膀胱癌患者血及肿瘤组织尿激酶含量的检测

中华泌尿外科杂志 1999年第10期第20卷 论著

作者：杨进益　李韶　周荣祥　章咏裳　迟玉友

单位：杨进益　周荣祥　迟玉友　256603　山东　滨州医学院附属医院泌尿外科；李韶　生理教研室；章咏裳　同济医科大学附属同济医院泌尿外科

　　关键词： 膀胱肿瘤；癌；尿激酶类

　　摘要　目的　了解尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）与膀胱肿瘤恶性程度及浸润深度之间的关系。　方法　采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测51例膀胱移行细胞癌病人术前、术后静脉血及肿瘤组织uPA含量。　结果　G₃肿瘤组织uPA含量明显高于G₁和G₂（P均＜0.01），G₁与G₂间uPA差异无显著性；浸润癌肿瘤组织uPA含量明显高于表浅肿瘤组织（P＜0.05）。病人术前及术后静脉血uPA含量与正常人静脉血uPA含量差异无显著性。　结论　肿瘤组织uPA含量可以反映膀胱肿瘤的恶性程度和肿瘤浸润深度。

Urokinase-type plasminogen activator (uPA) in the neoplastic tissue and peripheral blood of bladder cancer patients

YANG Jinyi,LI Shao,ZhOU Rongxiang,et al.

　　Department of Urology,the Affiliated Hospital of Binzhou Medical College, Shandong 256603

　　Abstract　Objective　To study the uPA level in the neoplastic tissue and peripheral blood of bladder cancer patients.　Methods　51 cases of transitional cell bladder cancer were studied by means of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).　Results　uPA content in neoplastic tissue of grade Ⅲ tumors was obviously higher than that in grade Ⅱ or grade Ⅰ tumors (P＜0.01) whereas there was no significant difference between grade Ⅰ and grade Ⅱ tumors.uPA content was also higher in the invasive tumors than the superficial ones (P＜0.05).There was no significant difference in peripheral blood uPA between bladder cancer patients and normal subjects.　Conclusions　uPA content in the neoplastic tissue might be a useful index of the degree of malignancy and invasiveness of transitional cell bladder cancinoma.

　　Key words　Bladder neoplasms　　Carcinoma　　Urokinase

　　近年来的研究表明，尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）与肿瘤的侵袭和转移密切相关。我们应用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测膀胱移行细胞癌患者血及肿瘤组织中uPA含量，以探讨uPA在膀胱癌中的临床应用价值。

　　材料和方法

　　一、标本收集

　　1996年8月～1998年5月本院收治膀胱癌51例，病理证实均为移行细胞癌。男38例，女13例，年龄24～72岁，平均61岁。按UICC标准分浅表性（PT_a～PT₁）36例，浸润性（PT₂～PT₄）15例。按WHO标准G₁　14例，G₂　24例，G₃　13例。51例患者中23例行经尿道电切术，19例行膀胱部分切除或加输尿管再植术，9例行全膀胱切除术。所有病人术前及术后1周抽取前臂静脉血2ml，离心后-20℃保留血清，另留取10例正常人血清做对照。经尿道电切前用活检钳钳取肿瘤标本及肉眼观察正常膀胱粘膜，开放手术待标本切下后，立即取肿瘤标本及距肿瘤边缘2cm以外肉眼观正常之膀胱粘膜。另取非膀胱癌患者膀胱粘膜10例，其中前列腺增生症7例，膀胱颈梗阻3例，平均年龄68岁。标本取出后立即-70℃冰冻保存。

　　二、检测方法

　　1．组织提取液制备：滤纸吸水后分别称出肿瘤组织及膀胱粘膜各50mg，置入Hepes缓冲液，匀浆器中反复研磨后，移入1.5ml Ependoff管中，离心取上清-20℃保存待测。

　　2.ELISA测定uPA含量：uPA标准品，血清及组织提出液用包被缓冲液稀释,加100μl/孔,4℃过夜,洗涤液洗板3次。加100μl/孔封闭液封闭已包被的酶标板，37℃,1小时,洗涤同上。加鼠抗人uPA (1∶500)100μl/孔,37℃,1小时,洗涤。加酶标羊抗鼠IgG100μl/孔,37℃ ,1小时,洗涤。加底物溶液OPD100μl/孔,避光反应25分钟,加H₂SO₄ 50μl/孔终止反应,酶标仪(MS型)测出吸光度A值,由内置程序换算出含量。

