PML生长抑制因子在前列腺癌组织中的表达及其意义

中华泌尿外科杂志 1998年第11期第19卷 论　著

作者：贺大林　Zhau HE　南勋义　Chang KS　Chung LWK

单位：710061　西安医科大学第一附属医院泌尿外科(贺大林、南勋义)；美国德州大学医学院M.D安德森癌症中心(Zhau HE，Chang KS，Chung LWK)

　　关键词： 前列腺肿瘤；癌；免疫学技术

　　摘要　应用免疫组化方法检测了40例不同分化程度的前列腺癌组织中早幼粒细胞白血病基因(PML)蛋白的表达变化。结果显示：PML蛋白在癌组织中的表达总水平较其周围的非癌组织中明显减弱,而低分化和未分化癌组织中的表达总水平又较高、中分化癌组织明显减弱,其中一些呈浸润生长的低分化癌组织PML蛋白表达甚至消失。提示PML蛋白表达变化可能和前列腺癌的分化、浸润转移有关。

　　Expression of PML growth suppressor in prostate cancer　　He Dalin,Zhau HE,Nan Xunyi,et al.Department of Urology,the First Affiliated Hospital,Xian Medical University,Xian 710061

　　Abstract　The expression of PML growth suppressor was detected in 40 specimen of prostate cancer with immunohistochemical techniques using polyclonal antibody.The result indicated that the expression of PML protein is weak in cancer tissues as compared with the peripheral normal tissues.Some of the poor differentiation cancer tissues revealed very weak expression or lost expression of PML.Taken together,our findings suggest that PML expression may be related to the differentiation、invasion、even metastasis of prostate cancer.

　　Key words　Prostate neoplasms　　Carcinoma　　Immunologic technics

　　早幼粒细胞白血病基因(PML)编码的蛋白质是一种广谱的生长抑制因子和转录抑制因子。体外实验和裸鼠体内试验研究均表明PML蛋白表达对多种肿瘤细胞生长及致瘤能力具有明显的抑制作用。其表达变化可能与乳腺癌、结肠癌的局部浸润转移有关。我们应用免疫组化方法研究了PML生长抑制因子在前列腺癌组织中的表达分布情况，探讨其意义。

材料与方法

　　一、一般资料

　　前列腺癌患者40例。年龄53～85岁。其中高分化4例，中分化15例，低分化和未分化21例。所有标本均经病理组织学证实，10%甲醛液固定，石蜡包埋，切片厚4μm，备染。

　　抗PML抗体由美国德州大学医学院M.D.安德森癌症中心Dr Chang实验室提供，免疫组化用二抗（Multi-link)、三抗（Label Reagent）、AEC染液购自美国Biogenex公司。

　　二、免疫组化方法

　　切片常规脱蜡、水化，95℃热浴10分钟，3%H₂O₂中和内过氧化物酶20分钟,100%Super Block液(美国Scytek公司产品)室温浴15分钟,一抗(兔抗人PML抗体 1∶3 000)室温浴2小时,PBS洗涤5次,二抗(Multi-link 1∶25)室温浴20分钟,PBS洗涤5次,三抗(LabelReagent 1∶25)室温浴20分钟,PBS洗涤5次,AEC显色,清水漂洗,封片。应用兔血清代替一抗,作为阴性对照。

　　三、结果判断

　　所有阳性染色为细胞核红染，随机观察5～10个视野，计算300个细胞核（只计算腺上皮细胞或癌细胞）。PML染色强度分为0～3级，0级为阴性，1级为弱阳性，2级为阳性，3级为强阳性；计算不同染色强度百分比。计算总染色强度（公式为各染色强度与其百分比乘积之和），平均总染色强度（公式为：平均总染色强度＝各组总染色强度之和/各组病例数）^［1］。

　　四、统计学方法

　　t检验比较各组平均总染色强度。

结　　果

　　免疫组化染色结果显示，PML生长抑制因子在癌旁正常组织中的表达比较一致，大部分腺体细胞核均匀染色，染色强度多为2～3级，基质细胞和血管内皮细胞也呈均匀阳性染色（图1）。平均总染色强度为261.5±17.2，而癌组织中的PML蛋白表达差异较大，强弱不等，甚至在同一癌区域、癌细胞之间的表达也相差甚远，其平均总染色强度较其周围非癌组织明显减弱，在部分呈浸润生长的低分化腺癌细胞PML蛋白表达很弱，甚至丧失表达（图2），但其周围基质细胞和血管内皮细胞染色均匀阳性（2～3级），与癌旁正常组织中一致。中高分化癌19例癌组织PML平均总染色强度为146.7±25.3，低分化和未分化癌21例癌组织平均总染色强度为71.6±32.0。癌旁非癌组织40例，PML平均总染色强度261.5±17.2；t检验比较癌旁组织，中高分化癌组织和低分化、未分化癌组织中PML蛋白表达强度变化均有显著性差异(P均＜0.01)。

