胃癌患者外周血CD_44v5含量的测定及临床意义

江苏医药 2000年第7期第26卷 论著

作者：赵庆洪　袁景伦　陈国玉　夏建国　刘金龙

单位：赵庆洪（南京医科大学第二附属医院普外科　210029）；（南京医科大学第一附属医院　210029）

关键词：胃癌；外周血淋巴细胞；CD₄₄变异体5；流式细胞术

　　【摘要】目的　研究测定胃癌患者外周血淋巴细胞（PBL）CD₄₄变异体5（CD₄₄v₅）含量，探讨其对胃癌转移诊断的临床意义。方法　应用流式细胞术（FCM）检测30例胃癌患者术前PBL CD₄₄v₅含量和10例正常对照组PBL CD₄₄v₅含量。结果　胃癌患者术前PBL CD₄₄v₅含量为7.61％±5.54％，比正常对照组明显增高（P＜0.01）。有转移的胃癌患者PBL CD₄₄v₅含量（8.77％±5.95％）明显高于无转移者（4.44％±2.33％），两者差异显著（P＜0.01）。结论　PBL CD₄₄v₅可望作为胃癌患者转移的生物学监测指标。应用FCM检测胃癌患者术前PBL CD₄₄v₅含量对胃癌转移的诊断和进展的评价具有重要的临床意义。

The Clinical Significance of The Contents of CD₄₄v5 in Peripheral Blood of Patients With Gastric Cancer

ZHAO Qinhong，YUAN Jinglun，CHEN Guoyu，et al

　　(Department of Surgery，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029)

　　【Abstract】Objective　To investigate the contents of CD₄₄ that shared exon variant 5（CD₄₄v₅） in peripheral blood lymphocytes（PBL） of patients with gastric carcinoma and its clinical significance．Methods　The contents of CD₄₄v₅ were determined by means of flow-cytometry in PBL of 30 patients with gastric carcinoma before surgery and 10 normal controls．Results　The contents of CD₄₄v₅ were significantly higher in PBL of patients with gastric carcinoma before surgery compared with those of controls（P＜0.01）．Node-positive gastric cancer patients showed significantly elevated contents of CD₄₄v₅ in PBL in comparison to node-negative gastric cancer（P＜0.01）．Conclusion　CD₄₄v₅ in PBL may be useful as a matestatic marker．It may be of important clinical value in the diagnosis of metastasis and judgment of development for the patients with gastric cancer to analyse the contents of CD₄₄v₅ in PBL by flow-cytometry．

　　【Key words】Gastric carcinoma　Peripheral blood lymphocytes　CD₄₄v₅　Flow-cytometry

　　胃癌的转移是治疗失败的主要原因之一。目前手术者术中对转移的判断主要依赖临床经验，使胃癌的根治性切除具有一定的盲目性和不确定性。如何早期发现转移以及在术前如何正确预测转移的范围，制定合理的手术方式及切除范围已成为当今肿瘤学关注的焦点之一。研究发现CD₄₄变异体（CD₄₄v）与肿瘤转移和预后有相关性。应用流式细胞术我们检测了1999年9月～12月本院30例胃癌患者术前外周血淋巴细胞（PBL）CD₄₄v₅含量，探讨其临床意义。

　　资料和方法

　　一、病例资料：胃癌组：30例，其中男22例，女8例，平均年龄56.7岁。有转移者22例，无转移者8例。对照组：正常健康者10例。

　　二、标本采集：胃癌组术前取外周静脉血2 ml（肝素1∶9抗凝）。同样取正常健康者外周血2 ml抗凝。

　　三、测定方法：1.试剂：一抗鼠抗人CD₄₄v₅，二抗羊抗鼠IgG-FITC以及阴性对照鼠抗人IgG-FITC均购自晶美生物工程有限公司。淋巴细胞分离液由上海试剂二厂生产（批号：980725）。2.血液样本的处理：肝素（1∶9）抗凝的外周静脉血2ml，加入淋巴细胞分离液2 ml，离心，提取淋巴细胞分离层，PBS飘洗、收集细胞后，于两试管中分别加入100 μl悬液，其一先后加入10 μl鼠抗人CD₄₄v₅和10μl羊抗鼠IgG-FITC，离心，PBS飘洗离心后弃上清液除去未结合的荧光抗体，待上机。另一管为阴性对照，加入10 u鼠抗人IgG-FITC，其余步骤同前。3.流式细胞仪为FACSCalibur，美国BD公司生产。荧光检测，以对数放大，光散射数据存软盘。用Cellqust软件（美国BD公司）获取分析数据。

