第二十二章　吞噬细胞的检测

　　体内具有吞噬功能的细胞群按其形态的大小分两类：一类为大吞噬细胞；另一类为小吞噬细胞，亦即中性粒细胞。两类在形态上各有其特征。外周血或实验动物腹腔液等标本中白细胞分类和计数为重要的常规指标，人外周血中性粒细胞的数量对诊断大多数感染性疾病具有重要的参考价值。

　　吞噬细胞的吞噬活动大致分趋化、吞噬和胞内杀灭作用三阶段，在免疫学实验研究和临床检验中已建立相应的检测方法。

第一节　中性粒细胞功能的检测

　　（一）细胞运动功能的检测

　　小吞噬细胞的运动可以分成随机运动和定向运动，前者类似于布朗运动。检测方法是将采集的白细胞悬液滴于玻片上，用光学显微镜直接观察其运动。也可用毛细血管法将细胞悬液装入硅化毛细血管中，稍加离心，使细胞沉积在一端，切去无细胞的毛细血管段，继而移放在含细胞培养液的培养小瓶中，37℃温育18～20h，游动的细胞将从毛细血管内外移，在管口形成一细胞团，根据细胞面积可判断受检中性粒细胞活动的强弱。某些患者中性粒细胞的任意运动明显减弱，甚至消失。中性粒细胞的定向运动表现为趋化运动，测定方法有多种，其原理相同，而方法大同小异，常用以下两法：

　　1．Boyden小室法又称滤膜小室法，采用特殊的小盒装置，盒中以一片3～5μm孔径的微孔滤膜将盒分为上下两小室。上室加受检的白细胞悬液；下室加细菌菌体或其产物、酵母菌活化的血清等趋化因子。置37℃温育数小时。上室中的中性粒细胞因受下室内趋化因子的招引，使细胞由滤膜微孔进入滤膜内，最后取滤膜，经固定、干燥、着染、脱色等步骤，将透明后的滤膜置油镜下检测细胞在膜内通过的距离，求其趋化单位。

　　2．琼脂糖凝胶平板法将含小牛血清的1％琼脂糖倾到在玻片或平皿中制成凝胶平板，继而按图22-1打孔，每三孔为一组，中央孔加细胞悬液，两侧孔分别加趋化因子或对照培养液，经37℃温育2～3h后，用2％戊二醛固定，移去琼脂糖层，经染色后，测量细胞运动的距离，按下式计算移动指数。

　　移动指数＝趋化移动距离／任意移动距离

图22-1 琼脂糖平皿法打孔谱型

　　（二）吞噬和杀菌功能的检测

　　检测原则是将受检细胞悬液按一定比例混和，继加活的白色念珠菌悬液，保温生，加美蓝溶液作活体染色，取样涂片镜检。如胞内白色念珠菌呈蓝色，表示该菌已被杀死，共计100200个细胞，分别求其吞噬率和杀菌率。

　　溶细胞法更能直接反映细胞杀菌的情况，将受检的细胞悬液与一定量已经新鲜人血清调理过的大肠杆菌或金黄色葡萄球菌悬液混合后，置37℃，每隔一定时间取定量培养物，稀释后接种固体平板培养基，37℃培养18h后，计算菌落数，据以计算中性粒细胞的杀菌能力：

　　正常情况下，对大肠杆菌的杀菌率约为90％，对金黄色葡萄球菌的杀菌率约为85％。

　　在临床常用的硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验，本法用以检测中性粒细胞的胞内杀菌能力，由于中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗剧增，耗氧量亦随之相应增加，磷酸己糖旁路代谢活力增强，葡萄糖6-磷酸氧化脱氢，此时加入NBT可接受所脱的氢，使原先呈淡黄包的NBT还原成点状或块状甲朊颗粒并沉积在胞浆内。NBT还原反应式如下：

　　近此年来还采用了新颖的化学发光法，中性粒细胞在吞噬经调理的金黄色葡萄球菌过程中，伴有化学发光的产生，故可用化学发光仪测定中性粒细胞的吞噬功能及其代谢活性。实验证明全血化学发光试验可同时获得两种信息，即中性粒细胞的吞噬功能、代谢活性及受检血清的调理功能。由于中性粒细胞的氧代谢活性与对细胞的吞噬率密切相关，杀菌能力与发光强度相平行，因此化学发光法可检测细胞杀菌功能。因此吞噬细胞化学发光测定法可用以研究中性粒细胞的吞噬功能，代谢活性和血清调理功能，它可在生理温度和中性环境下测定，能较好地反映生理条件下吞噬细胞的功能，具有准确灵敏、样品用量少，简便快速等优点。其敏感性高于NBT还原试验。