　　阴性对照结果显示无论腺上皮细胞癌细胞或其周围基质细胞、血管内皮细胞均无着色现象。

讨　　论

　　位于15号染色体上的PML基因与17号染色体上的维甲酸α受体（RARα）基因易位后编码的PML/RARα蛋白和RARα/PML蛋白在急性早幼粒细胞白血病的发生、发展过程中起着十分重要的作用,研究认为与这两个基因编码的蛋白质功能异常有密切关系^［2，3］。新近研究发现,PML基因编码的蛋白质是一种生长抑制和转录抑制因子,并在体外和裸鼠体内实验研究中得到了证实^［4，5］。Koken等^［6］用免疫组化的方法进一步研究了该蛋白在结肠癌、乳腺癌组织中的表达变化,发现当癌细胞发生局部浸润转移时,PML蛋白表达减少甚至丧失。认为PML蛋白可能和癌症的浸润转移有关。

　　图1　免疫组化检测结果。PML蛋白在正常前列腺上皮细胞的阳性(2～3级)表达，腺体之间的基质细胞和血管内皮细胞也呈阳性(2～3级)表达

　　图2　免疫组化检测结果。PML蛋白在低分化并呈浸润生长的癌细胞的表达几乎丧失，但其周围的基质细胞和血管内皮细胞仍呈阳性(2～3级)表达

　　关于PML生长抑制因子与前列腺癌的关系国内外还未见报道。应用腺病毒载体携带PML基因感染培养的人前列腺癌细胞,成功地将PML基因导入癌细胞并得到高效表达。发现高效表达PML蛋白的前列腺癌细胞生长受到明显抑制^［7］，证实了PML蛋白是一种广谱的细胞生长抑制因子，它不但在急性早幼粒细胞白血病的发生发展过程中起着十分重要的作用,也可能和包括前列腺癌在内的其它实体肿瘤的发生、发展、浸润转移有关。尽管PML蛋白在体外实验中显示了其抑制癌细胞生长的作用,但在前列腺癌细胞中的表达变化研究尚未见报道。我们应用免疫组化方法研究了PML蛋白在不同分化前列腺癌组织中的表达变化并与邻近非癌组织进行比较研究,发现PML蛋白在前列腺癌组织中的表达变化差异较大,但总的趋势是较癌旁组织明显减弱,其中呈浸润生长的低分化、未分化癌细胞PML蛋白表达明显减弱甚至丧失。这一结果与Koken等^［6］在乳腺癌和结肠癌组织中的研究结果基本一致。提示PML蛋白的表达丧失可能也和前列腺癌细胞的浸润转移有关。

　　我们进一步比较了不同分化的前列腺癌组织中PML蛋白表达变化,发现PML蛋白的表达减弱和癌细胞分化相关,分化差的癌组织PML蛋白表达弱,提示了PML蛋白可能和前列腺癌细胞的分化程度有关。本组40例标本来自于不同国家且随访资料不全,尚无法研究PML蛋白表达变化与患者预后的关系。因此,关于 PML蛋白与肿瘤分级、分期、浸润转移及预后的关系还有待更深入地研究。

参　考　文　献

　　1　Miyamoto KK,McSherry SA,Dint GA,et al.Immunohistochemistry of the androgen receptor in human benign and malignant prostate tissue.J Urol,1993,149∶1015-1019.

　　2　Chang KS，Stass SA，Chu DT,et al.Characterization of a fusion cDNA(RARA/myl) transcribed from the t(15；17) translocation breakpoint in acute promyelocytic leukemia.Mol Cell Biol,1992,12∶800-810.

　　3　Goddard A,Borrow J,Freemont PS,et al.Characterization of a zinc finger gene disrupted by the t(15;17) in acute promyelocytic leukemia.Science,1991,254∶1371-1374.

　　4　Mu ZM,Chin KV,Liu JH,et al.PML,a growth suppressor disrupted in acute promyelocytic leukemia.Mol Cell Biol,1994,14∶6858-6867.

　　5　Liu JH,Mu ZM,Chang KS.PML suppresses oncogenictransformation of NIH 3T3 cells by activated neu.J Exp Med,1995,181∶1965-1973.

　　6　Koken MHM,Cruz GL,Quignon F,et al.The PML growth-suppressor has an altered expression in human oncogenesis,Oncogene,1995,10∶1315-1324.

　　7　He D,Mu ZM,Le X,et al.Adenovirus-mediated expression of PML suppresses growth and tumorigenicity of prostate cancer cells.Cancer Res,1997,57∶1868-1872.

(收稿：1997-10-20　修回：1998-06-01)