bcl-2、p53、CathepsinD、PSA表达与乳腺癌预后的关系

癌症 2000年第5期第19卷 基础研究

作者：卢义生　李峰　吴秋良　李莉　王晓文　尹有群

单位：李峰(广东省第二中医院外妇科，广东 广州510095)；卢义生　吴秋良　李莉　王晓文(　尹有群(广东省东莞市人民医院病理科，广东 东莞523018)

关键词：乳腺肿瘤；蛋白质bcl-2；蛋白质p53；组织蛋白酶D；前列腺特异性抗原；预后；免疫组织化学

　　【摘要】目的：探讨bcl-2、p53、CathepsinD(CD)和前列腺特异性抗原（PSA）表达与乳腺癌预后的关系。方法：应用免疫组化LSAB方法检测64例乳腺癌及30例乳腺良性病变的表达。分析bcl-2、p53、CD和PSA与乳腺癌组织学分级、腋淋巴结转移、复发和预后的关系。结果：bcl-2、p53表达之间有显著性差异（P＜0.05），呈负相关；bcl-2与CD和PSA表达之间均无关（P＞0.05）。bcl-2表达随组织学分级增加阳性率降低，p53则相反；CD和PSA表达与组织学分级无关（P＞0.05）。p53和CD表达均与腋淋巴结转移呈正相关(P＜0.05)，PSA表达则呈负相关（P＜0.05）；bcl-2表达与腋淋巴结转移无关（P＞0.05）。p53表达复发组明显高于无复发组（P＜0.05），bcl-2、CD和PSA表达与有无复发均无关（P＞0.05）。p53和CD表达阳性率≤5年生存组均明显高于＞5年生存组(P＜0.05和0.01)，呈负相关；PSA表达则相反。bcl-2表达与生存期无关（P＞0.05）。结论：bcl-2表达与预后无关，其阳性表达可反映肿瘤属分化较好或属早期阶段。p53、CD和PSA均可单独作为乳腺癌的预后指标；p53和CD表达均与预后呈负相关，PSA表达与预后呈正相关。

　　中图分类号：R737.9；R392.31文献标识码：A文章编号：1000－467X(2000)05－0442－04

The relationship between expression of bcl-2,p53, Cathepsin D and PSA and prognosis of breast cancer

LU Yi-sheng, LI Feng, WU Qiu-liang, et al.

　　(Department of pathology, People's Hospital of Dongguan City,Dongguan 523018,P.R.China)

　　【 Abstract】 Objective： To clarify the relationship between the expression of bcl-2,p53,Cathepsin D(CD) and the prostate-sepcific antigen(PSA) and prognosis of breast cancer. Methods： The bcl-2,p53,CD and PSA expression in 64 cases of breast cancer and 30 cases of benign Lesion using LSAB immunohistochemical method,and the results determined by correlated histological grade,axilla lymph node metastasis,recurrent and prognosis of the patients. Results： ① Inverse correlation was found between the expression of bcl-2 and p53（ P＜0.05） .The relationship between bcl-2 expression and other protein, was not signifiant（ P＞0.05） .② The between expression of bcl-2 and p53 significant by correlated with histological grade（ P＜0.05） . Specifically bcl-2 was more frequently detected in well differentiated carcinomas while p53 was more frequently expression in poorly differentiated carcinomas.The expressed of CD and PSA did not relatel to histolgical grade （ P＞0.05） .③ The expression of p53,CD and PSA were related to axilla lymph node metastasis （ P＜0.05） . The p53 and CD were posifively correleted with axilla lymph node metastasis while and PSA was negative. The expression of bcl-2 was no related to the metastasis （ P＞0.05） . ④ The expression of p53 was more frequently detected in recurrent than that in nonrecurrent tumors （ P＜0.05） .However bcl-2,CD,PSA were not related to recurrence (P＞0.05). ⑤ The expression of p53 and CD were more frequent in tumore with ≤ 5 year surival than that with ＞ 5 year surival （ P＜0.05 and 0.01） respectively and PSA was inverse （ P＜ 0.05） . The bcl-2 expression had no relat ionship with surival period （ P＞0.05） . Conclusions： Bcl-2 do not relate to prognosis,but its expression may indicate well differentiated or early stage tumor.p53,CD,and PSA may be a prognosis indicator in breast cancer.

