青老年人胃癌p53及增殖细胞核抗原表达的对比

世界华人消化杂志 1998年第5期第6卷 研究原著

作者：毛兰芝¹　王淑秀²　吉伟芳³　任金萍2　杜华贞²　和瑞芝²

单位：新乡医学院　1微生物及免疫学教研室　2病理教研室　3第一附属医院外三科　河南省新乡市　453003

关键词：胃肿瘤；p53基因；增殖细胞核抗原；免疫组织化学；年龄因素

　　Comparative studies on p53 and PCNA expressions in gastric carcinoma between young and aged patients

　　MAO Lan-Zhi¹, WANG Shu-Xiu², JI Wei-Fang³, REN Jin-Ping², DU Hua-Zhen² and HE Rui-Zhi²

　　¹Department of Microbiology and Immunology, ²Department of Pathology and ³Surgery of the First Affiliated Hospital, Xinxiang Medical College, Xinxiang 453003, Henan Province, China

　　Subject headings　stomach neoplasms; p53 gene; proliferating cell nuclear antigen; immunohistochemistry; age factors

　　Abstract

　　AIM　To explore the molecular biological difference between young and aged patients in p53 and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression in gastric carcinoma with immunohistochemistry.

　　METHODS By streptavidin/peroxidase (SP) method, 65 patients with gastric carcinoma including 35 young (≤35 years) and 30 aged (≥60 years) patients were examined immunohistochemically for p53 products. The mean optical density (MOD) and the integral optical density (IOD) of positive cells for PCNA were tested with image analysis system.

　　RESULTS p53 and PCNA positive expression rates in young patients with gastric carcinoma (65.7% and 94.3%) were significantly higher than those in their aged counterparts (26.7%， 50.0%， P＜0.01). The MOD and IOD of PCNA in young patients were dramatically stronger than those in aged patients (P＜0.05).

　　CONCLUSION The high positive expression of p53 and PCNA may be caused by the higher malignancy, more rapid progress and poorer prognosis in young patients with gastric carcinoma.

　　中国图书资料分类号　R735.2

　　摘　要

　　目的　通过对老人青年胃癌中p53及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的研究，探讨青老年人胃癌临床表现的分子生物学异同.

　　方法　应用过氧化物酶标记的链霉卵白素(SP)染色法对65例胃癌(青年组35例，≤35岁；老年组30例，≥60岁)进行p53蛋白及PCNA的免疫组织化学染色. 并对胃癌细胞中PCNA阳性颗粒进行图象分析.

　　结果　p53和PCNA在青年人胃癌中的阳性率分别为65.7%和94.3%，均显著高于老年人(26.7%和50.0%，P＜0.01). 青年人胃癌中PCNA阳性颗粒平均光密度及积分光密度均显著高于老年人(P＜0.05).

　　结论　p53及PCNA的高表达可能是青年人胃癌恶性度高，进展快，预后差的原因.

　　0　引言

　　p53基因是一个肿瘤抑制基因，编码Mr 53?000的核磷酸蛋白^［1］. 大量研究表明，正常p53基因的突变或缺失在人类肿瘤形成中起着重要作用^［2］. 肿瘤细胞的增殖活性高于正常细胞，对肿瘤细胞增殖活性的研究有助于判断预后. PCNA又称为cyclin或DNA聚合酶δ辅助蛋白，是Mr 36?000的核内蛋白多肽，与DNA复制及细胞的增殖活性有关^［3,4］. 关于p53蛋白及PCNA在肿瘤中表达的研究已有较多报道，但尚未见青老年人胃癌中p53蛋白、PCNA表达的报道. 近年来青年人胃癌发病率呈增高趋势，并具有恶性度高、进展快、预后差等临床特点^［5］. 我们应用免疫组化技术对青老年人胃癌中p53蛋白及PCNA的表达进行检测，并应用图象分析技术对PCNA在胃癌细胞中的阳性表达强度进行分析，对青年人胃癌临床表现的分子生物学基础进行探讨.

