转化生长因子β1、表皮生长因子受体表达与非小细胞肺癌淋巴结转移及预后的关系

临床与实验病理学杂志 1999年第1期第15卷 论著

作者：邹伟　杨梅怀　古宝亮　张岩峰　朱红

单位：邹伟　杨梅怀　古宝亮　张岩峰　朱红（青岛市肿瘤医院肿瘤研究室，青岛　26600）

关键词：肺肿瘤；转化生长因子β1；表皮生长因子；受体；预后

　　摘要　目的：探讨转化生长因子β1(TGFβ1)、表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌中的表达及意义。方法：应用免疫组化法检测了121例非小细胞肺癌标本中TGF β1、EGFR的表达。结果：TGF β1在肺癌中的阳性表达分为间质型和胞浆型，总阳性表达率为77.7%。TGF β1的阳性表达类型与肺癌的淋巴结转移及预后有关，淋巴结转移阳性组TGF β1的单一间质阳性表达率显著低于淋巴结阴性组，而单一胞浆阳性表达率高于淋巴结阴性组；半年内死亡组的TGF β1单一间质阳性表达率低于5年以上生存组，而间质胞浆均阳性的表达率及单一胞浆阳性表达率则高于5年以上生存组(P均＜0.05)。EGFR阳性表达率为43.8%，其表达与淋巴结转移无关；与患者预后关系明显，EGFR阳性表达者预后差(P＜0.05)。结论：TGF β1、EGFR表达与肺癌恶性生物学行为关系明显，是评估患者预后的有效参数。

　　中国图书分类号　R734.2； R392　　文献标识码　A　　文章编号　1001-7399（1999）01-0024-03

Relationship between expression of transforming growth factor β1、epidermal growth factor receptor in non-small cell lung carcinoma and lymph node metastasis、prognosis

Zou Wei, Yang Meihuai, Gu Baoliang et al

　　(Dept of Pathol, Qingdao Medical College, Qingdao　266021)

　　ABSTRACT　Purpose　To study the significance of transforming growth factor β1 (TGF β1) and epidermal growth factor receptor (EGFR) in non-small cell lung carcinoma (NSCLC).Methods　The expressions of TGF β1 and EGFR were detected in 121 cases of NSCLC with immunohistochemistry.Results　Expression of TGF β1 had two types: mesenchymal type and cytoplasma type. The total positivity rate was 77.7%. The type of TGF β1 expression was related with lymph node metastasis and prognosis of patients. The positivity rate of TGF β1 expression only in mesenchyma in the group on lymph node metastasis was significantly lower than that in no lymph node metastasis, but the positivity rate of TGF β1 expression only in cytoplasma was higher. The prognosis of TGF β1 expression only in mesenchyma was better, but the prognosis of TGF β1 expression only in cytoplasma or both mesenchyma and cytoplasma was poor. The positivity rate of EGFR expression was 43.8%. It was not correlated with lymph node metastasis. The prognosis of that with EGFR expression was poor.Conclusion　The expressions of TGF β1 and EGFR are correlated with malignant biological behavior of NSCLC, and have important value on predicting the prognosis of patient with NSCLC.

　　KEY WORDS　lung neoplasms; transforming growth factor β₁; epidermal growth factor, receptors; prognosis

　　转化生长因子β1(TGF β1)是一种多功能多肽生长因子，对不同类型的组织细胞可发挥不同的生物学作用。由于TGF β1能抑制大多数正常上皮细胞及多种上皮性肿瘤的生长，因而被认为是机体主要的负调控生长因子^〔1〕。但近年来对其在肿瘤中作用，研究报道不一致^〔1，2〕。表皮生长因子受体(EGFR)是一种细胞膜受体，其过度表达及自身激活与肿瘤发生发展的关系日益受到重视。我们应用免疫组化LSAB法，检测121例非小细胞肺癌中TGF β1和EGFR的表达，探讨其与淋巴结转移及预后之间的关系。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　收集我院胸外科1989～1991年手术切除的非小细胞肺癌标本121例，其中男83例，女38例，年龄27～74岁，平均57±10.04岁；患者术前均未进行过放疗和化疗。所有病例术后均随访5年以上，其中术后0.5年内死亡者24例，0.5～5年内死亡者60例，生存5年以上者37例。标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。按WHO(1981)分类标准进行病理分型：鳞癌53例，腺癌48例(腺泡细胞癌28例，乳头状腺癌12例，支气管肺泡癌5例，实体粘液癌3例)，大细胞癌16例，腺鳞癌4例。

　　1.2　研究方法　应用LSAB免疫组织化学方法进行检测。单克隆抗体TGF β1和EGFR及LSAB试剂盒均为美国Zymed公司产品(购自于北京中山生物技术有限公司)。二种抗体稀释度均为1∶50，置于4℃冰箱过夜，DAB显色。用已知大肠癌阳性切片做阳性对照，以PBS代替一抗做阴性对照。

