卵泡刺激素对卵巢癌细胞增殖及CA125Ⅱ抗原分泌的作用
中华妇产科杂志 1998年第4期第0卷 论著
作者：朱铭伟 吴乾渝 葛柏青 丰有吉
单位：200011 上海医科大学妇产科研究所
关键词：FSH；卵巢肿瘤；CA-125抗原
【摘要】 目的 探讨卵泡刺激素(FSH)浓度变化对卵巢上皮性癌细胞增殖及CA125Ⅱ抗原分泌量的作用。方法 用不同浓度FSH刺激不同病理类型的卵巢癌细胞株AO、3AO，用3H-胸腺核苷酸掺入法检测细胞增殖的程度；用酶联免疫法检测不同增殖状态下CA125Ⅱ抗原分泌量的变化。结果 FSH浓度升高可引起癌细胞增殖明显增加，二者呈正相关(P＜0.05)；AO细胞增殖与CA125Ⅱ抗原分泌量呈同步上升即正相关(P＜0.05)，3AO细胞增殖未发现类似现象。结论 FSH对卵巢癌细胞增殖有明显促进作用，呈现剂量-效应关系。癌细胞增殖程度与CA125Ⅱ抗原分泌量的关系可因病理类型不同而异。
The Dose-response of Cell Proliferation and Secretion of CA125Ⅱ Antigen to Follicle Stimulating Hormone in Ovarian Cancer Cell Lines Zhu Mingwei, Wu Qianyu, Ge Baiqing, et al. Obstetrics and Gynecology Hospital Shanghai Medical University, Shanghai 200011
【Abstract 】 Objective To study the dose-response of the proliferation and secretion of CA125Ⅱ antigen with follicle stimulating hormone (FSH) in epithelial ovarian cancer cell lines. Methods Two different kinds of ovarian cancer cell lines originated from different pathologic types-AO and 3AO were studied. Cancer cells were cultured in medium containing FSH in different concentrations. The proliferation rate of cells was detected by using the 3H-TdR intrusion technique. The accordant titer of CA125Ⅱ antigen in the culture medium was measured by enzyme linked immunoadsorbent assay technique. Results Proliferation rate of cancer cells (AO and 3AO) was increased apparently as increasing in the concentration of FSH in the culture medium. A positive correlation was found between them (P＜0.05). Proliferation rate of AO cells positively correlated with secreting quantity of CA125Ⅱ antigen (P＜0.05), however, no such correlation was found in 3AO cells. Conclusion It suggested that FSH can stimulate the proliferation of epithelial ovarian cancer cell at high concentration and there is a accordant dose-response relationship between them. The secreting pattern of the CA125Ⅱ antigen varied by the pathological classification of the ovarian cancer.
【Key words 】 FSH Ovarian neoplasms CA-125 antigen
高垂体促性腺激素血症是卵巢癌发病的重要高危因素之一［1～3］。在体外试验中，促性腺激素对人卵巢癌细胞有促进增殖作用，其中以卵泡刺激素(FSH)的刺激增生作用较为明显［4］。本研究应用卵巢上皮性癌细胞株，观察其增殖力在不同FSH浓度下的变化，同时了解FSH对癌细胞增殖与CA125Ⅱ抗原分泌的作用。
材料与方法
一、材料
FSH为WHO赠放射免疫药盒中的标准品，粉末状，可用培养液稀释。培养液为日本制药株式会社生产的RPMI 1640。CA125Ⅱ抗原检测药盒为意大利Sorin公司产品。所用细胞株购自中国科学院上海细胞生物学研究所；AO细胞株来自人卵巢上皮性浆液性囊腺癌；3AO细胞株来自人卵巢上皮性粘液性囊腺癌。
二、方法
1.细胞培养：将AO、3AO两株细胞均按2.4×105/ml的细胞密度接种于含10%小牛血清的培养液中。实验组中加入FSH，使其终浓度达500mU/L、1000mU/L、2000mU/L、4000mU/L、8000mU/L。对照组不含FSH。在5%的CO2中，37℃湿化培养72小时。
