免疫组化法检测戊肝病毒抗原

　　我们对急性期、慢性期和胎肝组织用免疫组化方法检测肝内HEVAg，现报告如下：

　　1.急性期肝标本取自1986-1988年和田地区，1990年吐鲁番地区两地HE流行时临床住院确诊的病人肝活检组织，用10%甲醛固定石蜡包埋待用。2.病后28个月肝组织标本来自1986年和田洛蒲确诊为急性戊肝病例中群体随机抽样500例，采用病后1、3、7、19、24和28个月随访、有64例临床、肝功均未恢复，选15例进行肝活检，肝组织用10%甲醛固定，石蜡包埋待用。3.胎肝来自孕八个月患者重症戊肝而早产的早产儿产后3小时死亡取肝组织10%甲醛固定后石蜡包埋待用。同时取心、肾、肺、脑等组织均以10%甲醛固定，石蜡包埋待用。

　　首先在流行疫区病人先排除甲、乙型肝炎RF因子和CMV肝炎。本次实验前复检抗-HCV、无阳性血清。HE阳性血清经三种抗原包被的ELISA试剂均为阳性者选为试验用；一是取自病人粪便提取抗原；二是用合成多肽抗原（试剂盒购自上海卫民公司）；三是表达多肽抗原（试剂盒购自北京高达生物技术研究所）。为抗-HEV

　　IgM/IgG多克隆血清1:10稀释，用PBS和甲肝血清做阴性对照。其他试剂为生物素标记的羊抗人IgG、过氧化酶标记的链霉亲和素。SPTM试剂盒购自美国ZYMED公司。免疫组织化学方法石蜡切片脱腊、3%过氧化氢消除内源性过氧化物酶活性，胰蛋白酶消化，按SPTM试剂盒规定的染色步骤进行，AEC染色，苏木素复染。四、血清抗体检测抗-HAV IgM、HBV-M、抗-HCV、均用ELISA方法,试剂分别购自唐山防疫站,北京生化免疫中心和珠海亚莉生物公司。

　　急性期HE肝组织在光镜下主要病理改变为广泛肝细胞变性、空泡变性、浊肿、水样变性而致气球样变，点状或灶状坏死，有的出现胆管扩张，胆栓形成，胆色素沉着，汇管区不同程度炎细胞浸润。HEVAg以均匀细密颗粒弥漫分布在胞浆中，有的呈簇状分布，与炎细胞分布平行。28个月后肝组织光镜下的主要病变为肝细胞胞浆疏松、空泡变性、胞核大小不等出现双核、肝窦扩张或变窄，点状灶坏死，汇管区有淋巴细胞和白细胞浸润，部分标本有纤维组织增生，病理符合慢性小叶性肝炎。HEVAg除均匀密布胞浆外其特点为胞膜周边和核膜胞浆面围集使细胞界限和核膜边界清晰，有的在胞核内可见，在坏死灶周边和汇管区较密集。胎肝在光镜下部分有自溶现象，肝细胞变性、浊肿、呈线状或正常结构不清、胞核大小不等双核多，未见片状坏死和嗜酸小体。HEVAg分布和定位与急性期HE相似，不同点是汇管区无关。

赵素元 邹林樾 杨忠礼 仲英娜