本研究旨在制备纯化的标准化、商品化抗Hp尿素酶抗体试剂盒，供临床ELISA检测用。
1 材料与方法
1.1 试剂盒的制备
Hp尿素酶抗原的分离纯化研制：①经尿素酶试验选择尿素酶活性高的经系统鉴定的Hp菌株接种于含6％脱纤维绵羊血的布氏平皿中，置微氧环境，恒温37℃培养3d收菌，脱洗、稀释后超声适度破裂，高速离心取上清液备用。②选用Sephadex G200柱（2.6×75cm柱型）在凝胶过滤成套设备中从Hp超声破碎物离心上清液中一次提纯Hp尿素酶。③将凝胶过滤后尿素活性峰与相应菌全菌蛋白上柱液及离心沉渣SDS－PAGE分析，观察尿素酶提纯效果。④Western blot（免疫印渍）分析：经SDS－PAGE将各蛋白分离后，经电泳将蛋白转移到硝酸纤维膜上，过渡、洗涤后，放入稀释的兔抗Hp阳性血清（含抗高分子量菌体相关蛋白）中，震荡、洗涤后，浸泡于稀释后的辣根过氧化酶—葡萄球菌A蛋白液洗涤后将该膜放入新配制的底物显色液中，震荡，显色，清洗，照相。
1.2 试剂盒的临床应用
研究对象：①病人：诊断按胃镜及活检病理确定。同期均检测Hp抗体。第一阶段用全菌抗原（抗Hp抗体）。男741例，女459例，年龄为18岁～77岁（42岁±10岁）。第二阶段用商品化试剂盒Hp尿素酶抗原（抗Hp－u抗体）。男1015例，女660例，年龄为16岁～74岁（45岁±7岁）。两组匹配情况相近。②献血员：以上两阶段均有健康献血员同期行Hp抗体检查，各200例。胃镜检查及活检取材：每例在距幽门5cm周径内的部位钳取粘膜标本分别送检病理组织学检查及Hp培养。组织学检查：胃镜活检标本HE染色组织学检查，Giemsa染色确认Hp存在。病理诊断参照全国胃癌防治研究协作组所订标准。炎症程度按正常、轻度、中度、重度分别判定为0、1、2、3级。细菌培养：送检用的输送培养基为10％小牛血清布氏肉汤培养基。每试管分装3ml置入2块胃镜活检组织块。每例活检钳均经消毒液浸泡15min后和酒精擦试。Hp培养基用布氏琼脂培养基为基础为基础，加入脱纤维羊血及联合抗生素、3d后观察结果，并作生化鉴定。
以上组织学与微生物学检查结果独立评价，不受临床资料暗示影响。血清ELISA法测抗HpIgG和抗HpIgG。流行因素调查：制定统一调查表逐项登记。本组共连续调查了1200例。药物治疗：212例Hp阳性胃炎患者随机分为3组。分别服诺氟沙星和胶体次枸橼酸铋（CBS，De—Nol）及安慰剂1个月。停药1月后复查胃镜及血清抗Hp抗体。
2 结果
2.1 Hp超声破碎后
Hp超声破碎后，高速离心，上清液可经SephadexG200柱将Hp尿素酶有效分离。尿素酶活性与脱洗第一峰完全一致，而第一峰中经SDS—PAGE检测只含有30kD及66kD两条蛋白带。与Hp尿素酶两个亚基的分子量一致，经Western blot分析证明第一峰蛋白仍保持了很高的抗原性。
2.2 用提纯的Hp尿素酶进行血清抗Hp尿素酶抗体测定
用提纯的Hp尿素酶进行血清抗Hp尿素酶抗体测定，经已确定的55份阳性血清标本和50份阴性血清标本对照检测，符合率100％。无假阳性及假阴性。
2.3 对1675例进行抗HpIgG抗体检测
对1675例进行抗HpIgG抗体检测。若以培养及（或）组织染色为标准，则ELISA敏感性为98％，特异性96％，阳性预测值为98％，阴性预测值为96％。抗HpIgG抗体半定量结果，本组检验以“++”为临界值标准，敏感性可达98％，特异性达96％；若以“＋”为准，则敏感性虽达99.1％，但特异性仅为84.9％。
