非小细胞肺癌患者放疗前后机体免疫功能变化的研究

中国免疫学杂志 2000年第2期第16卷 临床免疫学

作者：郭占文　李玉　拱玉华　马东初　孙慧英

单位：郭占文（沈阳军区总医院　沈阳　110015）；李　玉（沈阳军区总医院　沈阳　110015）；拱玉华（沈阳军区总医院　沈阳　110015）；马东初（沈阳军区总医院　沈阳　110015）；孙慧英（沈阳军区总医院　沈阳　110015）

关键词：放射治疗；非小细胞肺癌；外周血淋巴细胞；sIL-2R；免疫功能

　　摘　要：目的：报道30例非小细胞肺癌(NSCLC)患者放疗前后免疫功能的变化。方法：采用双抗体夹心法和比浊法检测血清中sIL-2R、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）含量；用单克隆抗体和流式细胞仪技术检测外周血中T细胞亚群、B细胞、NK细胞百分数；与健康人做对照。结果：放疗前sIL-2R显著增高（P＜0.01），IgG及IgM亦增高（P＜0.05），B细胞百分数低下（P＜0.01），CD3⁺细胞降低（P＜0.01），CD4⁺／CD8⁺比值降低（P＜0.05）；放疗后sIL-2R含量显著下降（P＜0.01），IgG亦降低（P＜0.05），B细胞百分数下降（P＜0.05），CD3⁺细胞进一步下降（P＜0.05），CD4⁺／CD8⁺比值亦降低（P＜0.05）；IgM和NK细胞放疗前后无变化。临床Ⅳ期者比Ⅱ、Ⅲ期者CD4⁺／CD8⁺比值更低（P＜0.01）。结论：放射治疗会使宿主机体免疫功能降低。

　　分类号：R734.2

Study of T-lymphocyte subsets in peripheral blood of non small cell lung cancer patients before and after undergoing radiotherapy

GUO Zhan-Wen

　　（Shenyang Army General Hospital,Shenyang110015）

　　LI Yu

　　（Shenyang Army General Hospital,Shenyang110015）

　　GONG Yu-Hua

　　（Shenyang Army General Hospital,Shenyang110015）

　　Abstract：Objective：It reported general immune function of 30 cases of non small cell lung cancer(NSCLC) before and after undergoing radiotherapy.Methods:In comparison with the health, observed soluble interleukin -2 receptor (sIL-2R), and immunoglobulin(IgG、IgA、IgM) with double sandwich-in assay and turbidimetry from patients.Also observed T-lymphocyte subsets(T-LS)、B-lymphocyte and NK cell percent in peripheral blood lymphocyte with monoclonal antibody and flow cytometry intrument.Results:sIL-2R in blood of lung cancer before radiotherapy was significantly higher (P＜0.01),IgG and IgM were obviously higher (P＜0.05), B-lymphocyte percent was markedly lower,too(P＜0.01), CD3⁺ cell were lower more than those of health control, and there were markedly different (P＜0.01), the ratio of CD4⁺/CD8⁺ cell in blood of lung cancer was significantly lower than that of health control's (P＜ 0.05) , sIL-2R in blood of lung cancer after radiotherapy was markedly lower than bofore's (P＜0.01).B-lymphocyte percent and IgG were lower (P＜0.05), CD3⁺ cell was significantly decreased (P＜0.05), the ratio of CD4⁺/CD8⁺ cell in blood of lung cancer was decreased, too (P＜ 0.05) , the ratio of CD4⁺/CD8⁺ cell in clinical period Ⅳ was obviously lower than those of period Ⅱ～Ⅲ(P＜0.001).Conclusion: General immune function was reduced after radiotherapy.

　　Key words：Radiotherapy　Non small cell lung cancer (NSCLC)　Peripheral blood lymphocyte (PBL)　Soluble interleukin-2 receptor (sIL-2R)　Immune function▲

　　放射治疗是治疗恶性肿瘤的重要手段之一，以直接攻击肿瘤为目标，具有直接的即时疗效，同时也伴随着放疗引起的负效应，常常可以观察到放疗后患者白细胞数减少的现象。我们对放疗前后30例非小细胞肺癌(Non small cell lung cancer,NSCLC)血清sIL-2R、免疫球蛋白、T细胞亚群及B细胞、NK细胞百分数联合检测，探讨放疗对肺癌患者机体免疫功能的影响及全身免疫水平的变化，为临床综合治疗提供理论依据。

