膀胱癌mdr-1 mRNA表达水平及临床意义
中华泌尿外科杂志 1999年第2期第20卷 论 著
作者：周兴 刘春晓 郑少波 梅骅 郑克立 秦自科
单位：周兴 刘春晓 郑少波 510280 广州，第一军医大学珠江医院泌尿外科；梅骅 郑克立 秦自科 中山医科大学附属第一医院泌尿外科
关键词： 膀胱肿瘤；癌；药物耐受性
【摘要】 目的 探讨浅表性膀胱癌 mMC和BCG/MMC膀胱灌注疗效与 mdr-1表达的相关性。 方法 应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术，追踪检测71例膀胱癌治疗前后的 mdr-1表达量。 结果 用 mMC灌注者其复发肿瘤mdr-1表达明显增加，而用BCG/MMC灌注则无明显增加；MMC组复发率42%，复发中位时间14.5个月；而BCG/MMC组复发率为24%，复发中位时间30.5个月。 结论 MMC可诱导膀胱癌产生MDR；BCG/MMC疗效明显优于MMC，尤其对mdr-1阳性表达病例，且延缓癌细胞MDR增加。
Expression of mdr-1 gene in superficial bladder carcinoma
ZHOU Xing, LIU chunxiao,ZHENG Shaobo,et al
Department of urology,Pearl River Hospital, the First Military Medical University, Guangzhou510280
【Abstract】 Objective To investigate the correlation between intravesical drug therapy and mdr-1 gene expression in superficial bladder carcinoma. Methods In71 cases of bladder cancer,mdr-1 mRNA was quantitatively assessed both before and after treatment using RT-PCR technique. Results In the intravesical mitomycin C (MMC) group,both the recurrence rate and the mdr-1 mRNA were significantly increased but not so in the BCG/MMC group.The tumor recurrence rate in the MMC group was 42% while that of BCG/MMC group being24%.The lapse time before recurrence was 14.5 months in the MMC group and 30.5 months in the BCG/MMC group. Conclusions MMC would induce multidrug resistance of bladder carcinoma cells.BCG/MMC could retard the MDR progress in carcinoma cells and the therapeutic effect has been superior to MMC alone.
【Key words】 Bladder neoplasms Carcinoma Drug tolerance
研究表明，肿瘤细胞多药耐药基因(mdr-1)的过度表达或扩增是导致患者化疗失败的重要原因之一［1］。因此，检测mdr-1基因表达水平有可能使化疗个体化并作为一项监测病情参数而服务于临床。我们用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术追踪检测浅表性膀胱癌细胞中mdr-1 mRNA表达。在行TURBt术后将患者随机分为两组，分别行丝裂霉素(MMC)膀胱灌注和BCG、 mMC交替灌注，探讨其疗效与mdr-1 mRNA表达的相关性。
材料与方法
一、检测标本
原发性浅表膀胱癌标本71例，术前未行其他治疗，术后随访复发标本24例，所有标本均为钳夹新鲜肿瘤组织，-70℃超低温保存。
二、治疗方式
经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBt)后随机分为两组，第1组用MMC40mg膀胱灌注；第2组用BCG(120mg)与MMC(40mg)交替灌注。疗程每周一次，连续6周，后改为每月一次至1年，第2年每3个月一次。第1年3个月复查一次膀胱镜，第2年每6个月复查一次膀胱镜。平均随访时间41个月。
三、RNA的提取和定量
组织标本采用AGPC法［4］提取细胞总RNA。分光光度法测定提取的总RNA。
四、cDNA合成
取10μl的逆转录反应体系，加入待测 rNA 1μg， aMV逆转录酶10U，适量引物和 dNTP，42℃反应1小时。
五、PCR扩增
每一个PCR反应管中加入mdr-1片段和β2-微球蛋白片段各20μmol/L的引物，Taq酶5U，cDNA混合物80ng，反应体积100μl。PCR循环35周期，得到mdr-1157bp和β2-微球蛋白120bp的扩增产物。
六、PCR产物鉴定及分析
PCR扩增产物电泳后，两条产物带(mdr-1,β2-微球蛋白)分别用透析袋回收，酚、氯仿抽提，回收mdr-1和β2-微球蛋白基因片段各50ng与PUC18质粒30ng，平端连接，连接物转化到大肠杆菌JM109中扩增，快速抽提质粒后酶切筛选出重组质粒，参照T7测序盒说明进行DNA序列分析。
结 果
原发病人两组mdr-1阳性表达均为0.384±0.021，而复发病人 mMC组 mdr-1阳性为0.769±0.031(P＜0.05)；MMC/BCG组mdr-1表达为0.457±0.028(P＞0.05)。
MMC组复发率为42%，1年内复发率占44%，复发中位时间14.5个月；MMC/BCG组复发率24%，1年内复发率占12%，复发中位时间30.5个月。
讨 论
MMC或BCG膀胱灌注，是浅表性膀胱癌行TURBt术后的常规辅助治疗。也是目前防止其肿瘤复发的最有效措施之一［3，4］。然而，由于膀胱肿瘤天然多药耐药(30%)及获得性耐药性，而使MMC灌注疗效不佳。目前对实体瘤药物敏感性的预测方法有体外、体内药物敏感试验两种。但由于实验周期长，操作繁琐，预测的准确率及临床符合率均不够高。我们采用RT-PCR技术直接以临床膀胱癌患者的膀胱镜活检组织为样品，使实验本身简便快速、易于掌握，同时避免了同位素的干扰。
本研究结果初步表明MMC组复发肿瘤其mdr-1 mRNA表达水平较原发肿瘤明显增加。说明MMC可诱导膀胱肿瘤产生耐药表型，而使治疗失败。MMC组原发患者mdr-1 mRNA阳性表达者均在1年内复发。而BCG/MMC组复发肿瘤患者mdr-1 mRNA表达水平无明显增加，说明BCG与MMC交替灌注可有效防止膀胱肿瘤耐药性增加。且该组复发病例的复发时间与mdr-1 mRNA阳性表达无明显相关。 MMC组肿瘤复发率(42%)明显高于BCG/MMC组(24%)，MMC组患者肿瘤复发中位时间14.5个月，而BCG/MMC组则为30.5个月，差异显著。治疗中的副作用有血尿、膀胱刺激症状、乏力、发热、恶心等。两组各有1例出现较严重的副作用。BCG与MMC交替灌注与文献报道的单用BCG灌注相比，其复发率及复发中位时间差异无显著性，但副作用却少得多［3，5］。研究结果显示BCG与MMC交替灌注对预防浅表膀胱癌复发，其效果明显优于单用MMC，尤其对mdr-1 mRNA阳性者，最好选用BCG与MMC交替灌注。
《参考文献》
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progression and death from superficial bladder cancer:ten-year follow-up of a prospective randomized
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(收稿：1998-05-12 修回：1998-10-12)
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