急性白血病患者和白血病细胞系的bcl-2及bax基因表达
中华血液学杂志 1999年第7期第20卷 研究报告
作者:艾辉胜 芦淑娟 赖春宁 威尼热·阿不力兹
单位:艾辉胜 芦淑娟 100039北京,军事医学科学院附属医院;赖春宁 军事医学科学院基础医学研究所;威尼热·阿不力兹 新疆医学院生物化学教研室
为了进一步研究bcl-2和bax基因在急性白血病(AL)发病和治疗中的作用,我们检测了AL患者36例和白血病细胞系6株的bcl-2基因表达,现报告如下。
对象和方法
1 病例资料 AL36例均为我科住院患者。男26例,女10例,均符合FAB诊断标准并经免疫分型确诊,除2例外,其余34例检测时骨髓或外周血中原始和幼稚细胞数均>0.6。急性髓系白血病(AML)23例,急性淋巴细胞白血病(ALL)13例。初治22例,复发或难治14例。白血病细胞系HL-60、U937、Raji、KG1、CEM和K562由军事医学科学院基础医学研究所提供。正常骨髓3份取自骨髓移植正常供髓员。
2 标本制备 取白血病患者骨髓,肝素抗凝,一部分用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,另一部分离心甩片,封存在-20℃冰箱中备用。
3 原位杂交 bcl-2和bax基因探针由军事医学科学院基础医学研究所韩笛博士提供。将560bp的bcl-2cDNA探针和469bp的baxcDNA探针用光敏生物素标记后参照我室的方法[1]作原位杂交。结果判定:每片计数200个细胞并计算阳性细胞百分率。阴性对照:①空白对照:用无关探针作原位杂交;②以RNase消化掉白血病细胞的RNA后再作原位杂交;③用不含bcl-2mRNA的K562细胞作原位杂交。
结果
1 白血病细胞系和正常骨髓细胞的bcl-2和bax基因表达 6株白血病细胞系中,B淋巴细胞系RaJi、粒细胞系HL-60、单核细胞系U937、原始粒细胞系KG1和T淋巴细胞系CEM均不同程度表达bcl-2基因和bax基因。其中Raji和HL-60细胞表达最强,阳性颗粒呈弥漫性分布,阳性细胞>80%;U937和KG1细胞表达较弱,阳性颗粒散在分布,阳性细胞50%;CEM细胞仅微弱表达bcl-2基因,阳性细胞8%;K562细胞不表达bcl-2和bax基因。正常髓细胞微弱表达bax基因和bcl-2基因(1%~6%)。
2 急性白血病患者的bcl-2基因表达 AL患者36例中,bcl-2基因表达率>20%者26例(72%)(表1),其中初治12例,复发难治14例;ALL9例,AML17例。AML的FAB亚型中慢性粒细胞白血病急粒变(CML-MBC)表达最高,M2和M4其次,M5和M3最低。白血病细胞阳性表达率>80%者12例,其中初治4例,复发难治8例,ALL3例,AML9例。
表1 急性白血病患者的bcl-2、bax基因表达
组别 |
例数 |
bcl-2表达例数 |
bax表达例数 |
A |
B |
C |
D |
A |
B |
C |
D |
AL |
36 |
10 |
6 |
8 |
12 |
8 |
5 |
7 |
16 |
ALL |
13 |
4 |
3 |
3 |
3 |
2 |
3 |
4 |
4 |
AML |
23 |
6 |
3 |
5 |
9 |
6 |
2 |
3 |
12 |
M2 |
5 |
0 |
1 |
1 |
3 |
1 |
1 |
2 |
1 |
M3 |
2 |
2 |
0 |
0 |
0 |
2 |
0 |
0 |
0 |
M4 |
8 |
2 |
1 |
2 |
3 |
0 |
0 |
0 |
8 |
M5 |
3 |
2 |
0 |
1 |
0 |
2 |
0 |
0 |
1 |
CML-MBC |
5 |
0 |
1 |
1 |
3 |
1 |
1 |
1 |
2 |
初治 |
22 |
10 |
4 |
4 |
4 |
5 |
4 |
3 |
10 |
复治 |
14 |
0 |
2 |
4 |
8 |
3 |
1 |
4 |
6 |
注:A、B、C、D分别指基因表达率≤20%、21%~60%、61%~80%、>80%
3 急性白血病患者的bax基因表达 AL患者36例中,bax基因阳性表达率>20%者28例(78%)(表1),其中初治17例,复发难治AL11例;ALL11例,AML17例。AML的FAB亚型中,M4、M2和CML-MBC最高,M5其次,M3最低。AL患者36例中,12例bax基因阳性表达率>80%。
4 急性白血病患者的bcl-2基因和bax基因联合表达 AL患者36例中,bcl-2基因和bax基因表达率均>20%者24例,其中AML18例,ALL6例;单独bcl-2基因表达率>20%者4例,AML和ALL各2例;单独bax基因表达率>20%5例,AML2例,ALL3例;bcl-2和bax表达率均〈20%者3例,均为AML。
讨论
关于bcl-2基因和bax基因在白血病细胞系的表达已有较多报道。几乎所有的研究均证实HL-60和Raji细胞强表达bcl-2基因和bax基因,但是对CEM、U937和KG1细胞的bcl-2和bax基因表达的研究尚有不同结果。据Steube等[2]的报告,CEM细胞不表达bcl-2基因和bax基因,U937细胞不表达bax基因。但是,Meijerink等[3]认为CEM细胞高表达bcl-2和bax基因,U937细胞弱表达bcl-2和bax基因。我们的结果和文献相近,但亦有所不同,可能与所用检测方法不同等有关。
bcl-2基因在急性白血病的表达最初仅见于伴t(11;14)染色体异常的ALL患者。最近的研究表明,除ALL外,bcl-2基因亦可在AML和其它类型的白血病患者中表达并有重要的预后意义。我们用原位杂交方法检测AL患者36例,其中26例表达bcl-2基因,28例表达bax基因,此结果与Keith等[4]的报道相近。对ALL和AML的bcl-2和bax基因表达是否有明显不同尚无结论,有作者报道AML亚型中M5、M4型表达最强,M1和M2其次,M3表达最弱。我们的研究结果,ALL和AML的bcl-2基因表达无明显不同,但AML亚型中以M4、M2和CML-MBC表达较强,M5和M3较弱,bax基因表达亦有类似结果。
参考文献:
1 艾辉胜,朱原晓,沈倍奋,等.非同位素原位杂交研究急性白血病的髓过氧化物酶基因表达.实验血液学杂志,1996,3:43-47.
2 Steube KG, Jadau A, Teep D, et al. Expression of bcl-2 mRNA and protein in leukemia lymphoma cell lines. Leukemia, 1995, 9:1841-1846.
3 Meijerink JPP, Smetsers T,Sloetjes AW. Bax mutations in cell lines derived from hematological malignancis. Leukemia,1995,9:1828-1832.
4 Keith FJ, Bradbury DA, Ming ZY, et al. Inhibition of bcl-2 with antisense oligonucleotides induces apoptosis and increases the sensitivity of AML blasts to Ara-C. Leukemia, 1995, 9:131-138.
收稿:1998-08-17 修回:1999-02-04
校对:张吉贤