　　1.3　统计学分析　应用χ²检验进行统计学处理。

　　2　结果

　　2.1　TGF β1、EGFR在非小细胞肺癌中的表达　TGF β1在非小细胞肺癌中阳性表达可分为间质型和胞浆型：间质型阳性显色位于癌巢周围纤维结缔组织近癌巢处(图1)及癌旁纤维间质内；胞浆型阳性显色均位于癌细胞胞浆内(图2，3)，呈弥漫或局灶性。TGF β1在非小细胞肺癌中的总阳性表达率为77.7%(94/121)，其中单一间质型阳性表达率为38.0%(46/121)，单一胞浆型阳性表达率为11.6%(14/121)，间质及胞浆TGF β1均呈阳性的表达率为28.1%(34/121)。统计学处理，间质型阳性表达率显著高于胞浆型(P＜0.05)。

图1 低度恶性B细胞非霍奇金恶性淋巴瘤CD₂₀染色阳性。S-P×400

图2 低度恶性B细胞非霍奇金恶性淋巴瘤CD₃染色阴性。S-P×400

图3 高度恶性B细胞非霍奇金恶性淋巴瘤CD₂₀染肥阳性。S-P×400

　　EGFR阳性表达率为43.8%(53/121)，阳性显色主要位于癌细胞胞膜处(图4)，部分癌细胞胞浆也呈阳性表达；而肿瘤间质及癌旁正常组织内均为阴性。

图4 高度恶性B细胞非霍奇金恶性淋巴瘤CD₃染色阴性。S-P×400

图5 低度恶性T细胞非霍奇金恶性淋巴瘤CD₂₀染肥阳性。S-P×400

图6 低度恶性T细胞非霍奇金恶性淋巴瘤CD₃染色阴性。S-P×400

图3 高度恶性B细胞非霍奇金恶性淋巴瘤CD₂₀染肥阳性。S-P×400

图8 高度恶性T细胞非霍奇金恶性淋巴瘤CD₃染色阴性。S-P×400

　　TGF β1、EGFR表达与非小细胞肺癌的组织分型、肿瘤大小均无显著关系(P均＞0.05)。TGF β1与EGFR表达间无相关性(P＞0.05)。

　　2.2　TGF β1、EGFR表达与淋巴结转移的关系　由表1可见，TGF β1表达与非小细胞肺癌淋巴结癌转移间有显著关系，淋巴结癌转移阳性组TGF β1单一胞浆阳性表达率高于淋巴结阴性组；而单一间质阳性表达率则低于淋巴结阴性组(P均＜0.01)。TGF β1间质胞浆均阳性表达及均阴性表达与淋巴结转移无相关性。EGFR表达与淋巴结癌转移间关系不明显(P＞0.05)。

　　2.3　TGF β1、EGFR表达与患者预后的关系　由表2可见，TGF β1及EGFR表达均与患者的预后关系明显，半年内死亡组TGF β1单一胞浆型阳性表达率、间质胞浆均阳性表达率及EGFR阳性表达率高于5年以上生存组(P均＜0.05)，说明当胞浆出现TGF β1阳性时，其预后明显差于胞浆阴性组；而半年内死亡组TGF β1单一间质型阳性表达率则低于5年以上生存组(P＜0.05)。TGF β1间质胞浆均阴性表达与患者预后关系不明显(P＞0.05)。

表1　TGF β1、EGFR表达与非小细胞肺癌淋巴结转移的关系

与淋巴结转移阳性组比较，^*P＜0.05

表2　TGF β1、EGFR表达与非小细胞肺癌患者预后的关系

　　与预后＞5年组比较，^*P＜0.053　讨论　　早在1984年，就有学者提出TGF β1可能是一种多肽性细胞生长负调控因子^〔3〕。后来试验证明TGF β1对多种上皮性肿瘤细胞(如肺癌、乳腺癌、结肠癌等)的体外增殖起负调控生长作用^〔4〕。但这些研究是用外源性TGF β1，或用抗TGF β1抗体中和细胞培养上清液中的活性TGF β1，来评估TGF β1的功能。近来研究发现，TGF β1在调节细胞的生长与分化过程中具有多种生物学功能，而且其作用常表现为双向性，既能抑制细胞增殖，诱导细胞分化；又能抑制淋巴细胞的活性，协助肿瘤逃逸机体的免疫监视，促进血管的生长和肿瘤生长等。