　　结　　果

　　一、胃癌组和对照组术前PBL CD₄₄v₅含量（％，±s）见表1。

表1　胃癌组和对照组术前PBL CD₄₄v₅含量（％，±s）

　　结果显示：胃癌患者PBL CD₄₄v₅含量明显高于正常对照组，两者有显著性差异（P＜0.01）。

　　二、胃癌术前PBL CD₄₄v₅含量与转移相关性分析见表2。

表2　胃癌术前PBL CD₄₄v₅含量与转移相关性分析

　　结果显示：有转移的胃癌患者PBL CD₄₄v₅含量明显高于无转移者，两者差异显著（P＜0.01）。讨　　论

　　CD₄₄是分布广泛的具有多功能、多结构的细胞表面跨膜糖蛋白，介导细胞与细胞之间、细胞与基质之间的相互作用^［1］；参与肿瘤细胞的增生与转移^［2］等。人CD₄₄基因至少由20个外显子组成，其中10个为组成型外显子，其转录片段存在于所有CD₄₄转录子中，仅含组成型外显子的CD₄₄转录子为标准型CD₄₄（CD₄₄s）。在CD₄₄s分子的胞外近膜区（CD₄₄基因第5和第6组成型外显子之间）插入变异体外显子转录片段，形成多种变异体CD₄₄分子（CD₄₄v）^［3］。Gunthert等首先报道在大鼠动物模型中，CD₄₄v只表达于发生转移或是有转移潜能的肿瘤细胞株中，而非转移肿瘤细胞株并不表达，利用生物学方法，可使非转移细胞株表达CD₄₄v而获得转移潜能^［4］。此后，许多人报道CD₄₄v表达与某些人类肿瘤的侵润和转移有关。CD₄₄v₅与结直肠癌和某些类型胃癌的肿瘤进展、转移和预后之间似乎有关^［5，6］。近几年来，血清中可溶性CD₄₄变异体（SCD₄₄v）与肿瘤的关系日益受关注。sCD₄₄v₅浓度与肿瘤侵润程度（T）、淋巴结侵润范围（N）及远外转移（M）有关（P＜0.05）^［8］，但sCD₄₄v确切的细胞起源尚不清楚。基础实验研究发现CD₄₄v可由抗原刺激所活化的外周血淋巴细胞产生^［7］，外周血淋巴细胞也可能是sCD₄₄v的主要来源。我们采用流式细胞术定量检测胃癌患者外周血淋巴细胞上CD₄₄v₅的含量，而且流式细胞术该方法简捷、迅速、准确。

　　结果显示：胃癌患者PBL CD₄₄v₅含量明显高于正常对照组，两者有显著性差异（P＜0.01）。有转移的胃癌患者PBL CD₄₄v₅含量明显高于无转移者，两者差异显著（P＜0.01）。例如，有一例术中发现胃周淋巴结明显肿大，融合成团，术中判断淋巴结有转移，术后病理检查却发现9枚淋巴结均未见转移，其PBL CD₄₄v₅含量为2.02％。另有一例病理证实为早期胃癌，术中未见肿大的淋巴结，但病理发现4枚淋巴结有3枚阳性，其PBL CD₄₄v₅含量高达14.87％。

　　由此可见胃癌患者PBL CD₄₄v₅含量可望作为胃癌患者淋巴结转移的生物学监测指标。结合胃镜检查和病理结果，术前可有助于判断患者有无转移以及病情进展状况，以便制定适合于具体病例的手术方案，避免手术者术中根治性切除的盲目性和不确定性，可望改善预后。

　　由于病例数不多，随访时间尚短，PBL CD₄₄v₅是否可作为预后的监测指标还有待进一步观察。

　　参考文献

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（收稿：1999-11-17　修回：2000-01-26）