　　Key words： Breast neoplasms; Protein bcl-2;Protein p53;Cathepsin D; Prostate-specific antigen; Prognosis; Immunohistochemistry

　　近年来研究发现细胞凋亡与肿瘤发生、发展及治疗和预后有关，并有多种基因参与调节,如抑癌基因p53、WAF-1以及癌基因bcl-2、c-myc等。目前认为bcl-2和p53在乳腺癌中的表达与乳腺癌的预后密切相关^[1,2]，近年来提出组织蛋白酶D（CD）和PSA表达可作为乳腺癌预后的新指标。由于乳腺癌发生发展的复杂性，其预后亦受多因素影响，故试图探讨上述4种蛋白表达对乳腺癌预后的价值。

　　1材料和方法

　　1.1材料选择我科1984～1996年资料较完整的乳腺癌根治标本64例，其中伴腋窝淋巴结转移41例。随访资料5年以上，最长者12年。按WHO分型属浸润性导管癌，癌组织根据Bloom-Richardson分级法分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。乳腺良性病变30例（小叶增生10例，导管内乳头状瘤10例，纤维腺瘤10例）。

　　1.2方法标本经10％福尔马林固定，常规石蜡切片厚4μm，连续切片进行HE染色和免疫组化染色。一抗为鼠抗人bcl-2(DAKO,N1587)即用型，鼠抗人p53（DAKON1581）即用型，兔抗人CD（Zymed,ZA0034）工作浓度1∶200，鼠抗人PSA（DAKO，N1550），LSABKit(DAKO,M681)。bcl-2和p53经微波修复抗原，CD和PSA经胰酶消化，一抗4℃过夜，其后步骤按LSABKit说明书操作；DAB显色，均设阳性和阴性对照。

　　1.3结果判断

　　阳性反应为细胞浆内或细胞核内出现棕黄色颗粒。根据染色强度和染色广度（％）进行打分,即每张切片染色强度：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色；染色广度：0分为阳性细胞≤10％，2分为11％～50％，3分为51％～75％，4分为＞75％。染色强度与染色广度的乘积＞3分为免疫组化反应（＋）。

　　1.4统计分析

　　采用χ2检验。

　　2结果

　　2.14种蛋白在乳腺癌组织中表达情况

　　p53表达位于细胞核（图1），bcl-2、CD和PSA均表达位于细胞浆内（图2、3和4）。bcl-2、p53、CD和PSA阳性表达率分别为33例（51.6％）、20例（31.3％）、29例（45.3％）和26例（40.6％）。30例乳腺良性病变组织中bcl-2均有不同程度的表达（100％），而p53、CD和PSA均为阴性表达。

图1　乳腺浸润性导管癌癌细胞核内有p53表达,LSAB法×400

图2～4　乳腺浸润性导管癌癌细胞浆内分别为bcl－2、CD和PSA表达,LSAB法×400

表1　四种蛋白阳性表达率和乳腺癌组织学

　　及预后的关系[例(％)]

　　各组内比＊P＜0.05，＊＊P＜0.012.24种蛋白表达之间的关系

　　本研究发现bcl-2与p53蛋白表达之间有显著性差异（P＜0.05），呈负相关。而bcl-2与CD、PSA，p53与CD、PSA和CD与PSA蛋白表达之间无显著关系0.05）。

　　2.34种蛋白表达与组织学分级及预后的关系（表1）

　　4种蛋白表达与组织学分级的关系：bcl-2和p53表达与组织学分级均有显著性差异（P＜0.05） 。 bcl-2阳性表达率组织学Ⅰ级Ⅱ级＞Ⅲ级，即分化高者阳性率高于分化低者；而p53阳性表达率正相反。CD和PSA表达与组织学分级无显著性差异（P＞0.05）。

　　4种蛋白表达与腋淋巴结转移的关系：p53、CD和PSA表达与腋淋巴结转移均有显著性差异(P＜0.05)，p53和CD阳性表达率均与腋淋巴结转移呈正相关，而PSA则呈负相关；bcl-2表达则无关（0.05）。

　　4种蛋白的表达与复发的关系：p53表达与复发有显著性差异（P0.05），复发组阳性表达率高于无复发组。bcl-2、CD和PSA表达与复发均无关（0.05）。

　　4种蛋白表达与患者生存期关系：p53、CD和PSA表达与生存期均有显著性差异（P＜0.05），p53和CD表达阳性率≤5年生存组高于＞5年生存组，呈负相关；PSA表达则相反。bcl-2表达与生存期无关（P＞0.05）。

