p27蛋白在胃癌和大肠癌中的表达及其意义

　　中华实验外科杂志2000年第17卷第3期

陈爱军　杨国梁　杨振华　孟庆华　王坤

　　摘　要　目的　探讨p27蛋白在胃癌及大肠癌组织中的表达及其与临床病理学特征的关系。方法　采用免疫组织化学方法对24例正常大肠组织、11例胃癌组织及38例大肠癌组织p27的表达及其与临床病理学特征的关系进行分析。结果　p27在正常结肠组织中的高表达率为100%(24/24)，而在胃癌及大肠癌组织中的高表达率为53%(26/49)，p27在两组织中的表达差异有显著性(P＜0.005)，而且p27低表达与胃癌及大肠癌的分级高、淋巴结转移多和TNM分期晚显著相关。结论　p27蛋白的表达与胃癌、大肠癌的临床病理学特征密切相关，可能是一个预测胃癌、大肠癌预后的重要指标。

　　关键词：结直肠癌　胃癌

　　p27蛋白是一种新近发现的细胞周期素(cyclin)-周期素依赖性蛋白激酶(CDK)抑制蛋白，它通过与cyclin-CDK复合物结合，控制细胞由G₁期进入S期的“位点”，从而抑制细胞增殖^［1］。我们应用免疫组织化学SP法对胃癌、大肠癌组织中p27表达及与肿瘤临床病理学特征的关系进行了分析。

　　材料与方法

　　1.一般资料：收集湖北医科大学附属第二医院肿瘤科1997年9月～1998年5月手术切除的胃癌、大肠癌标本49例，其中男29例，女20例；年龄25～78岁，平均51.5岁；标本中胃癌11例，结直肠癌38例；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期24例，Ⅲ、Ⅳ期25例；中、高分化26例，低分化23例；淋巴结转移25例，远处转移2例。取1999年1～4月结直肠手术后正常大肠组织24例。以上均经病理学诊断证实。

　　2.方法：所有标本常规取材，福马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，用于免疫组织化学染色。抗p27鼠抗人单克隆抗体、SP试剂盒，DAB显色试剂盒购自福建迈新生化技术开发公司。采用免疫组织化学SP法，以高压枸椽酸盐行抗原修复，DAB显色，胞核、胞浆染为棕色者为阳性细胞。400倍显微镜下每张载玻片计数5个视野，每个视野100个细胞，取阳性细胞数百分比的平均值，＜50%为低表达，≥50%为高表达^［2］。

　　3.统计学方法：χ²检验。

　　结　　果

　　1.p27在胃癌、大肠癌组织及正常大肠组织中表达的差异：24例正常结直肠组织粘膜腺细胞胞核、胞浆呈明显棕色细颗粒状，高表达率100%，胃肠癌组高表达率为53%(26/49)，两组差异有显著性(P＜0.05，表1)。

表1　p27在人胃肠癌及正常大肠组织中的表达

　　2.p27表达与胃癌、大肠癌临床病理学特征的关系：肿瘤组织中p27阳性细胞主要位于高、中分化及TNMⅠ、Ⅱ期病例组，高、中分化及Ⅰ、Ⅱ期组间p27表达差异无显著性(P＞0.05)。p27表达水平与胃癌、大肠癌的恶性程度、TNM分期相关，恶性程度越高、TNM分期越晚，p27的表达水平越低(P＜0.05)。49例胃癌、大肠癌标本中，2例远处转移亦见于p27低表达组(表2)。

表2　p27表达与人胃肠癌临床病理学特征的关系

　　讨　　论　　p27蛋白是Polyak等^［3］于1994年在转化生长因子-β(TGF-β)，处理的生长抑制细胞及接触生长抑制的细胞株中发现的一种相对分子质量为27 kd的耐热细胞周期抑制蛋白，是p27基因的产物，属kip类，与p21、p57功能相似。国外学者认为p27基因在肿瘤的发生发展中起着重要作用，但很少发现有p27基因的缺失及突变，认为其抑癌作用可能是其产物p27蛋白在转录后水平以化学剂量方式与cyclin-CDK复合物，尤其是cyclin-CDK₂复合物结合，阻止细胞增殖通过限制点——“位点”的最关键因素，从而使细胞周期停止在G₁期。p27蛋白水平低下或缺失，可导致细胞过度增殖，引起肿瘤发生。国外研究表明p27主要定位于胞核^［2，3］。而Surendra等^［4］和Loda等^［5］则发现p27在Barrett's食管癌及结肠癌细胞的胞浆和胞核中都有表达。Surendra等^［4］认为p27的定位是一个有意义的问题。当p27定位于胞核时，其抑制肿瘤的活性就高。本实验p27的表达以胞浆为主，与文献报道不尽一致。其原因及意义有待于进一步探讨。

　　Piaparrone等^［2］在对正常结肠、结肠增生性息肉、腺瘤性息肉及结肠癌的研究中发现，虽然p27在正常结肠、结肠良性疾病及结肠癌组织中的表达未达到统计学差异，但呈现出低表达与高恶性的极显著相关，认为其表达水平与大肠癌的预后有关。在本实验中，胃癌、结直肠癌p27的表达水平明显低于正常组织(P＜0.005)，正常组织的高表达率高达100%，提示p27水平下降可能与胃肠癌的发生有一定关系。本组p27的表达与肿瘤的恶性程度、临床分期呈显著相关，2例有远处转移者亦为低表达，表明p27水平与胃癌、大肠癌的预后有重要关系。由此，我们认为p27的表达可能是一个预测胃癌、大肠癌预后的重要指标。至于p27能否作为判断胃肠癌预后的独立指标，我们将作进一步的研究。

　　作者单位：陈爱军（430071武汉，湖北医科大学附属第二医院肿瘤科）

　　杨国梁（430071武汉，湖北医科大学附属第二医院肿瘤科）

　　王坤（430071武汉，湖北医科大学附属第二医院肿瘤科）

　　杨振华（湖北省宜昌市中心医院普外科）

　　孟庆华（湖北省宜昌市第三医院外科）

　　参考文献

　　［1］Toyoshima h, Hunter T. p27 a novel inhibitor of G₁ cyclin-CDK protein kinase activity is relate to p27. Cell, 1994,78:67-68.

　　［2］Piaparrone M, Yamanoto H, Yao Y, et al. Localization and expression of p27 in multistage colorectal carcinogenesis. Cancer Res, 1998,58:114-120.

　　［3］Polyak K, Kato JY, Solomon MJ, et al. p27kip1, a cyclin-CDK inhibitor links transforming growth faxtor-beta and contact inhibition to cell arrest. cenes Dev, 1994,8:9-11.

　　［4］Surendra P, Lipman J, Goldman H, et al. Loss or altered subcellular localization of p27 in Barrett's associated adenocarcinoma. Cancer Res,1997,58:1 730-1 732.

　　［5］Loda M, Cukor B, Tam S, et al. Increased proteasome-dependant degradation of cyclin-dependant kinase inhibitor p27 in agreessive colorectal carcinomas. nature Med, 1997,3:231-232.