食管癌、贲门癌患者围术期外周血T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β动态观测及相关因素研究
苏州医学院学报2000年第20卷第12期
刘晓强 徐五音 管惟苓 朱德隆 许忠
摘 要 目的：探讨食管癌、贲门癌患者围术期外周血T淋巴细胞亚群、sIL-2R、TNF-β改变的规律性、相关因素及临床意义。方法：应用SAP法、ELISA法及ABC-ELISA法分别检测32例食管癌、22例贲门癌患者术前、术后1、2、3周外周血T淋巴细胞亚群、sIL-2R及TNF-β表达，并将所得结果与正常对照组作对比研究。结果：与正常对照组比较，食管癌、贲门癌患者外周血CD3+、CD4+明显减少，而CD8+明显增加,CD4+/CD8+比值明显下降（P＜0.01）,sIL-2R及TNF-β水平明显升高（P＜0.01）。 患者免疫功能损害程度与肿瘤TNM分期相关。手术创伤使机体免疫功能在术后短期内受到抑制。Ⅲ期手术探查组患者与同期手术根治组患者比较，sIL-2R及TNF-β水平显著增加（P＜0.01）。结论：食管癌、贲门癌患者存在细胞免疫功能紊乱，并与肿瘤的TNM分期相关。手术创伤可引起暂时性免疫抑制。动态检测食管癌、贲门癌患者外周血T淋巴细胞亚群、sIL-2R及TNF-β表达对评估患者的细胞免疫功能、判断肿瘤的病变程度及疗效等具有积极的临床意义。
关键词：食管癌；贲门癌；T淋巴细胞亚群；sIL-2R;TNF-β
在抗肿瘤免疫效应中，细胞免疫比体液免疫起着更为重要的作用。细胞免疫应答主要是T细胞介导的特异性细胞免疫。已证明T细胞具有有效的抗肿瘤作用［1］。T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β都是与T细胞介导的细胞免疫有关的重要免疫指标。食管癌、贲门癌患者以T细胞介导的细胞免疫均存在不同程度的紊乱与缺陷。我们检测了食管癌、贲门癌患者围术期外周血T细胞亚群、血清sIL-2R及TNF-β的表达，研究食管癌、贲门癌患者3个免疫指标改变的规律及与癌瘤分期、手术性质的关系，并与健康对照组作对比，探讨其临床意义。
1 资料与方法
1.1 检测对象 选择我院胸外科1998年7月～1999年7月收治的54例食管癌、贲门癌患者（其中食管癌32例，贲门癌22例）。男38例，女16例。年龄43～70岁，中位年龄59岁。所有患者临床症状明显，均经病理检查确诊，未经放疗或化疗，近期无明显感染史，肝肾功能正常。全部病例于术前、术后1、2、3周分别抽取外周血检测T细胞亚群、血清sIL-2R和TNF-β水平。术后发生并发症者剔除研究。正常对照组：健康志愿者22人，男14人，女8人。年龄24～60岁，中位年龄41岁。抽取外周血，检测T细胞亚群、血清sIL-2R及TNF-β。
1.2 肿瘤分期 食管癌均为鳞状细胞癌，贲门癌均为腺癌。病变情况根据国际UICC标准TNM分期，Ⅰ期2例，Ⅱa期9例，Ⅱb期19例，Ⅲ期24例。
1.3 手术分组 按手术情况分为手术根治组（48例）和手术探查组（6例）。
1.4 检测试剂 T细胞亚群（SAP）检测试剂盒由北京邦定生物医学公司生产，主要试剂均为美国ZYMED公司产品。sIL-2R和TNF-β进口分装检测试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供。
1.5 检测方法 T细胞亚群检测采用SAP免疫酶桥联法，sIL-2R检测采用ELISA法，TNF-β检测采用ABC-ELISA法。所有检测均严格按试剂盒说明书操作。
1.6 统计学处理 计量资料用x±s表示，采用两样本均数的t检验或手术前后配对设计t检验分析处理。
2 结果
2.1 术前T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β水平与正常对照组比较 见表1。
2.2 T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β水平的表达与肿瘤TNM分期的关系 见表2。
2.3 Ⅲ期患者手术根治组与手术探查组术前T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β水平的比较 见表3。
2.4 手术根治组、手术探查组患者围术期T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β表达的改变 见表4、5。
表1 食管癌、贲门癌患者术前T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β水平与正常对照组比较(x±s)
| 组别 |
n |
T细胞亚群 |
sIL-2R(pmol/L) |
TNF-β(ng/L) |
| CD3+ |
CD4+ |
CD8+ |
CD4+/CD8+ |
| 正常对照 |
22 |
69.23±3.10 |
43.86±1.67 |
25.36±1.84 |
1.74±0.10 |
72.32±8.80 |
37.07±4.88 |
| 患 者 |
54 |
61.24±5.46** |
32.96±4.64** |
