乳腺癌组织中基质金属蛋白酶－2、9活性检测的意义

中国肿瘤临床 2000年第6期第27卷 论著选登

作者：赵跃武　郝远瑞　孔令非　银平章

单位：赵跃武（河南省人民医院病理科，郑州市　450003）；郝远瑞（河南省人民医院病理科，郑州市　450003）；孔令非（河南省人民医院病理科，郑州市　450003）；银平章（河南省人民医院病理科，郑州市　450003）

　　基质金属蛋白酶－2、9（matrixmetalloprotein－ase－2、9，MMP－2、9）降解底物是基底膜的主要成分－Ⅳ胶原，使基底膜发生缺损，以致肿瘤细胞向周围组织浸润和转移，影响肿瘤的预后。为此，本文利用酶谱（zymography）和UVP软件检测并分析了35例乳腺癌中MMP－2、9活性，旨在探讨其与乳腺癌侵袭、转移的关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本

　　35例手术切除标本，均经病理学诊断为乳腺癌，其中转移组11例（远处淋巴结转移），浸润组14例（管状癌9例、浸润性小叶癌5例），非浸润组10例（导管内癌4例、小叶原位癌6例）；纤维腺瘤11例。组织置液氮3小时后再入－85℃。

　　1.2　蛋白提取

　　匀浆组织，提取蛋白、定量（紫外吸收法）。

　　1.3　酶谱方法

　　加蛋白样于3％浓缩胶，8％分离胶（含1％明胶，MMP－2、9的降解底物），110V，电泳。将胶置2.5％TritonX－100振荡30分钟，两次；入孵育液（50mmol/LTris，pH7.5，150mmol/LNaCl，10mmol/LCaCl₂，0.02％NaN₃）漂洗30分钟。再置孵育液（37℃）36小时后用0.5％考马斯亮蓝G250染色3小时后脱色至MMP－2、MMP－9酶消化区透明清晰为止。

　　1.4　酶活性单位U（A.mm²／10μg）

　　用英国产UVP（本科室）进行透光度测定，计算各条带的酶单位U（条带透光度－背景透光度）×面积mm²／10μg蛋白。

　　各实验组间χ²、均值采用t检验。

　　2　结果

　　2.1　酶谱分析

　　乳腺癌和良性组织均可在酶谱上显示：MMP－2在72kD和62kD处有两条透明带；MMP－9在92kD处有一明显的透明带(附图)。

A：乳腺癌　B：乳腺纤维瘤附图　MMP－2、MMP－9酶谱

　　2.2　MMP－2、9水平及活性比

　　实验发现62kD、62kD／62kD＋72kD及MMP－9的活性与乳腺癌的恶性程度有关，P＜0.01（附表）。

附表　乳腺癌组织中MMP－2、9水平及活性比

　　＊62kD:良性组与恶性组比较，P＜0.05＊＊72kD:良性组与恶性组比较，P＜0.05

　　＊＊＊62kD＋72kD:良性组与恶性组比较，P＞0.05

　　＊＊＊＊62kD/62kD＋72kD:良性组与恶性组比较；浸润组与非浸润组比较；转移组与非转移组比较，P均＜0.01

　　＊＊＊＊＊92kD:良性组与恶性组比较；浸润组与非浸润组比较；转移组与非转移组比较，P均＜0.01

　　3　小结

　　Davies和Remaxle等对乳腺癌的研究发现，62kD活性与肿瘤的分级成正比。我们检测发现乳腺癌组织中72kD低于良性组（P＜0.05）；恶性组的62kD高于良性组（P＜0.05）；从62kD／62kD＋72kD结果来看，恶性组高于良性组；浸润组高于非浸润组；转移组高于非转移组，P均＜0.01；各实验组间比较，P＜0.01，类似于国外报道。上述结果Remaxle等认为随着肿瘤的进展，宿主细胞或肿瘤细胞在收到肿瘤刺激信号后，会产生更多的膜型Ⅰ型基质金属蛋白酶（membranetype1matrixmetalloproteinase，MT1－MMP），MT1－MMP的底物是72kD，使72kD转变成62kD，相应62kD及62kD／62kD＋72kD的活性增加，直接导致基底膜的降解。提示62kD及62kD／62kD＋72kD的活性比可能是判断乳腺癌预后的主要生物学标志物。

　　据文献报道，MMP－9是基质细胞受到肿瘤细胞的刺激而分泌并受MMP－2的调控，其功能类似于MMP－2，参与基底膜的降解，在乳腺癌中高表达。我们在实验中也发现乳腺癌中MMP－9（92kD）的水平明显高于良性组；转移组高于非转移组；浸润组高于非浸润组，P均＜0.01的同时，各实验组差异显著，P＞0.01。结果似表明MMP－9的水平与乳腺癌的浸润、转移相关。

(韩豫生 校对)

　　本文课题受河南省自然科学基金资助(974023200)

1999－07－14收稿

1999－10－26修回