p21　ras和nm23-H1表达与胃癌淋巴结转移的关系

中国普外基础与临床杂志 1999年第4期第0卷 临床研究

作者：秦环龙　毛明华　张惠箴

单位：秦环龙　毛明华　上海市第六人民医院普外科(上海　200233)；张惠箴　病理科

　　关键词： 胃癌；p21；ras基因；nm23-H1基因；免疫组化；淋巴结转移

　　摘要　为探讨p21 ras和nm23-H1表达与胃癌淋巴结转移的关系，采用LSAB法观察了80例胃癌患者的p21 ras和nm23-H1的表达，并分析其与淋巴结转移的关系。结果：有淋巴结转移(LNM)组p21 ras表达阳性率(62.5%)明显高于无LNM组(42.5%)，但nm23-H1表达阳性率(27.5%)则明显低于无LNM组(47.5%)；LNM数为1～3枚的p21 ras表达阳性率(33.3%)明显低于4～7枚和＞8枚的LNM组(45.8%和71.4%)；N1组的表达阳性率(36.4%)明显低于N2和N3组(52.2%和83.3%)。LNM为1～3枚的nm23-H1表达阳性率(44.4%)明显高于4～7枚和＞8枚的LNM组(25.0%和0%)，LNM为4～7枚组的nm23-H1表达阳性率明显高于＞8枚组；N1组nm23-H1表达阳性率(45.5%)明显高于N2和N3组(21.7%和0%)。上述结果提示，胃癌p21 ras和nm23-H1的表达与淋巴结转移密切相关，可作为胃癌患者预测转移和预后的指标。

CORRELATION BETWEEN EXPRESSION OF p21 ras AND nm23-H1 GENE AND STATUS OF LYMPH NODE METASTASIS IN GASTRIC CANCER

Qin Huanlong, Mao Minghua, Zhang Huizhen.

　　Department of Surgery, Shanghai Sixth People's Hospital, Shanghai 200233

　　Abstract　To study correlation between expression of p21 ras and nm23-H1 gene and status of lymph node metastasis (LNM) in gastric cancer. The rate of positive expression of p21 ras and nm23-H1 were studied in 80 cases by LSAB immunohistochemical technique. Results: The results showed that the positive expression of p21 ras in cases with LNM was 62.5%, higher than that of cases without LNM (42.5%) (P＜0.01); the positive rate of nm23-H1 in cases with LNM was 27.5%, lower than that of cases without LNM (47.5%) (P＜0.01). The positive rate of p21 ras in cases with 1-3 LNM was lower than that of cases with 4-7 or ＞8 LNM (P＜0.01); the positive rate of p21 ras in cases with N1 was lower than that of cases with N2 or N3 (P＜0.01), there was no positive expression of p21 ras in cases with N3 (7 cases). The positive rate of nm23-H1 was 44.4% in cases with 1-3 LNM, higher than that of cases with 3-7 (25.0%) or ＞8 LNM (0%) (P＜0.01), the positive rate of nm23-H1 in cases with N1 was markedly higher than that of cases with N2 or N3, there was no positive expression of nm23-H1 in cases with N3 (6 cases). Conclusions: The results suggest that the expression of p21 ras and nm23-H1 in gastric cancer play an important role in the invasion growth and metastasis of tumor, and may serve as a marker of predicting metastasis and prognosis of gastric cancer.

　　Key words　　Gastric cancer　　p21 ras gene　　nm23-H1 gene　　Immunohistochemistry　　Lymph node metastasis

　　胃癌的浸润和转移是非常复杂的病变过程，涉及多种癌基因和抑癌基因的表达和调控^〔1〕，而p21 ras和nm23-H1基因是近年发现的与肿瘤转移、抑制相关的基因。为此，我们就胃癌p21 ras和nm23-H1表达与淋巴结转移的关系进行了研究，以期为预测有无淋巴结转移提供理论依据。