28.28±1.72** |
1.16±0.16** |
125.91±38.88** |
99.14±23.69** |
**与正常对照组比较，P＜0.01
表2 食管癌、贲门癌患者T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β水平的表达与肿瘤TNM分期的关系（x±s）
| 组别 |
n |
T细胞亚群 |
sIL-2R(pmol/L) |
TNF-β(ng/L) |
| CD3+ |
CD4+ |
CD8+ |
CD4+/CD8+ |
| 正常对照 |
22 |
69.23±3.10 |
43.86±1.67 |
25.36±1.84 |
1.74±0.10 |
72.32±8.80 |
37.07±4.88 |
| Ⅰ期+Ⅱa期# |
11 |
66.46±4.16* |
37.73±3.93** |
28.73±2.01** |
1.32±0.14** |
89.67±7.68** |
64.36±11.58** |
| Ⅱb期 |
19 |
63.00±3.92**△ |
34.21±3.24**△ |
28.79±1.44** |
1.28±0.10**△△ |
111.57±22.51**△△ |
94.89±11.52**△△ |
| Ⅲ期 |
24 |
57.46±4.32**△△ |
29.79±3.46**△△ |
27.67±2.01**△△ |
1.19±0.11**△△ |
153.88±39.93**△△ |
118.45±12.21**△△ |
#由于Ⅰ期患者仅2例，故将Ⅰ期与Ⅱa期患者合并统计；与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与Ⅰ期+Ⅱa期比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与Ⅱb期比较，P＜0.01?
表3 Ⅲ期食管癌、贲门癌患者手术根治组与手术探查组之间术前T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β水平的比较（x±s）
| 组别 |
n |
T细胞亚群 |
sIL-2R(pmol/L) |
TNF-β(ng/L) |
| CD3+ |
CD4+ |
CD8+ |
CD4+/CD8+ |
| 根治组 |
18 |
58.83±3.70 |
30.83±3.00 |
28.00±2.06 |
1.11±0.13 |
138.89±27.16 |
114.34±10.80 |
| 探查组 |
6 |
53.33±3.50** |
26.67±3.01** |
26.67±1.63 |
1.01±0.13 |
198.83±14.08** |
130.73±6.84** |
**与根治组比较，P＜0.01
表4 手术根治组食管癌、贲门癌患者围术期T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β表达的改变（x±s）
| 组别 |
T细胞亚群 |
sIL-2R(pmol/L) |
TNF-β(ng/L) |
| CD3+ |
CD4+ |
CD8+ |
CD4+/CD8+ |
| 术 前 |
62.23±4.83 |
33.75±4.20 |
28.48±1.64 |
1.19±0.15 |
116.80±29.05 |
95.19±22.01 |
| 术后1周 |
57.60±5.28** |
27.54±3.83** |
30.06±2.69** |
0.92±0.13** |
196.24±54.86** |
132.25±27.00** |
| 术后2周 |
60.83±4.65**△△ |
31.96±4.43**△△ |
28.88±2.02△△ |
1.11±0.18△ |
141.82±39.02**△△ |
104.69±18.60**△△ |
| 术后3周 |
66.58±3.94**△△ |
39.83±3.52**△△ |
26.75±1.78**△△ |
1.50±0.16**△△ |
81.95±13.27**△△ |
57.79±11.55**△△ |
n=48;**与术前比较，P＜0.01；与术后1周比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与术后2周比较，P＜0.01
表5 手术探查组食管癌、贲门癌患者围术期T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β表达的改变（x±s）
| 组别 |
T细胞亚群 |
sIL-2R(pmol/L) |
TNF-β(ng/L) |
| CD3+ |
CD4+ |
CD8+ |
CD4+/CD8+ |
| 术 前 |
53.33±3.50 |
26.67±3.01 |
26.67±1.63 |
1.01±0.13 |
198.83±14.08 |
130.73±6.84 |
| 术后1周 |
45.33±3.72** |
21.00±1.67** |
24.33±2.34 |
0.87±0.06* |