　　1　材料与方法

　　1.1　病例选择　自1996年6月至12月，来我院接受放疗的NSCLC患者30例，所有病例均经病理或痰细胞学证实为鳞癌或腺癌。临床分期按UICC（1987年）分期标准：Ⅱ期2例，Ⅲ期21例，Ⅳ期7例。其中男21例，女9例，年龄37～64岁，平均53.2±12.3岁。既往无放、化疗史，放疗期间不用影响免疫功能的药物，分别在放疗前和放疗结束时静脉采血3 ml。

　　1.2　对照组　为同期来院健康献血者25例，其中男15例，女10例，年龄22～43岁，平均30.9±7.5岁。

　　1.3　放射治疗　采用电子直线加速器（日本三菱公司）10 MV-X线，前后野垂直照射，照射范围包括原发病灶、同侧肺门及相应纵隔，5次／w，200 cGY／次，照射剂量40 GY／20 f后缩野避开脊髓，使原发灶及受累淋巴结照射剂量达60～70 GY。

　　1.4　检测指标和方法

　　1.4.1　血清sIL-2R含量的测定　采用双抗体夹心ELISA法，试剂盒购自白求恩医科大学免疫室。

　　1.4.2　血清IgG、IgA、IgM的测定　采用比浊法，试剂盒购自贝克曼公司。

　　1.4.3　T细胞亚群、B细胞、NK细胞百分比的测定　采用单克隆抗体和流式细胞仪分析法，试剂盒购自国际免疫技术有限公司。

　　1.5　统计学分析　两组间进行t检验，用±s表示，P＜0.05确定为差异有显著意义。

　　2　结果

　　2.1　肺癌组放疗前后与对照组血清sIL-2R、免疫球蛋白含量变化的比较，见表1。放疗前肺癌组与对照组比较，IgG、IgM及sIL-2R含量升高，差异显著（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01）。放疗后与放疗前比较：IgG、IgM及sIL-2R含量均下降，差异显著（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01）；而IgA无明显变化（P＞0.05）。

表1　肺癌组放疗前后与对照组血清sIL-2R、免疫球蛋白含量比较(±s)

　　Tab.1　sIL-2R，IgG，IgA and IgM on serum before and after radiotherapy compared with control（±s）

Note：compared with control；1）P＜0.05，2）P＜0.01; compared with before radiotherapy, 3）P＜0.05，4) P＜0.01

　　2.2　肺癌组放疗前后与对照组T细胞亚群、B细胞、NK细胞百分数变化的比较，见表2，放疗前肺癌组与对照组比较：CD3⁺细胞降低（P＜0.01）；CD4⁺／CD8⁺比值下降（P＜0.05）；B细胞百分数亦显著降低（P＜0.01）。肺癌放疗前与放疗后的比较：CD3⁺、CD4⁺／CD8⁺比值及B细胞百分数进一步下降（P＜0.05)。而CD4⁺及NK细胞放疗前后与对照组比较无明显变化（P＞0.05）。

表2　肺癌组放疗前后与对照组T细胞亚群、B细胞及NK细胞百分数变化比较(±s)

　　Tab.2　 T-lymphocyte subsets,B-lymphocyte and NK cell percent on serum before and after radiotherapy compared with control（±s）

Note：compared with control,1）P＜0.05，2）P＜0.01;compared with before radiotherapy, 3）P＜0.05，4）P＜0.01

　　2.3　不同的临床期别肺癌组外周血T细胞亚群变化的比较，见表3。Ⅳ期肺癌比Ⅱ、Ⅲ期者CD8⁺增加（P＜0.01），CD4⁺/CD8⁺比值下降（P＜0.01），而CD3⁺和CD4⁺无显著性差异（P＞0.05）。

表3　不同的临床期别肺癌组外周血T细胞亚群变化比较(±s)

　　Tab.3　T-lymphocyte subsets in clinical periodⅣ compared with period Ⅱand Ⅲ（±s）

Note:1）P＜0.01

　　3　讨论

　　从放疗后免疫功能的研究中，我们发现放疗前NSCLC患者血清中sIL-2R含量高于对照组，差异显著，升高可能是与肺癌宿主本身肿瘤的负荷、刺激T淋巴细胞的过度活化及与活化的T淋巴细胞数增高有关，也可能由于某些癌症基因活化的同时激活了细胞因子受体基因，使其异常表达。结果提示：sIL-2R升高是肿瘤免疫调节功能紊乱的标志，并可作为肺癌免疫功能监测的指标之一。放疗后sIL-2R显著下降，可能是放疗对免疫系统的影响所致，在杀伤肿瘤细胞的同时也杀伤或抑制了活化的淋巴细胞，放疗后下降的程度对肿瘤患者有无积极意义有待研究。