　　1　对象与方法

　　1.1　研究对象

　　采用分层随机抽样法抽取进展期胃癌(早期病例除外)80例，其中有淋巴结转移及无转移者各40例。有淋巴结转移的胃癌组中男27例，女13例，年龄30～79岁，平均55岁；无淋巴结转移组中男29例，女11例，年龄24～75岁，平均57岁。所有患者于1995年至1997年间均在我院行胃窦、体癌根治术。术中测量原癌组织的大小，有淋巴结转移者为2.5～8.5 cm，平均3.9 cm；无淋巴结转移者为2.4～8.1 cm，平均4.3 cm。术中清扫淋巴结数目，最少3枚，最多34枚，其中淋巴结转移阳性数1～3枚9例，4～7枚24例，＞8枚7例；N1站转移11例，N2站转移23例，N3站转移6例。淋巴结有无转移与肿瘤发生部位、浸润胃壁深度以及分化程度等的关系见表1。

表1　胃癌淋巴结转移与原发肿瘤的临床病理特点的关系

　　两组比较， P＞0.051.2　方法

　　p21 ras和nm23-H1检测采用免疫组化LSAB法。p21 ras和nm23-H1单克隆抗体及链霉素亲生物素-过氧化物酶(LSAB)试剂盒均为丹麦Dako公司产品。Ⅰ抗工作浓度为1∶150和1∶100，并均作阳性和阴性对照。用DAB显色，苏木素复染，细胞浆或细胞核呈明显棕色反应即为阳性。采用单盲方法阅片，并参照Yukawa等^〔1〕的方法判断结果。根据每个视野肿瘤细胞染色分布计分： 0分，无着色的肿瘤细胞； 1分， 仅1/3以下的肿瘤细胞着色； 2分，有1/3～2/3的肿瘤细胞着色； 3分，2/3以上的肿瘤细胞着色；根据每个视野肿瘤细胞染色深度计分： 0分，不着色； 2分，深染； 1分，染色深度介于前两者之间。然后将染色分布分数和染色深度分数相加来判断实验结果。阳性4～5分，弱阳性3分，阴性0～2分。

　　1.3　统计学处理

　　各表达阳性率采用χ²检验，P＜0.05为有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　胃癌淋巴结转移与原发肿瘤的临床病理特点的关系

　　结果见表1。表1显示，有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的胃癌在肿瘤发生部位、浸润深度和分化程度上，均无明显差异(P＞0.05)。

　　2.2　胃癌淋巴结转移与p21 ras和nm23-H1表达的关系

　　由表2可见，有淋巴结转移的胃癌患者，其p21 ras表达阳性者25例(62.5%)，明显高于无淋巴结转移组17例(42.5%)，P＜0.01。在有淋巴结转移组中，nm23-H1表达阳性者11例(27.5%)，明显低于无淋巴结转移组19例(47.5%)，P＜0.01。

表2　淋巴结转移与p21 ras及nm23-H1表达的关系

　　与无淋巴结转移组比较， *P＜0.012.3　淋巴结转移数、组站和nm23-H1及p21 ras的关系

　　结果见表3。由表3可见，p21 ras的表达阳性率随着淋巴结转移数目的增多而逐渐增高，同时也随肿瘤从1站→2站→3站淋巴结的转移而逐渐增高； 相反，nm23-H1的表达阳性率却随淋巴结转移数目增多和肿瘤从1站→2站→3站淋巴结的转移而逐渐降低。

表3　淋巴结转移数及范围与p21 ras和nm23-H1表达的关系

　　与LNM为1～3枚比较，*P＜0.05； 与LNM 1～3枚或4～7枚比较， *　* P＜0.01； 与N1比较， △P＜0.01； 与N2或N3比较， △△P＜0.013　讨论

　　本研究对进展期胃癌患者采用分层随机抽样法抽取病例，对发生部位、浸润深度和分化程度进行分析。结果表明，在有淋巴结转移和无淋巴结转移的两组病例中，以上各因素的分布无显著性差异(P＞0.05)，因而保证了本研究各项指标有可比性。