　　1　材料和方法

　　1.1　标本　随机选择新乡医学院第一附属医院病理科1980-01/1995-01间的胃癌存档蜡块，共65例. 其中年龄小于或等于35岁者(青年组)35例，年龄大于或等于60岁者(老年组)30例. 青年组平均年龄29岁，老年组平均年龄69岁. 所有病例术前未作化疗或放疗.

　　1.2　方法　采用过氧化物酶标记的链霉卵白素(SP)染色法，简述如下：切片脱蜡水化；30ml/L H₂O₂处理，抗原修复，100ml/L正常山羊血清孵育各10min；滴加适当稀释一抗后4℃过夜；生物素化羊抗鼠及辣根酶标记的链霉卵白素37℃孵育各30min；DAB显色，洗涤，苏木素复染. 每步后用PBS冲洗. 一抗为鼠抗人p53蛋白单克隆抗体(1：200释稀)、鼠抗人PCNA单克隆抗体(1∶50稀释). 所用抗体及SP试剂盒均为美国Zymed公司产品. ①观察染色切片中10个具有代表性的高倍视野，其肿瘤细胞阳性数在50%以上者++，低于50%为+，无阳性细胞者为-. ②采用Cambridge Instruments Quant INET 970型自动图象分析系统，对PCNA染色阳性的标本进行图象定量检测，每例随机抽样50个阳性细胞输入图象分析系统检测PCNA阳性颗粒面积、平均光密度、积分光密度.

　　统计学处理　对免疫组化结果进行χ²检验，对图象分析结果进行t检验.

　　2　结果

　　免疫组化染色结果　免疫组化染色，光镜下观察可见p53阳性着色呈棕黄色，位于细胞核；呈弥漫或散在的粗细不一的颗粒状；PCNA阳性着色同p53. p53在非选择人群胃癌中的阳性表达率随胃癌分化程度的降低或浸润深度的加深而增高，在局部淋巴结转移阳性组的阳性率(81.8%)显著高于局部淋巴结转移阴性组(40.7%，P＜0.01). PCNA的阳性率随着胃癌分化程度的降低而升高(P＜0.01)，在局部淋巴结转移阳性组全为阳性表达，而在局部淋巴结转移阴性组的阳性率为68.5%(表1). p53在青年人胃癌中的阳性率(65.7%)显著高于老年人(26.7%，P＜0.01). 在低分化腺癌组、浸润深度局限于深肌层以内组、浸润胃壁全层组及局部淋巴结转移阴性组，p53在青年人胃癌中的阳性率均显著高于老年人(P＜0.05，表2). PCNA在青年人胃癌中的阳性率(94.3%)显著高于老年人(50.0%，P＜0.01). 在高/中分化腺癌组、浸润深度局限于深肌层以内组、无局部淋巴结转移组，青年人胃癌中PCNA的阳性率均显著高于老年人(P＜0.05，表3).

表1　p53 PCNA在非选择人群胃癌中的表达

　　^aP＜0.05，^bP＜0.01.表2　p53在青老年人胃癌中的表达与病理因素的关系

　　^aP＜0.05，^bP＜0.01 vs 老年组.

表3　PCNA在青老年人胃癌中的表达与病理因素的关系

　　^aP＜0.05，^bP＜0.01.　　图象分析　青年人胃癌中PCNA的阳性颗粒平均光密度和积分光密度均显著高于老年人(P＜0.05，表4).

表4　PCNA免疫组化图象分析

　　^aP＜0.05，^bP＜0.01， vs 老年组.3　讨论

　　人p53基因位于17号染色体短臂17P13.1，有野生型(wild type)和突变型(mutant)，正常的p53基因是一种肿瘤抑制基因，行使抗癌功能，只有突变型p53才具有转化作用^［6］. 野生型p53蛋白的T_1/2短(仅20min)，蛋白质不能积累到可观察到的数量，故在细胞中不能观察到野生型p53蛋白的免疫反应. 突变型p53蛋白T_1/2延长(1.4h～7h)，在肿瘤细胞中可积累到能观察到的数量，在恶性组织中用免疫组化方法检测到的p53蛋白代表了突变p53蛋白的表达^［7］. 本组在非选择人群胃癌中，p53的阳性率随着胃癌分化程度的降低、浸润深度的加深而增高，在有淋巴结转移的胃癌中的阳性率显著高于无淋巴结转移组(P＜0.01). 提示，p53基因的突变在胃癌细胞的恶性转化及浸润方面起着促进作用，也可能是胃癌发生局部淋巴结转移的一个重要原因. 突变p53蛋白的检测在判断胃癌的侵袭能力、淋巴结转移及估计恶性程度方面具有重要的参考价值. 青年人胃癌中p53的阳性 表达率显著高于老年人(P＜0.05). 在具有相同的组织学分化程度、浸润深度及局部淋巴结转移的胃癌中，青年组中p53的阳性率均不同程度地高于老年组. 提示，p53的高表达可能是青年人胃癌较老年人胃癌恶性度高、预后差的原因之一.