　　过去辐射免疫学家曾对机体免疫细胞做过大量研究，认为B细胞辐射敏感性高于T细胞，且B细胞也含有辐射敏感性不同的亚群，NK细胞具有一定的辐射抗性。我们检测结果表明，放疗后B细胞进一步下降，与放疗前相比较差异显著，而NK细胞放疗前后变化不大，这都与机体免疫细胞辐射敏感性密切相关。

　　肺癌患者放疗前血清中IgG、IgM高于对照组，差异显著，提示体液免疫功能紊乱，可能由于肿瘤存在，B细胞过度活化所致。放疗后IgG、IgM迅速下降，与放疗前相比差异显著。放疗后一方面使肿瘤缩小乃至消失，大大减弱肿瘤组织对B细胞的活化；另一方面放射使B细胞损伤，造成B细胞百分数下降，使产生免疫球蛋白的前体细胞——B细胞数迅速减少，合成障碍，使IgG、IgM下降，而IgA放疗前后无变化，认为是产生免疫球蛋白的前体细胞B细胞存在不同辐射敏感性的亚群。产生IgG的细胞较产生IgM的细胞更敏感，产生IgM的细胞照射后恢复力强，而产生IgA的细胞有辐射抗性^［1］，总之放疗后对机体体液免疫呈抑制效应。

　　Ⅳ期肺癌患者CD8⁺细胞高于Ⅱ、Ⅲ期者，差异显著，CD4⁺／CD8⁺比值降低，说明：细胞免疫功能随着病程延续，病期发展进一步受抑制。随着病情发展，一方面肿瘤诱发出特异的和非特异的大量抑制性细胞，另一方面肿瘤细胞分泌抑制因子，选择性地抑制辅助性T细胞，或是由于抑制性T细胞所产生的抑制因子造成免疫功能的损害和免疫水平的低下^［2］，致使机体对肿瘤失去控制而加速发展，治疗效果差，预后不佳。本组肺癌患者放疗前血液中CD3⁺、CD4⁺／CD8⁺比值均低于对照组，差异显著，说明肺癌患者细胞免疫功能低下，免疫调节功能紊乱，这与国内外多数学者检测结果相一致^［3，4］。有人研究：癌肿被切除以后，患者血液中CD4⁺／CD8⁺比值回升，细胞免疫机能恢复^［5］。在放疗后，肿瘤缩小甚至消失，解除了肿瘤对机体的免疫抑制效应，似乎免疫机能得到一定恢复，但是我们检测结果是：CD3⁺及CD4⁺／CD8⁺比值较放疗前进一步下降，差异显著，表明放疗后可致宿主细胞免疫功能进一步降低。一方面放疗在杀伤肿瘤细胞的同时，也杀伤了对射线敏感的T细胞。T细胞亚群之间存在不同的辐射敏感性，辅助性T细胞比抑制性T细胞敏感，抑制性T细胞间辐射敏感性亦不同^［6］。放疗结果致使CD4⁺／CD8⁺比值下降、细胞免疫功能抑制，减弱宿主免疫细胞抗肿瘤的能力，引起肿瘤的局部复发或转移，那么如何在放疗同时结合免疫治疗，增强机体的免疫功能，来提高淋巴细胞对放射线的耐受能力，并恢复CD4⁺／CD8⁺比值，乃是今后提高治疗肿瘤疗效延长生存期的重要课题。■

　　作者简介：郭占文，男，35岁，主治医师，硕士，主要从事肿瘤放疗与免疫治疗研究

　　参考文献：

　　［1］刘树铮. 辐射免疫学. 北京：人民卫生出版社，1985:196-247

　　［2］葛振华，方集今，王若愚 et al.扶正培本对癌症病人T细胞亚群和NK细胞的影响．中国实验临床免疫学杂志，1990；2(4)：38

　　［3］周　决，曹世龙，邱杏仙 et al.放疗后肿瘤患者机体免疫功能改变初探．上海免疫学杂志，1996；16(1)：22

　　［4］梅殿珍子.放疗治疗による免疫リンバ系统细胞の障害な中心として ．癌の临床，1987；33：1229

　　［5］李求是，张遵一，李华顺. 肿瘤患者手术前后T细胞亚群、细胞毒性细胞因子及血浆抑制因子变化．中国免疫学杂志， 1992；8(4)：247

　　［6］Uckum F M，Chorba T L，Cleary P L et al．Radiation sensitivity of human B-lineage lymphoid precursor cells.Int J Radiat Oncol Biophys， 1991;21(6):1553

收稿日期：1997-11-24

修回日期：1998-08-31