鼻咽癌中cyclin D₁、p16、Rb蛋白表达及意义

临床与实验病理学杂志 1999年第4期第15卷 论著摘要

作者：陈莉　王桂兰　曹晓蕾

单位：陈莉　王桂兰　曹晓蕾（南通医学院病理学教研室，南通　226001）

关键词：鼻咽肿瘤；癌基因蛋白质类；视网膜母细胞瘤蛋白质；cyclin；D₁；p16；免疫组织化学

　　分类号　R739.63；R392.3　文献标识码　A

　　 文章编号　1001-7399(1999)04-0362-01

　　细胞增殖周期失控是肿瘤发生的关键之一，也是近年来分子生物学研究的热点之一。我们通过对50例鼻咽癌(NPC)中细胞周期素D₁(cyclin D₁)、多肿瘤抑制基因(multiple tumor suppressor, MTS₁)的表达产物p16蛋白、视网膜母细胞瘤易感基因编码的核磷酸蛋白(Rb)表达的研究，探讨这些细胞增殖周期调控因子在NPC增殖过程中的作用及其它们之间的相互关系，从细胞增殖、调控的角度深入了解NPC的发生学，为今后对NPC进行基因治疗提供线索。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　50例NPC选自于南通医学院附属医院1993～1995年存档活检蜡块标本。

　　1.2　方法　免疫组织化学LSAB法染色。分别检测NPC组织中的cyclin D₁、p16、Rb及细胞角蛋白表达。

　　1.3　判断标准　cyclin D₁、Rb阳性细胞定位于细胞核内，p16表达还可见于胞浆中，呈棕褐色。根据阳性细胞在切片中所占的面积百分比分为：无阳性细胞为“-”，＜25%者为“+”，25%～50%者为“”，≥50%者为“”。

　　1.4　统计学处理　所有统计数据经χ²检验。

　　2　结果

　　2.1　免疫组化分型　50例经免疫组化细胞角蛋白反应均为阳性，证实为来源于上皮的肿瘤。经WHO分类^〔1〕分为非角化性NPC(WHO Ⅱ)和未分化型(WHO Ⅲ)，按其生长方式^〔2〕分巢状膨胀性生长(Regand，R型)、弥漫浸润性生长(Schmincke，S型)，同时存在R和S型时为混合型(combination，C型)。本组NPC发生转移24例。

　　2.2　NPC中cyclin D₁、p16、Rb的表达　50例NPC中cyclin D₁阳性表达于癌细胞核内，阳性表达率56%(28/50)；p16阳性表达于癌细胞核和(或)胞浆中，阳性表达38%(19/50)；Rb阳性表达于癌细胞核内(所有核分裂细胞均为阳性)，阳性表达72%(36/50)。

　　2.3　cyclin D₁、p16、Rb在NPC不同生长方式、分化分型、转移状态中的表达(表1)　由表可见在NPC不同生长方式中cyclin D₁表达明显差异(χ²=9.69，P＜0.01)，在NPC呈R型生长时癌中cyclin D₁阳性率增加。非角化性NPC(WHO Ⅱ)中Rb表达阳性率显著高于未分化的WHO Ⅲ型NPC(χ²=6.91，P＜0.05)。p16表达阳性率在有转移的NPC中比较无转移的NPC中显著减少(χ²=8.91，P＜0.05)。

表1　cyclin D₁、p16、Rb表达与NPC生长方式、分化、转移的关系

　　2.4　在NPC中cyclin D₁、p16和Rb三者间的相互关系　NPC中p16与Rb表达阳性率之间有显著的负相关(χ²=9.20，P＜0.01)。Rb阴性时p16阳性71.43%(10/14)，Rb阳性时p16阳性率减少到25.00%(9/36)。cyclin d₁与p16之间，cyclin D₁与Rb之间均未见显著相关性(P＞0.05)。

3　讨论

　　本文结果显示NPC中cyclin D₁过表达为56%，说明NPC中cyclin D₁过表达是个常见的分子现象。cyclin D₁阳性率与NPC生长方式密切相关，在巢性膨胀性生长中，cyclin D₁阳性率显著高于其它生长类型，认为cyclin D₁在NPC发生中是个早期事件，促进癌细胞增殖与加速生长。

　　本文p16阳性率为38%，有52%的NPC中p16不表达，证明NPC中p16基因改变是常见的。虽然文献报道NPC p16无点突变，但是我们认为在NPC形成中，p16表达减少、低调或同源性缺失，基因失活可能在NPC发生中起作用。特别是NPC发生转移时p16表达显著减少，说明p16改变在NPC发生中是晚期事件。

　　本组文检测到NPC中Rb蛋白表达率为72%，Rb表达在非角化性NPC(WHO Ⅱ型)中显著高于未分化(WHO Ⅲ型)，与癌生长方式和转移无关。

　　Rb调控G₁期停滞的作用受cyclin D₁和p16两个因素的调节。本文结果显示Rb阳性时p16表达减少，为25%，Rb阴性时p16阳性率升高，为71.43%，两者呈显著负相关，其机制可能为某些因素(如cyclin D₁)CDK₄被激活扩增时引起Rb在G₁期失活将导致p16蛋白表达增加以抑制CDK₄的活性，相反当Rb高表达时，p16表达减少可获得高水平的CDK₄足以使多余的Rb蛋白灭活。虽然本文未发现明显的cyclin D₁与p16表达和Rb失活之间有负相关性，但在NPC中三者异常可同时存在参与肿瘤发生。

　　基金项目：美国中华医学基金会(CMB)资助项目(No 13729)南通市科委资助项目(No 9608)

收稿日期：1998-08-25

　　修回日期：1999-03-31