慢性胃炎患儿T细胞和红细胞免疫功能的检测

细胞与分子免疫学杂志 1999年第2期第15卷 论著

作者：江逊　方雪娟　王茂贵　王宝西

关键词：慢性胃炎；儿童；T淋巴细胞亚群；红细胞免疫

摘　要：应用流式细胞术（FCM）直接免疫荧光染色法和免疫粘附花环法，检测了41例慢性胃炎患儿外周血T淋巴细胞亚群（包括CD3^＋，CD4^＋和CD8^＋）的变化和红细胞免疫功能（RBC-C3bRR，RBC-ICR），以观察慢性胃炎患儿的免疫功能在治疗前后的变化。结果显示：慢性胃炎患儿治疗前各项免疫指标除RBC－ICR外，均低于对照组（P＜0.01)；治疗后各项免疫指标均有显著提高，而RBC-ICR则有所下降（P＜0.01)。本研究提示，慢性胃炎患儿一旦确诊，就应及时正规治疗，以免患儿长期缺乏必需的营养素而致免疫功能紊乱。

　　中国图书资料分类号：R729R446.63

Detection of T cell and erythrocyte immune function in

　　children with chronic gastritis

Jiang Xun, Fang Xuejuan, Wang Maogui,Wang Baoxi

　　(Department of Pediatrics, Tangdu Hospital, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710038)

　　Keywords：chronic gastritis　children T-lymphocyte subset　erythrocyte immune

　　Abstract：41 cases of changes in peripheral blood T cell subsets (CD4^＋ and CD8^＋ ) and erythrocyte immune function of children patients with chronic gastritis before and after treatments were detected by flow cytometry (FCM) with direct immunofluorescent staining and immune adherence rosettes (RBC-C3bRR and RBC-ICR). The results showed that various immunologic parameters of the patients, expect the value of RBC-ICR, before treatment were lower than those of the control group(P＜0.01), but except that the RBC-ICR certainly rosen, other parameters after treatment descended, suggesting that once confirmed diagnosis, timely and regular treatment was administrated to the patients, so as not to caused disturbance of immune function owing to long deficient in essential nutricets.

　　慢性胃炎是儿科常见病，约占门诊接受纤维胃镜检查患儿的80％～90％。近年来,关于免疫与慢性胃炎的关系的报道较多^[1]。为研究慢性胃炎患儿的T细胞及红细胞免疫功能在治疗前后的变化，我们观察了41例慢性胃炎患儿治疗前后免疫功能的变化。

　　1　材料和方法

　　1.1　研究对象　慢性胃炎组：来自1997年6月～1998年11月期间，本院门诊及住院患儿共41例，其中男22例，女19例；年龄5岁～12岁，平均8.37岁；病程3个月～4年，平均14.8个月。所有患儿均无其它系统疾病，用OLYMPUS-GIF-XP₂₀型电子纤维胃镜按悉尼分类法^[2]确诊，并取活检标本做病理学检查证实。对照组：共20例均为健康体检者，无消化系统病史及影响免疫功能的疾病，性别及年龄与慢性胃炎组近似。

　　1.2　试剂与仪器　Epics-profile II型流式细胞仪，为美国Coulter公司产品。小鼠抗人CD30-FITC、抗CD4-FITC/CD8PE单克隆抗体（mAb），为美国Coulter公司产品。肝素抗凝剂125×10³U/L；红细胞溶解液（NH₄Cl8.2g，KHCO₃1.0g，EDTANa₂37.0mg,加蒸馏水至1000ml）由本室配制。补体致敏和未致敏Y^s酵母菌冻干试剂（陕西省人民医院免疫研究室产品），按说明书溶解洗涤，配成浓度为1×10¹¹/L备用。红细胞洗涤液（ACD）（枸橼酸钠13.3g,枸橼酸4.7g，葡萄糖30.0g，加蒸馏水至1000ml，pH4.5～5.5），本室配制过滤。

　　1.3　方法

　　1.3.1　治疗方案　慢性胃炎组：经确诊后按统一治疗方案给药，即甲硝唑(15～45)mg/kg·d，分3次口服,用1周后停药；雷尼替丁(2～3)mg/kg·d，睡前1次口服；阿莫西林(50～100)mg/kg·d，分3次口服，连服4周。所有患儿均于治疗前采静脉血2ml，肝素抗凝、送检。治疗1月后随访，若患儿病情明显好转，且均无腹痛及其它消化道不适症状时，再抽血送检。

　　1.3.2　T细胞亚群的检测　采用微量全血直接免疫荧光染色法。取100μl肝素抗凝血，加于小试管底部，分别加入20μl荧光素标记的抗CD3、抗CD4及抗CD8mAb，混匀。于室温（18～25℃）孵育15min后，加入红细胞溶解液1ml，充分混匀。待红细胞完全溶解后，用流式细胞仪检测（波长488nm），FITC（异硫氰酸荧光素）阳性细胞呈兰－绿荧光，PE（藻红蛋白）呈橙－红色，计数3×10⁴个细胞，经ELTTE软件处理，以百分率（％）报告结果。