　　3.统计分析,采用PEMS软件包q检验及t检验。

　　结　果

　　10例正常人血清uPA含量为（3.89±3.02）ng/ml,51例病人术前血清uPA含量为（4.08±3.43）ng/ml，术后1周为（3.51±3.21）ng/ml，三者比较差异无显著性。13例G₃病人及15例浸润性癌病人术后较术前血清uPA无明显降低。

　　膀胱癌组织浸出液uPA平均含量为：14例G₁(5.30±1.50)ng/ml，24例G₂（13.34±9.53）ng/ml,13例G₃（24.83±17.16）ng/ml。G₃明显高于G₁和G₂级(P＜0.01),G₁与G₂差异无显著性 (P＞0.05)。36例浅表性膀胱癌组织浸出液uPA平均含量为（9.39± 6.49）ng/ml,15例浸润性癌平均为（25.70±17.13）ng/ml,二者比较差异具有显著性 (P＜0.05)。10例非肿瘤膀胱粘膜及肿瘤旁粘膜浸出液uPA分别为（4.73±3.52）ng/ml ，（4.64±3.67）ng/ml ，二者之间及与G₁间差异无显著性,但明显低于G₂, G₃及浸润癌组。

　　34例单发癌组织uPA平均为（14.65±13.60）ng/ml, 17例多发肿瘤组织uPA含量为（12.98±11.40）ng/ml，二者间差异无显著性。肿瘤直径小于2cm的32例病人肿瘤组织uPA含量（11.21±12.06）ng/ml,直径大于2cm的19例uPA含量为（15.50±14.29）ng/ml,二者之间差异无显著性。

　　讨　论

　　uPA是一种丝氨酸蛋白水解酶,主要作用于生理病理条件下的细胞迁移和组织修复,介导细胞周围基质蛋白的溶解。肿瘤细胞或其他细胞以单链原酶(Pro-uPA)形式分泌后,与其特异性受体uPA-R结合，由血清中纤溶酶或肿瘤细胞分泌的组织蛋白酶B、L激活,转变成活性uPA ,活性uPA又可激活结合在细胞表面纤溶酶原受体的纤溶酶,同时纤溶酶也可使原酶形式的单链uPA成为双链的活性uPA ，从而起到局部放大作用^［1］。活性的uPA除了能直接作用于细胞外基质，主要通过由它激活的纤溶酶使基质中的多种成分如纤维蛋白、纤维连接蛋白、蛋白多糖、层粘蛋白等降解。此外,被uPA激活的纤溶酶尚能激活胶原酶,使基质膜中的主要成分胶原降解。

　　近年来,随着对肿瘤生物学特性研究的深入,发现uPA在许多肿瘤细胞中有过量表达。Mitsubayashi等^［2］报告在膀胱癌组织中存在高含量uPA抗原,Hasui等^［3］不但测得膀胱癌组织中有高含量uPA抗原,并且认为uPA可预测浅表性膀胱肿瘤的复发和进展,在临床上可能成为判断预后的指标。

　　本组膀胱癌组织中uPA含量明显高于癌旁膀胱粘膜及非瘤病人膀胱粘膜，并且G₃组明显高于G₂和G₁组，提示uPA 值可以反映肿瘤的恶性程度。G₁与G₂间差异无显著性，说明G₂级膀胱肿瘤临床生物学行为差异较大。浅表性癌uPA明显低于浸润性癌，提示uPA值可以反映癌的浸润深度。但uPA值与肿瘤本身数目及大小不相关，uPA值不能预测肿瘤的单发和多发以及肿瘤的体积。

　　参考文献

　　1　Schmitt M, Wilhelm O, Janicke F, et al. Urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor D87.A new targe in tumor invasion and metastasis. J Obstet Gyaecol ,1995,21∶151-155.

　　2　Mitsubayashi S, Akiyama T，Kurita T, et al. Plasminogen activator in bladder tumors . Urol Res, 1987,15∶355-358.

　　3　Hasui Y, Marutsuka K, Nishi S, et al. The content of urokinase-type plasminogen activator and tumor recurrence in superficial bladder cancer. J Urol,1994,151∶16-20.

收稿：1998-12-01

　　修回：1999-04-19