2.4 各种商品试剂盒比较见表1。提示本组试剂盒检测Hp感染敏感性和特异性均较高。
2.5 各种胃、十二指肠疾病患者血清抗HpIgG抗体检测情况（见表1）。
2.6 流行因素调查
流行因素调查。 本组资料表明以下因素有意义：①Hp感染率随年龄增长递增，至60岁达高峰。②本组肉联厂工人（30例）与副食售货员（菜、肉组）69例抗Hp抗体阳性率分别为90.0％和86.9％，高于其他工种（P＜0.01）。③饮食习惯：喜食凉拌生菜、肉食者Hp感染率高（P＜0.05）。④家庭成员中有胃十二指肠疾病者，较无此类病者Hp感染检出率高（根据8个家庭、40名家庭成员统计）。
2.7 ELISA血清Hp抗体检测用于Hp阳性胃炎抗菌物治疗后观察抗体滴度下降（表2）。
表1 各种商品试剂盒比较
| 名称 | 抗原 | 观察例数 | 敏感性(％) | 特异性(％) | 阳性预测值(％) | 阴性预测值(％) |
| Pyloriseta | 全菌 | 68 | 68 | 76 | 85 | 62 |
| GAP | 全菌 | 64 | 98 | 77 | 86 | 82 |
| Helico G | 全菌 | 66 | 82 | 83 | 89 | 74 |
| Bio－Rad | 全菌 | 242 | 93.8 | 79.3 | 90 | 87 |
| ELA－G | 全菌 | 195 | 92 | 84 | 88 | 90 |
| ELA－A | 全菌 | 195 | 80 | 89 | 89 | 79 |
| 陈振侬b | 尿素酶 | 149 | 92 | 86.5 | 95.4 | 78.1 |
| 抗Hpb | 全菌 | 1200 | 94.2 | 84.4 | 93.8 | 90.5 |
| 抗Hpu | 尿素酶 | 1675 | 98 | 96 | 98 | 96 |
a用乳胶凝集试验，余者ELISA测定。b非商品化试剂盒
3 讨论
本研究采用ELISA半定量检测血清抗HpIgG，经大宗病例临床检测应用，敏感性、特异性高、批内、批间差异小，稳定性强，重复性好。
表2 三组治疗前后血清抗Hp滴度 （x±s）
| 治疗前 | 停药后 | ||||
| 1月 | 3月 | 6月 | |||
| 诺氟沙星 | 700±285 | 176±56b | 165±45b | 168±89b | |
| 诺氟沙星 | |||||
| 694±282 | 167±48b | 162±53b | 166±49b | ||
| ＋CBS | |||||
| 685±286 | 649±282b | 686±278a | 676±282a | ||
| 安慰剂 | |||||
经自身对照：aP＞0.05，bP＜0.01
临床应用观察到，应用本试剂盒，在慢性胃炎、消化性溃疡、非溃疡性消化不良各类疾病中，抗HpIgG检测阳性率均很高。尤其在慢性活动性胃炎、十二指肠溃疡中检出率更高，与文献报道一致。Sobala强调血清学Hp抗体检测可用于筛查消化不良，可减少23.3％病例用胃镜检查确立Hp感染。本研究也与之相符。
应用血清Hp抗体为观察指标，来判断用抗Hp药物治疗根除Hp效果，治疗后抗体滴度下降或消失，与近几年一些报道一致。本文认为，用血清抗HpIgG追访疗效，也可减少患者接受胃镜复查Hp根除与否之痛苦。抗HpIgG检测用于流行病学研究无疑是一重要工具。