痰细胞基因突变的检测对肺癌诊断价值的研究

中华肿瘤杂志 1998年第4期第0卷 简报

作者：张贺龙　王文亮　崔大祥

单位：710032 西安第四军医大学肿瘤研究所［张贺龙(现在工作单位：710038 第四军医大学唐都医院)、王文亮］；全军基因诊断研究所(崔大祥)

　　肺癌是常见恶性肿瘤，其发病率和死亡率都很高，寻找早期诊断肺癌的方法十分必要。分子生物学技术的发展为肺癌的基因诊断提供了可能。我们应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)对肺癌患者痰细胞的p53基因突变进行了检测。

　　材料与方法　选取第四军医大学附属第二医院住院肺癌患者36例，其中男24例，女12例，平均年龄58±8.2岁(41～72岁)。据TNM分期标准，Ⅱ期14例，Ⅲ期22例；鳞癌18例，腺癌12例，小细胞肺癌4例，大细胞肺癌2例。肺癌组织标本取自患者手术切除之新鲜肺癌组织；患者术前留取痰液(每日1～2口，共3天)；对照组20例，组织标本为随癌切除的正常肺组织，痰标本取自支气管炎、肺炎患者。应用酚-氯仿法提取组织和痰细胞DNA，行PCR-SSCP分析(p53扩增反应针对第5～8外显子，引物由中科院上海生化所合成)。痰液用生理盐水洗涤离心3次，沉淀涂片，H-E染色后行普通痰瘤细胞学检查。

　　结果　36例肺癌患者中，19例在组织标本中检测到p53基因的突变(Ⅱ期6例，Ⅲ期13例)，阳性率52.78%；15例痰液中检测到p53基因的突变，阳性率41.67%，且均存在于19例组织标本p53基因突变阳性患者中；对于组织标本p53基因突变阳性患者，PCR-SSCP法检测痰细胞p53基因突变的阳性率为78.95%。普通痰细胞学检查阳性率55.56%(20/36)。20例组织和痰液对照标本中，未检测到p53基因的突变。

　　讨论　肺癌的发生与多种癌基因和抑癌基因有关，通过对这些癌基因和抑癌基因进行检测，可进行肺癌的基因诊断。大约60%的肺癌患者存在着p53基因的异常，肺癌的p53基因异常主要是点突变，突变部位主要位于第5～8外显子。PCR-SSCP分析是目前检测基因突变的常用方法，具有灵敏、相对简单、同时检测多个标本等优点。我们对肺癌切除组织的检测表明，超过半数的患者有p53基因的突变，说明p53基因突变在肺癌中比较普遍。但检测肺癌切除组织的基因突变不能用于患者的术前临床诊断和非手术患者，实际临床诊断意义不大。痰瘤细胞学检查是临床上诊断肺癌的常用方法，取材方便，操作简单，但敏感性偏低。PCR技术能够检测极微量的标本，可用于检测痰液中存在的少量肿瘤细胞，提高痰细胞学检查的敏感性。本研究应用PCR-SSCP技术对痰细胞的p53基因突变进行检测以诊断肺癌，其总的阳性率为41.67%，低于普通痰细胞学检查。但在19例肺癌切除组织p53基因突变检测阳性的患者中，PCR-SSCP法痰检的阳性率达到78.95%，明显高于普通痰细胞学检查(P＜0.01)。PCR-SSCP分析的总阳性率较低，除方法本身因素外，主要是由于所检测的p53基因在肺癌中的突变率不够高的缘故。

(收稿：1997-10-24　　修回：1998-04-07)