2.3H-胸腺核苷酸(TdR)掺入实验：将上述两组细胞悬液200 ml接种于96孔细胞培养板，每份接种3个复孔。在5% CO2中37℃湿化培养54小时后，加入3H-TdR 0.6μCi；继续培养18小时。用多头细胞收集仪将细胞收集到相应的净化滤纸上，以双蒸水洗涤数次，烤干。将滤纸置闪烁杯中加入6 ml闪烁液，以β-液闪计数仪测定每分钟闪烁数(CPM)值。
3.CA125Ⅱ抗原测定：取细胞培养72小时后的培养液，按CA125Ⅱ抗原酶标药盒说明书操作，用全自动酶标仪(意大利Sorin公司生产)测定结果。
上述实验均重复1次，结果用平均值表示。统计方法采用直线相关性检测法，验证各组数据间的相关性并进行显著性检验。
结果
一、FSH浓度与AO、3AO细胞增殖
AO、3AO株细胞增殖程度与FSH浓度变化密切相关，呈剂量依赖性关系，即随FSH浓度对数性增加，细胞增殖活跃程度的标志——CPM值呈算数级增长，两者呈正相关。实验组AO细胞中，高浓度FSH的CPM值高于对照组的40%左右，FSH浓度与CPM呈同步上升，两组的相关系数为0.816 9，差异有显著意义(P＜0.05)。3AO细胞中，在FSH刺激下细胞增殖程度较对照组高52%左右，FSH浓度与CPM值的相关系数为0.898 7，差异有显著有意义(P＜0.02)。
二、癌细胞增殖活跃程度与CA125Ⅱ抗原
采用酶联免疫法测定培养液中CA125Ⅱ抗原含量，以反映癌细胞的CA125Ⅱ抗原分泌量。在AO细胞中，CA125Ⅱ抗原分泌量可直接反映细胞增殖程度，即CA125抗原分泌量越多细胞增殖越活跃，两者相关系数为0.807 5，差异有显著性(P＜0.05)。但3AO细胞没有出现上述现象，CA125Ⅱ抗原分泌呈先降低后升高趋势。见表1，2。
表1 不同FSH浓度AO细胞株的细胞增殖和
CPM及CA125Ⅱ抗原分泌()
| FSH(mU/L) |
CPM |
CA125 Ⅱ(mU/L) |
| 0 |
15 204 |
2 890 |
| 500 |
17 075 |
3 840 |
| 1 000 |
20 048 |
4 320 |
| 2 000 |
22 835 |
5 920 |
| 4 000 |
25 460 |
6 880 |
表2 不同FSH浓度3AO细胞株的细胞增殖CPM及
CA125Ⅱ抗原分泌()
| FSH(mU/L) |
CPM |
CA125 Ⅱ(mU/L) |
| 0 |
36 956 |
4 710 |
| 500 |
36 933 |
4 360 |
| 1 000 |
67 557 |
3 970 |
| 2 000 |
72 067 |
2 280 |
| 4 000 |
72 874 |
4 490 |
| 8 000 |
76 313 |
4 230 |
讨论
一、FSH浓度对卵巢上皮性癌细胞增殖的作用
50、60年代即有人提出，高垂体促性腺激素是卵巢癌高危因素之一［2，3］，临床及实验室研究均提示，卵巢癌的发生、发展均同患者体内的内分泌环境有密切关系［4，5］。本研究发现，体外卵巢上皮性癌细胞的增殖与FSH的浓度有一定关系，表明FSH可促进卵巢癌发展或可提高致癌因素的效率。如果临床对高FSH血症的卵巢癌患者内环境进行调整，可能有利于提高疗效，减少或延缓复发。
二、卵巢癌细胞增殖程度与CA125Ⅱ抗原的分泌
CA125Ⅱ是卵巢癌特异性肿瘤标志物，对观察疗效及病情变化有重要意义。本研究中应用FSH对AO及3AO细胞的刺激增殖作用，引起细胞不同程度的增殖，证实了AO细胞增殖程度与CA125抗原分泌量呈直线相关，而3AO细胞无上述关系。这种差别主要是由于细胞株来自不同病理类型的人卵巢癌。AO细胞来自卵巢浆液性囊腺癌，而3AO细胞来自卵巢粘液性囊腺癌。提示CA125对卵巢癌的意义可因其病理类型而异。不同病理类型的卵巢癌有各自相对应最敏感的肿瘤标志物，在应用如CA125等指标时，要充分考虑病理类型的影响，以便选择适当的指标进行随访并作出评价。
参考文献
1 范娣主编.卵巢临床与病理.天津：天津科学技术出版社，1993.128-131.
2 Kaplan HS. Influence of ovarian function on incidence of radiation-induced ovarian tumors in mice. J Natl Cancer Inst, 1950, 11：125-132.
3 Marchant J. The effect of hypophysectomy on the development of ovarian tumors in mice treated with dimethylbenzanthrocene. Br J Cancer, 1961, 16:821-827.
4 丰有吉，张惜阴，葛柏青，等.促性腺激素对人卵巢上皮性癌细胞的增殖作用.中华妇产科杂志，1996，3：166-168.
5 Wimalasena J, Dostel R, Meehan D. Gonadotropins, estradiol and growth factors regulate epithelial ovarian cancer cell growth. Gynecol Oncol, 1992, 46:345-350.
(收稿：1997-04-28 修回：1997-09-03)
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