　　PCNA在细胞周期的S期数量增高，G₂期下降，核分裂期最低，在G₁期又开始增高. 它既存在于增殖期细胞，又存在于有增殖趋势的细胞，故能反映全部细胞的增殖情况^［3］. Robbins et al^［8］研究表明，PCNA可在各种癌组织中表达，PCNA标记指标可作为判断肿瘤恶性程度的指标. 本组，在非选择人群胃癌中，PCNA的阳性表达率随胃癌分化程度的降低而增高(P＜0.01)，在淋巴结转移阳性组的阳性率(100%)显著高于淋巴结转移阴性组(68.5%，P＜0.05). 胃癌细胞分化越低，恶性程度越高，癌细胞增殖越活跃，PCNA阳性表达率越高；增殖活性高的胃癌更易发生局部淋巴结转移. 因此，PCNA表达的检测在判断胃癌的恶性程度及局部淋巴结转移趋势方面具有重要的参考价值. 青年人胃癌中PCNA的阳性率(94.3%)显著高于老年人(50.0%，P＜0.01). 在具有相同的组织学分化程度、浸润深度及局部淋巴结转移情况的胃癌中，青年组中PCNA的阳性率均不同程度地高于老年组. 图象分析结果表明，青年人胃癌细胞中PCNA的阳性颗粒平均光密度及积分光密度均显著高于老年组(P＜0.05). 提示，青年人胃癌细胞的增殖活性高于老年人，PCNA的高表达及高阳性强度可能是青年人胃癌比老年人胃癌生长旺盛、进展快、预后差的原因之一.

　　4　参考文献

　　1　Mcbride OW, Merry D, Givol D. The gene for p53 cellular tumor antigen is located on chromosome 17 short arm (17P13). Proc Natl Acad Sci USA, 1986;83(1):130-134

　　2　Levine AJ. The p53 tumor suppressor gene and product. Cancer Surveys, 1992;12(1):59-79

　　3　Mathews MB. Identity of the proliferating cell nuclear antigen and cyclin. Nature, 1984;309(11):374-378

　　4　Bravo R. Cyclin/?PCNA is the auxiliary protein of DNA polymerase-delta. Nature, 1987;326(6112):515-517

　　5　邢守正，陈允清，薛月娥. 青壮年胃癌的临床和病理特征. 山西医药杂志，1989；24(4)：193-195

　　6　Harris AL. Mutant p53-The commonest genetic abnormality in human cancer. J Path, 1990;162(1):5-6

　　7　Finlay CA, Hinds PW, Tan HM. Activating mutations for transformation by p53 produce a gene product that forms an hsc-p53 complex with an altered half life. Mol Cell Biol, 1988;8(2):531-539

　　8　Robbins BA, Dela Vega D, Ogata K. Immunohistochemical detection of proliferation cell nuclear antigen in solid human malignancies. Archpathol Lab Med, 1987;11(9):841-845

　　毛兰芝，女，1954-08-25生，河南省长垣县人，汉族. 1978年新乡医学院医疗专业毕业，副教授，主要从事基础医学研究，发表论文6篇，科研成果1项.

　　通讯作者　毛兰芝，453003，新乡医学院微生物及免疫教研室.

　　Correspondence to: MAO Lan-Zhi, Department of Microbiology and Immunology Hospital, Xinxiang Medical College, Xinxiang 453003, Henan Province, China

　　Tel. +86*373*3029338

　　收稿日期　1998-03-08