肾癌及膀胱癌p21、p16、p15基因突变的检测

中华泌尿外科杂志 1999年第2期第20卷 论著摘要

作者：黄倩　陶勇浩　David W.Yandell

单位：黄倩　610041 成都，华西医科大学附属第一医院临床分子生物学实验研究中心(现在上海市第一医院中心实验室)；陶勇浩　David W.Yandell　美国佛蒙特州州立大学肿瘤中心放射科

　　p21、p16及p15基因所编码的蛋白质能抑制cdk激酶的活性，在调控细胞周期方面起重要作用，属肿瘤抑制基因。本研究探讨p21、p16及p15基因突变是否与肾癌及膀胱癌的发生或发展有关。

　　材料与方法　肾癌48例，膀胱癌42例。点突变检测采用SSCP分析和DNA序列测定技术，检测范围包括p21基因启动子及第二外显子，p16基因的第二外显子，p15基因的第二外显子。p16，p15基因缺失分析采用多重PCR技术，同时扩增p16基因的第一，二外显子和对照基因Prohibitin的第六外显子，p15基因的第二外显子和对照基因Prohibitin的第六外显子。为了进一步确定缺失范围，利用位于9p21-22区的微卫星DNA D9S162和D9S171作标记，对比分析同一患者的肿瘤与外周血DNA。

　　结　果　p21基因启动子存在二处多态性位点，分别是p53蛋白结合位点上游5bp处G→A、下游160bp处C→A的变异。于p21基因第二外显子31位密码子处尚有另一个常见的多态性位点，即C→A丝氨酸→精氨酸。仅1例膀胱癌自34位密码子起有44bp杂合型缺失突变，导致阅读框架移位，于下游二个氨基酸处提前出现终止密码。此外，另1例膀胱癌117位密码子处存在G→A半胱氨酸→酪氨酸的变异；尚有1例肾癌和1例膀胱癌36位密码子处G→A，但不改变所编码的氨基酸，上述变异均为杂合性，并同时存在于患者的白细胞DNA中。

　　p16、p15基因缺失分析表明，48例肾癌中2例呈纯合型缺失，6例呈半合型缺失；42例膀胱癌中3例呈纯合型缺失，7例呈半合型缺失。然而，p16、p15基因点突变分析仅见p16基因的58、79及127位密码子，p15基因的67、119及135位密码子有单个碱基的改变，由于同时存在于患者的白细胞DNA中，属少见的多态性。

　　微卫星DNA标记分析揭示3例肾癌和5例膀胱癌D9S162和D9S171或呈LOH或明显扩展。

　　讨　论　肾癌及膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，染色体分析常常表现出多种异常，包括9p21-22的缺失等，提示其病因和发病机理存在明显的异质性。本组48例肾癌及42例膀胱癌p21、p16及p15基因检测结果显示，仅1例膀胱癌存在p21基因点突变。但是，大约20%的肾癌和28%的膀胱癌或有p16、p15基因缺失，或存在9p21-22区微卫星DNA的不稳定性，提示这个区域可能存在与肾癌及膀胱癌发病有关的肿瘤抑制基因。鉴于未能在p16、p15基因呈半合性缺失的肿瘤中检测到残存的p16、p15基因有点突变，提示9p21-22区除p16、p15基因外其附近可能还存在其他与肾癌或膀胱癌发病有关的肿瘤抑制基因。

(收稿：1998-10-07　修回：1998-11-16)