　　有研究表明，p21 ras基因高表达表示胃癌细胞的增生和浸润能力增强，是胃癌恶性程度高的表现。也有学者认为，p21 ras基因的过度表达与肿瘤转移和浸润密切相关^〔2〕。本研究结果提示，胃癌p21 ras高表达与淋巴结转移率增加有关。因此，在临床上对p21 ras高表达胃癌患者，应予以重视，其术后有远处转移的可能性较大，应予密切随访。

　　nm23-H1基因是1988年Steeg等^〔3〕首先克隆出来的，其抑制肿瘤转移的机理尚未完全清楚。文献报道nm23-H1可影响细胞膜G蛋白功能，干扰微管、微丝等细胞骨架蛋白的生物活性，阻断肿瘤转移信息传递而起到抑制肿瘤转移的作用。近年，Leone等^〔4〕发现33.3%人乳癌、25%非小细胞肺癌和12.5%结肠癌有nm23-H1等位基因的缺失或突变。国内王盛乾等^〔5〕报道，120例胃癌有淋巴结转移者nm23-H1的表达阳性率为17.9%，而无淋巴结转移者为47.5%，提示胃癌的转移与nm23-H1基因失活有关。本研究结果显示，有淋巴结转移的胃癌患者的nm23-H1表达阳性率为27.5%，而无淋巴结转移者为47.5%，明显高于有淋巴结转移者。提示有淋巴结转移者存在着nm23-H1蛋白的失活，并在胃癌淋巴结转移中起着重要作用。

　　近来，Kwon等^〔6〕研究表明，胃癌淋巴结转移局限在N1、N2组者，5年生存率分别为58%和27%，淋巴结转移数3、4～7、＞8枚者分别为67%、49%和32%。由此可见，LNM的数量和范围与术后复发和生存率密切相关^〔7，8〕。为进一步判断胃癌淋巴结转移情况，我们对胃癌p21 ras和nm23-H1的表达与淋巴结转移数量及范围之关系同样进行了分层研究。结果表明，LNM数为1～3枚的p21 ras表达阳性率明显低于4～7枚和＞8枚组；N1组p21 ras表达阳性率明显低于N2组和N3组。我们还发现，p21 ras表达阳性率随淋巴结转移数和远处扩散而增高，提示淋巴结转移越严重，p21 ras阳性率越高。nm23-H1表达阳性率在LNM为1～3枚组明显高于4～7枚和＞8枚组，而且LNM为4～7枚组的nm23-H1表达阳性率又高于＞8枚组，N1组nm23-H1表达阳性率明显高于N2和N3组，N2组nm23-H1表达阳性率又高于N3组。在＞8枚组7例中以及N3组转移者6例中无1例为阳性。提示nm23-H1表达随着淋巴结转移数量增加和范围的扩大，有明显的逐步下降趋势，直至无表达。

　　总体而言，p21 ras和nm23-H1的表达变化与胃癌淋巴结转移数量及范围有紧密的关系。因此，我们建议对临床上有p21 ras高表达，而nm23-H1低表达的胃癌患者要严密随访，以便得到及时治疗，提高生存期。

　　参考文献

　　1　Yakama M, Fujimori T, Maeda S, et al. Comparative clinicopathological and immunohistochemical study of ras and p53 in fat and polypoid typecolorectal tumors. Gut, 1994; 35(121)∶1258

　　2　张延龄. 胃癌预后因素的研究近况. 国外医学外科学分册， 1998； 25(3)∶139

　　3　Steeg PS, Bevilacqua G, Kopper L, et al. Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential. J Natl Cancer Inst, 1988; 80∶200

　　4　Leone A, Flatow U, King CR, et al. Reduced tumor incidence, metastatic potential, and cytorine responsiveness of nm23-transfected melanoma cells. Cell, 1991; 65∶25

　　5　王盛乾， 洪东旭， 吴若华. 120例胃癌中p16， nm23-H1基因蛋白表达与临床预后的关系. 实用肿瘤杂志，1997； 12(3)∶108

　　6　Kwon SJ, Kim GS. Prognostic significance of lymph node metastasis advanced carcinoma of the stomach. Br J Surg, 1996; 83(1)∶1600

　　7　Allgayer H, Heiss MM, Schildberg FW. Prognosis factors in gastric cancer. Br J Surg, 1997; 84(176)∶1651

　　8　Maehara Y, Tomisaki S, Oda S, et al. Lymph node metastasis and relation to tumor growth potential and local immune response in advanced gastric cancer. Int J Cancer, 1997; 74(2)∶224

(1998-08-18收稿，1999-03-18修回)