　　3讨论

　　近年来发现bcl-2可抑制多种组织的细胞凋亡，是目前公认的抗凋亡基因。该基因通过抑制细胞凋亡，延长细胞生存而参与肿瘤发生^[3]。本组研究结果显示bcl-2在乳腺良性病变中均有不同程度的表达，在乳腺癌组织中阳性表达率为51.6％，而bcl-2表达与组织学分级呈负相关性，与腋淋巴结转移、复发及生存期均无关。表明bcl-2参与了乳腺良性病变、乳腺癌发生、发展调控，但对乳腺癌预后作用不明显。

　　本组p53在乳腺良性病变中未见阳性表达，在乳腺癌中阳性表达率为31.3％，其表达与乳腺癌组织学分级、腋淋巴结转移及复发呈正相关性，与生存期呈负相关性。这表明p53蛋白表达单因素与乳腺癌预后关系较密切，与文献[4]结果一致。

　　Bcl-2和p53蛋白在乳腺癌中表达关系密切，bcl-2的表达随p53表达增多明显减少，呈负相关性^[1,2]，本组结果显示bcl-2与p53蛋白在乳腺良性病变、乳腺癌组织学分级表达呈负相关与文献结果一致。近年来发现突变型p53抑制细胞凋亡，是由于其在mRNA及蛋白水平下调表达，从而成为bcl-2的调控因子^[2]。bcl-2异常表达往往在肿瘤早期阶段，肿瘤进展晚期基因发生了改变如c-myc、p53代替了bcl-2抗凋亡作用^[5]。事实上bcl-2和p53并非协同关系,其如何影响预后，不完全清楚,仍值得研究^[1,2]。

　　CD为一种分子量为52-KD的糖蛋白，存在于乳腺癌细胞，亦存在于乳腺组织间质中，它能降解基底膜促进肿瘤的浸润转移、刺激癌细胞生长。TandonAK对397例乳腺癌冰冻标本，用Westernblot法对CD测量，发现高水平的CD，尽管在淋巴结阴性情况下，乳腺癌患者容易早期复发或较早期死亡，认为CD可作为预后的独立指标^[6]。GohringUJ用免疫组化方法对281例乳腺导管浸润癌研究，对病人进行74个月随访发现，CD高表达尽管与淋巴结、受体或绝经等情况无关，但其提示生存期短、预后差^[7]。作者曾观察到CD高表达的乳腺癌组织与同侧腋淋巴结转移呈正相关^[8]。本组乳腺癌组织中CD表达阳性率45.3％，乳腺良性病变无1例表达，CD表达与腋淋巴转移呈正相关，与生存期呈负相关。提示CD阳性表达的乳腺癌易发生淋巴结转移，且生存期短,即预后差。

　　PSA为33KDa丝氨酸蛋白酶，是前列腺正常组织及其癌组织中特异生物化学标记物，新近研究发现其可以出现在其他部位，大约30％乳腺癌中可出现，乳腺癌中出现PSA与类固醇受体存在有关^[9]，即与PR作用有关，和ER是间接关系^[10]，PSA可能对激素依赖型乳腺癌起负性生长调节作用^[9]。PSA在乳腺癌组织中阳性表达显示预后好^[8,9],且对抗雌激素治疗效果好^[11]。本组乳腺癌组织中PSA阳性表达率40.6％,其表达与腋淋巴结转移呈负相关，与生存期呈正相关。提示PSA阳性表达淋巴结转移率低，生存期较长，即预后好。

　　综合上述4种蛋白在乳腺癌中表达情况，提示bcl-2不可单独作为预后指标，其阳性表达说明乳腺癌分化较好或早期阶段。p53、CD和PSA均可作为乳腺癌预后检测的指标。CD和PSA为较新的预后指标，文献报导多用放射免疫或免疫荧光检测癌细胞浆中PSA含量，该方法复杂设备与操作难以推广，故用免疫组化方法检测有利于基层医院推广。

　　基金项目：广东省卫生厅科研基金项目（NOA1997434）资助

　　[参考文献]

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收稿日期：1999－08－04;修回日期：1999－10－07