　　1.3.3　红细胞免疫功能的检测　采用免疫粘附酵母菌花环法。取肝素抗凝血10μl，加4 ml ACD液洗两次（每次2000r/min，5min），配成1.25×10¹⁰/L红细胞悬液。取补体致敏与未致敏的酵母菌悬液各50μl，分别加入两支康氏管中，每管各加红细胞悬液50μl，混匀。37℃水浴作用30min后，取出，轻轻混匀，水平涂片，自然干燥，用瑞氏－姬姆萨染液染色，油镜计数。以结合两个或两个以上酵母菌的红细胞为阳性，计数200个红细胞，分别求出RBC-C3bRR及RBC-ICR的百分率（％）。

　　1.3.4　统计学处理　用SPLM统计软件，计算各个指标的均值±标准差（±SD），并进行方差分析。

　　2　结果

　　2．1　T淋巴细胞亚群的检测　慢性胃炎患儿治疗前后，T淋巴细胞亚群与对照组比较，有显著变化：治疗前CD3^＋，CD4^＋，CD8^＋T细胞和CD4^＋/CD8^＋T细胞的比值，均明显低于正常对照组（P＜0.01)；治疗后各项指标均比治疗前明显升高(P＜0.01)；但仍未恢复到正常对照组的水平(P＜0.05)（表1）。

表1　治疗前后T细胞亚群的变化

　　Tab1　Changes of T cell subsets before and after treatments (± SD)

　　2.2　红细胞免疫功能的测定　在治疗前RBC-C3bRR明显低于正常对照组（P＜0.01)；治疗后RBC-C3bRR明显升高，RBC-ICR由有所降低，两者差异均有统计学意义(P＜0.05)，但两项指标与正常对照组相比较仍有差异(P＜0.05)(表2）。

表2　治疗前后红细胞免疫功能的变化

　　Tab2　Changes of erythrocyte immune function before and after treatments

　　3　讨论

　　慢性胃炎患儿病程长，有上腹部或脐周反复疼痛，常影响食欲；胃肠动力亦有一定改变，导致患儿对各种营养素（如氨基酸、脂类、蛋白质），抗氧化作用的微量元素（维生素E、维生素C、β-胡萝卜素、硒、维生素B6、锌、铁等）的摄入不足或吸收不良。实验研究及临床观察表明，营养素长期缺乏时，可导致免疫功能低下，加重感染的危险性和严重性^[3]。

　　T淋巴细胞在机体免疫中占有重要的地位，外周血T淋巴细胞亚群的变化是反映机体细胞免疫状态的较好指标。CD8^＋的Ts细胞与CD4^＋Th细胞的作用相反，对免疫应答具有重要的调节作用。在正常情况下，二者相互诱导和制约形成的T细胞网络，对维持免疫功能的平衡具有重要的意义^[4，5]，当二者的比例失调时，即可导致细胞免疫功能紊乱或失调，而削弱机体的抵抗力。

　　红细胞也是机体免疫系统的重要组成部分。红细胞可借CR1、CR3粘附抗原、抗体，清除循环中的免疫复合物，调节机体的免疫功能。由于血液中红细胞的数量为白细胞的500～1000倍，且其CR1在细胞膜上呈簇状分布与IC结合牢固，因此，红细胞是清除体内IC的主要细胞。另外，红细胞还具有增强吞噬细胞、T、B淋巴细胞及NK细胞活性的功能，在机体抗感染防御中也具有重要的作用^[6]。

　　本文研究发现，慢性胃炎患儿的T细胞免疫功能及红细胞免疫功能治疗前均有降低，而治疗后均有提高。因此，及时、合理地进行治疗，对增强患儿的抗感染免疫具有重要的意义。

　　作者简介：江逊，女，30岁，医师，硕士生。西安市灞桥区新寺路1号，Tel.(029)3510595-77147

　　参考文献

　　［1］ Nakajima S,Krishnan B, Ota H, et al. Mast cell involvement in gastritis with or without Helicobacter pylori infection.Gastroenterol, 1997;113(3):746～754

　　［2］ Sipponen P, Kekki M, Siurala M.The Sydney System: epidemiology and natural history of chronic gastritis.J Gastroenterol Hepatol, 1991;6(3):244～251

　　［3］王美嫣，许积德.营养与免疫.中华儿童保健杂志，1998;6（2）:113～115

　　［4］贾战生，于兰.T淋巴细胞亚群的检测及临床意义.国外医学临床生物化学与检验分册，1992；13（4）:157～159

　　［5］Sercarz E, Krzych U. The distinctive specificity of antigen-specific suppressor T cells. Immunol Today ,1991;12(4):111～ 118

　　［6］郭峰.红细胞免疫研究概况.中华微生物和免疫学杂志，1995;15（3）：181～182

收稿：1998－11－01

　　修回：1999－03－18