肺结核病人外周血T淋巴细胞亚群、嗜银蛋白的测定
中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期第19卷 免疫检测
作者：岳立成 王英年 张克佳 刘瑞贞 李文涛
单位：266042 青岛医学院第二附属医院
结核病的发生、发展及免疫功能等已有不少报道，关于核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)在肺结核病人外周血淋巴细胞中的应用研究尚未见报道。本文通过对肺结核病人T淋巴细胞亚群及其AgNORs的对比分析，探讨二者的变化规律和相互联系，为指导临床免疫检测及治疗提供参考。
资料与方法
1.临床资料
(1)患者组：根据临床症状、体征、X线胸片、痰集菌涂片或培养确诊的肺结核病人59例，其中男性47例，女性12例，年龄20～69岁，平均年龄39岁。
(2)对照组：选择健康献血员50例，其中男性22例，女性28例，年龄22～42岁，平均年龄28岁。
2.方法
(1)T淋巴细胞亚群测定：采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法。试剂盒由北京军事医学科学院基础医学研究所提供。
(2)核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs)测定：取外周血1ml无菌操作抗凝注入RPMI 1640培养瓶中，恒温37℃培养72小时，分离已转化的淋巴细胞；按陈立其等人〔1〕的方法进行涂片染色，每张涂片选择20个视野；应用国产多功能医学图像分析仪(TIPAS)检测，镜下测量100个细胞核的AgNORs面积(GA)和核面积(NA)，由计算机算出面积与面积比(GA/NA)的平均值。试剂AgNO3(50%)和明胶(2%)自行配制。
(3)采用SDAS统计软件处理数据，计算出
±s，并进行正态性检验、t检验和直线相关分析。
结果与讨论
1.肺结核病人T淋巴细胞亚群与AgNORs面积与面积比的变化（见表1）： 数据显示：肺结核病人T淋巴细胞CD3、CD4、CD4/CD8明显降低，CD8明显增高，与对照组比较差异有显著性(P＜0.01)。说明辅助性T细胞功能减弱和抑制性T细胞过度活化导致了肺结核病人免疫功能低下，从而引起发病及病情恶化。此结果与文献〔2〕报道一致。
表1 肺结核病人与正常人T淋巴细胞亚群、核仁组成区嗜银蛋白各指标测定结果(±s)
| |
核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs) |
T淋巴细胞亚群 |
| AgNORs面积(μm2) |
AgNORs面积/核面积 |
CD3(%) |
CD4(%) |
CD8(%) |
CD4/CD8 |
| 对照组 50 |
809.2± 92.5 |
5.75±0.65 |
72.74±6.54 |
49.56±5.63 |
21.88±2.66 |
2.12±0.37 |
| 患者组 59 |
703.1±125.0* |
4.16±0.72* |
54.32±9.66* |
37.41±6.96* |
27.39±4.91* |
1.39±0.38* |
| 菌阳组 41 |
703.1±117.9 |
4.05±0.63 |
53.15±9.66 |
36.39±6.91 |
27.78±5.39 |
1.32±0.39 |
| 菌阴组 18 |
703.0±143.6 |
4.44±0.61△ |
57.01±8.79 |
39.72±6.30 |
25.56±3.87 |
1.56±0.31 |
| 初治组 42 |
710.3±131.7 |
4.26±0.65 |
54.12±9.60 |
37.67±6.67 |
27.93±5.05 |
1.35±0.36 |
| 复治组 17 |
685.3±108.4△ |
3.94±0.61 |
54.88±9.52 |
36.76±7.46 |
25.06±4.46 |
1.47±0.38 |
| 有空洞组 27 |
677.3±111.2 |
3.73±0.38 |
53.81±9.97 |
37.00±7.25 |
28.22±5.20 |
1.31±0.40 |
| 无空洞组 32 |
724.9±133.4△ |
4.53±0.60△ |
54.78±9.23 |
37.75±6.59 |
26.16±4.75 |
1.46±0.35 |
患者组与对照组比较：*P＜0.01。菌阳与菌阴、初治与复治、有空洞与无空洞病人比较：△ P＜0.05
近年来研究证明，核仁组成区(nucleolar organizer region，NOR)是位于某些染色体上特殊部位的核糖体基因(rDNA)，与之结合的酸性非组蛋白可用银染方法显示，这就是核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)〔3〕。研究表明，AgNORs可能就是调节rDNA转录的聚合酶Ⅰ亚单位，在rDNA转录、细胞增殖、蛋白合成过程中起重要的作用。本文中肺结核病人AgNORs面积与面积比均显著低于对照组(P＜0.01)，表明肺结核病人淋巴细胞的增殖、分化能力下降；有空洞者较无空洞者变化更明显(P＜0.05)，菌阳较菌阴病人面积比降低更明显(P＜0.05)，复治病人较初治病人面积降低更明显(P＜0.05)，表明随着病情的加重，淋巴细胞的增殖、分化能力均有不同程度的下降。
2.T淋巴细胞亚群与AgNORs面积、面积比的相关关系（见表2）：经正态检验，T淋巴细胞亚群与AgNORs各指标数据均呈正态分布。
表2 T淋巴细胞亚群与核仁组成区嗜银蛋白各指标直线相关系数(r)
| 变量名 |
AgNORs面积 |
AgNORs面积/核面积 |
CD3 |
CD4 |
CD8 |
CD4/CD8 |
| AgNORs面积 |
1.0000 |
—— |
—— |
—— |
—— |
—— |
| AgNORs面积/核面积 |
0.3367* |
1.0000 |
—— |
—— |
—— |
—— |
| CD3 |
0.2294△ |
0.5476* |
1.0000 |
—— |
—— |
—— |
| CD4 |
0.1471 |
0.5480* |
0.8585* |
1.0000 |
—— |
—— |
| CD8 |
-0.2625* |
-0.4551* |
-0.5116* |
-0.4724* |
1.0000 |
—— |
| CD4/CD8 |
0.1814 |
0.5317* |
0.7132* |
0.8413* |
-0.6252 |
1.0000 |
* P＜0.01 △ P＜0.05
直线相关分析表明：CD8与CD3、CD4/CD8呈显著负相关(P＜0.01)，CD3、CD4、CD4/CD8任两者间均呈显著正相关(P＜0.01)。AgNORs面积与面积比间也存在显著正相关关系(P＜0.01)。GA与CD3呈正相关(P＜0.05)，与CD8呈负相关(P＜0.01)；GA/NA与CD3、CD4、CD4/CD8均呈显著正相关，与CD8呈显著负相关(P＜0.01)。表明T细胞亚群与AgNORs面积、面积比之间存在着较为密切的内在联系。因此，对肺结核病人T淋巴细胞亚群及AgNORs面积与面积比的测定，定性定量地反映了肺结核病人T淋巴细胞的功能，对全面评价病人免疫功能状态、观察疗效、判断预后具有一定意义。
参考文献
1 陈立奇，何其华，王戈华，等.对rDNA转录活性的图象分析.遗传学报,1990,17∶75-80.
2 刘成玉,滕青,邢淑芹,等.肺结核患者可溶性白细胞介素2及膜白细胞介素2受体和T淋巴细胞亚群的研究.中华结核和呼吸杂志,1996,19∶44-45.
3 彭敦发.DAN定量、AgNORs定量测定及其在大肠癌研究中的意义.实用肿瘤杂志,1993,8∶59-62.
(收稿：1998-04-06 修回：1998-07-20)
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