293.48±18.37** |
164.60±10.65** |
| 术后2周 |
49.67±2.90△ |
23.33±2.73 |
26.33±1.97 |
0.89±0.15 |
273.40±16.30** |
75.78±12.62** |
| 术后3周 |
52.67±2.42△△ |
24.00±2.83△ |
28.67±1.63△△ |
0.85±0.14 |
267.20±51.33* |
149.43±11.87**△ |
n=6;与术前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与术后1周比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与术后2周比较，P＜0.05，P＜0.012.5 食管癌和贲门癌患者之间外周血T细胞亚群、sIL-2R、TNF-β水平的比较无显著意义（P＞0.05）。
3 讨论
3.1 食管癌、贲门癌患者细胞免疫功能改变的特点 研究证实［2，3］，当不同的淋巴细胞亚群在数量上和功能上发生异常时，即可导致机体免疫紊乱并诱发一系列病理变化，其中包括肿瘤的发生与发展。已证实T细胞亚群在机体抗肿瘤免疫反应中起重要的调控作用［4］，CD4+T细胞能促进效应细胞抗肿瘤作用，CD8+T细胞则主要起相反的免疫抑制作用，以CD4+/CD8+细胞比值为中心的免疫调节细胞是机体免疫状态的中心环节。本文结果显示，食管癌、贲门癌患者外周血T淋巴细胞存在改变，其特征为CD3+、CD4+细胞显著减少而CD8+细胞明显增加，CD4+/CD8+比值显著下降。分组研究表明，随着肿瘤的不断浸润扩散，CD4+细胞不断减少，CD4+/CD8+比值不断下降。与此同时，患者血清sIL-2R、TNF-β水平也发生改变，与对照组相比显著升高，并与肿瘤TNM分期相关。这与有关报道相似［5］。说明食管癌、贲门癌患者由于sIL-2R的高表达，竞争性与IL-2结合，使IL-2介导的免疫反应降低，并随着肿瘤的发展，机体的免疫功能进一步削弱。因此，sIL-2R在某种程度上可作为肿瘤负荷的标志。食管癌、贲门癌患者血清TNF-β同样由活化的T细胞产生，其生物活性将导致肿瘤细胞出血性坏死。本组资料显示，患者血清TNF-β水平较正常对照组显著增高，但实际升高值并未显示理论上应有的抗肿瘤效应，这可能是TNF-β只是机体免疫的某个环节，在机体其他免疫功能受损的情况下，TNF-β可能并不行使其抗肿瘤效应。通过研究还发现肿瘤患者的免疫功能改变与肿瘤病理细胞分型无关。
3.2 手术治疗对食管癌、贲门癌患者细胞免疫功能的影响 有研究认为［6，7］，手术对肿瘤患者的免疫功能紊乱有进一步影响。我们的研究发现，手术探查组食管癌、贲门癌患者术后1周T细胞亚群、血清sIL-2R、TNF-β水平较术前有显著改变，这符合麻醉、手术创伤导致术后患者短时间内免疫功能受到抑制这一观点［3，5］。术后第2周，各项检测指标开始有所恢复，术后第3周，各项检测指标开始接近正常对照组水平。这是因为手术解除了肿瘤对机体免疫功能的抑制，手术的“去肿瘤负荷作用”使机体免疫功能逐步恢复。但在观察期内，各项检测指标与正常对照组比较仍有显著差异。对于肿瘤广泛浸润不能切除的患者来说，由于不能切除肿瘤，机体仍处于免疫抑制状态，甚至由于手术创伤而加重免疫抑制。因此，对于晚期食管癌、贲门癌患者的手术应慎重、全面地考虑。
3.3 食管癌、贲门癌患者细胞免疫功能检测的临床意义 目前有关研究认为［6～9］，动态检测食管癌患者手术前后外周血T细胞亚群、血清sIL-2R、TNF对评估术后疗效、预后和及早发现癌复发具有重要的临床意义。本文结果表明，食管癌、贲门癌患者以T细胞介导的细胞免疫存在改变和紊乱，其紊乱程度与肿瘤的TNM分期相关。动态观察CD4+/CD8+细胞比值是临床判断食管癌、贲门癌患者宿主免疫功能的一项较敏感的指标，可作为判断食管癌、贲门癌患者免疫状态、病变程度、疗效和预后转归的免疫监测手段。血清sIL-2R、TNF-β在某种程度上可作为肿瘤负荷的标志，对于血清sIL-2R、TNF-β表达明显异常的患者，术前应全面、综合、仔细地检查分析，力争在术前明确肿瘤的浸润程度，避免不必要的手术创伤加重患者的免疫抑制。通过动态检测食管癌、贲门癌患者围术期外周血T细胞亚群、血清sIL-2R、TNF-β水平，明确了手术创伤对患者同样可引起暂时性免疫抑制。因此，我们认为术后1～3周内应避免使用免疫抑制药物。相反，在这段时间内如果能适当使用免疫增强类药物，可能会促进患者免疫功能的恢复，为术后化疗或综合治疗提供良好的基础。但T细胞亚群、血清sIL-2R、TNF-β水平的检测只能作为食管癌、贲门癌患者的免疫监测指标。
刘晓强：硕士研究生；徐五音：导师刘晓强（苏州市第四人民医院胸心外科，苏州，215001)
徐五音（苏州大学附属第一医院胸心外科)
管惟苓（苏州市第四人民医院胸心外科，苏州，215001)
朱德隆（苏州市第四人民医院胸心外科，苏州，215001)
许忠（苏州市第四人民医院胸心外科，苏州，215001）
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