与患者的Dukes分期及有无淋巴结转移密切相关。提示血清中HA含量与组织中CD44受体的表达水平是平行的。
以上研究表明，HA及CD44v6参与了结直肠癌的转移过程，联合检测血清HA与组织中CD44v6对于结肠癌预后的判断具有重要的意义。
作者简介：徐钊，男，1952.03.20生，陕西省乾县人，主任医师，主要从事细胞粘附分子与消化道肿瘤转移关系的临床病理研究，发表论文10余篇。电话：023(68754124)
作者单位：徐钊 房殿春 晋华源 阎晓初 王东旭：第三军医大学附属西南医院消化内科，重庆400038； 张霞：白求恩国际和平医院特诊科，石家庄050082
参考文献
［1］ 徐钊.CD44与消化道肿瘤转移和预后评估的研究进展［J］.国外医学：临床生物化学与检验学分册，1998，19(3)：111-114.
［2］ Salmi M,Gron Virta K,Soint P,et al.Regulated expression of exon v6 containing isoforms of CD44 in man: Down regulation during malignant transformation of tumors of squamocellular origin［J］.J Cell biol,1993,122(2):431-435.
［3］ Takeucki K,Yamaguchi A,Urano T,et al.Expression of CD44 variant exon 8～10 in colorectal cancer and its relationship to metastasis［J］.Jpn J cancer Res,1995,86(3):292-295.
［4］ Wielenga V J M,Heider K H,Offerhaus G J A,et al.Expression of CD44 variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression［J］.Cancer res,1993,53(20):4754-4759.
［5］ 许洪卫，王元和，高瀚.结、直肠癌侵袭性和根治手术对血清透明质酸浓度的影响［J］.解放军医学杂志，1996，21(2)：131-133.
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