　　TGF β1与肿瘤生物学行为之间的关系，文献报道不一致。Murray等^〔5〕报道TGF β1的表达同乳腺癌淋巴结转移之间呈倒置关系，TGF β1阳性表达者淋巴结转移能力弱；而Albo^〔6〕则认为TGF β1能够刺激肿瘤的浸润和转移。关于肺癌中TGF β1表达的研究，国内文献中尚未见报道。本研究结果中，77.7%的肺癌病例组织中TGF β1呈阳性表达，其阳性表达可呈间质和胞浆型，这与文献^〔7〕中关于肝脏疾患的报道相符；且本研究表明TGF β1的阳性表达类型不同，其与肺癌淋巴结转移与预后之间的关系亦不同。TGF β1调节生长和分化的功能主要表现为对间质纤维的促生长作用及对上皮细胞和淋巴细胞的抑制作用。本研究中，淋巴结转移阴性组TGF β1单一间质阳性表达率高于淋巴结转移阳性组；有报道^〔6〕指出TGF β1能够通过促进间质纤维细胞的生长，促进肿瘤细胞外基质成分的合成，抑制其降解，限制肿瘤的浸润和转移，本研究结果与此相符，但胞浆出现TGF β1阳性表达者淋巴结转移能力强，患者预后差。Robert等^〔8〕指出TGF β1有广泛的免疫抑制作用，可能通过破坏机体的免疫监视和免疫杀伤作用，促进肿瘤的生长。高平等^〔2〕报道TGF β1的瘤内表达能够促进肿瘤的生长，且TGF β1必须与细胞胞膜上的TGF β1受体结合才能发挥其生物学功能。Bedossa等^〔7〕发现胞浆TGF β1阳性的肝癌细胞，其细胞胞膜的TGF β1受体缺失，使细胞失云了TGF β1的抑制功能，导致细胞增殖能力明显增强。我们的结果支持这一观点。因此可认为，在探讨TGF β1与肿瘤生物学行为的关系时，明确其表达部位是关键。

　　EGFR是一种细胞膜受体，能与EGF及TGF α等有效结合，引起细胞增殖。在病理状态下，EGFR可能存在自身激活从而导致细胞的异常增殖，并在细胞的恶性转化中发挥重要作用。本研究中，43.8%的非小细胞肺癌标本EGFR过度表达，癌旁非肿瘤组织均为阴性，这与文献报道相符，表明EGFR过度表达与非小细胞肺癌的发生发展关系密切。关于EGFR表达与肺癌生物学行为关系的研究较多，但结果亦不一致。Dazzi等^〔9〕报道EGFR表达与非小细胞肺癌淋巴结转移及预后均无明显关系。而Veale等^〔10〕发现EGFR表达水平较高的非小细胞肺癌患者，其生存期明显短于EGFR水平较低者。本研究结果中EGFR表达与非小细胞肺癌淋巴结转移无明显关系，但与患者预后密切相关，EGFR阳性表达者预后明显差于EGFR阴性者。这与Veale等^〔10〕结果相符，支持其“EGFR在估测非小细胞肺癌患者预后方面具有独立作用，而不受其它因素的影响”的观点。

　　作者简介：邹　伟，男，30岁，硕士，讲师

　　杨梅怀，女，68岁，教授，硕士生导师。研究方向：胸部肿瘤病理学

　　参考文献

　　1，Massague J. Receptors for the TGF β1 family. Cell，1992；69：1067

　　2，高　平，陆应麟，葛学铭等.TGF β1直接瘤内注射对小鼠肿瘤生长的影响.中华肿瘤杂志，1997；19：93

　　3，Tuker RF, Shipley GD, Moses HL et al. Growth inhibitor from BSL-1 cells is closely related to the platelet type B transforming growth factor: Science, 1984;224:705

　　4，Arteage CL, Coffey RJ, Dugger TC et al. Growth stimulation of human breast cancer cells with anti-transforming growth factor β antibodies: evidence for negative autocrine regulation by transforming growth factor β. Cell Growth Differ, 1990;1:367

　　5，Murray PA, Barret LP, Travers M et al. The prognostic significance of transforming growth factors in human breast cancer. Br J Cancer, 1993;67:1408

　　6，张祥生，王子明.转化生长因子β对细胞外基质的作用.国外医学肿瘤学分册，1996；23(增刊)：27

　　7，Bedossa P, Peltier E, Terris B et al. Transforming growth factor-beta 1 (TGF β1) and TGF β1 receptors in normal, cirrhotic, and neoplastic human livers. Hepatology, 1995;21:760

　　8，Reborts AB, Anzano MA, Wakeifield LM et al. Type β tranforming growth factor: a bifunctional regulator of cellular growth. Proc Natl Acad Sci USA, 1985;82:119

　　9，Dazzi H, Haleston PS, Thatcher N et al. Expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) in non-small cell lung cancer: use of archival tissue and correlation of EGFR with histology, tumor size, node status and survival. Br J Cancer, 1989;59:746

　　10，Veale D, Kerr N, Gibson GJ et al. The relationship of quantitative epidermal growth factor receptor expression in non-small cell lung cancer to long term survial. Br J Cancer, 1993;68:162

(图片见插页第6页)

　　收稿日期：1998-04-10