CD₄₄v₉基因在恶性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义＊

　　中国肿瘤临床1999年第26卷第7期

姚德生　李力　唐步坚　张洁清　古明华　陈心秋

　　摘　要　目的：探讨恶性卵巢肿瘤组织中CD₄₄v₉基因表达及其临床意义。方法：用RT－PCR方法检测了41例恶性卵巢肿瘤、20例良性卵巢肿瘤和21例正常卵巢组织中CD₄₄v₉基因表达情况并分析相关的临床病理因素。结果：1)CD₄₄v₉基因表达阳性率恶性组明显高于良性组和正常组，良性组高于正常组；2)CD₄₄v₉基因表达在有转移者阳性率显著高于无转移者，转移灶阳性率高于原发灶；3)CD₄₄v₉阳性表达率与临床期别有一定关系，但与病理类型、组织学级别、预后无关。结论：1)CD₄₄v₉基因与肿瘤的发生、发展相关；2)CD₄₄v₉与卵巢恶性肿瘤的浸润和转移相关，可以作为预测肿瘤转移潜能指标。

　　 关键词：CD₄₄　PCR　卵巢肿瘤　基因表达　肿瘤转移

　　CD₄₄是一种细胞表面跨膜糖蛋白，有标准型（CD₄₄s）和变异型（CD₄₄v）二种，CD₄₄v有10个亚型，分别用CD₄₄v₁……CD₄₄v₁₀表示，有研究表明CD₄₄v₃、CD₄₄v₆参与了多种肿瘤的侵袭和转移^[1～3]，CD₄₄v₉与肿瘤侵袭和转移的关系研究较少。本研究利用逆转录PCR(RT－PCR)方法，研究了41例卵巢恶性肿瘤中CD₄₄v₉基因表达情况，并探讨其临床意义。

　　1　材料与方法

　　1.1研究对象

　　分为三组：1)恶性卵巢肿瘤组41例；年龄14～72岁，平均40岁，其中上皮性肿瘤33例（粘液性癌10例，浆液性癌11例，子宫内膜样癌2例，低分化腺癌10例）；非上皮性肿瘤8例（内胚窦瘤3例、无性细胞瘤2例、颗粒细胞瘤、未成熟畸胎瘤、睾丸母细胞瘤各1例），按FIGO1985年标准，临床Ⅰ期12例、Ⅱ期4例、Ⅲ期22例、Ⅳ期3例；2)良性卵巢肿瘤20例，其中粘液性瘤6例、浆液性瘤8例、畸胎瘤6例；3)正常卵巢组织21例，均来自子宫肌瘤同时行卵巢切除，病理证实无异常者。

　　1.2标本的采集与贮存

　　全部组织标本均在手术切除肿瘤10分钟内收集，分别取肿瘤原发病灶、转移灶各1g，分装于1.5ml　Eppendorff管后立即放入液氮中保存直至提取总RNA，同时取相应部位组织用10％福尔马林固定以作常规病理检查。

　　1.3疗效判断及随访

　　按WHO　1988年的四级评定标准，随访6个月～20个月，没有失访及意外死亡。

　　1.4RT－PCR法

　　组织总RNA的提取采用酸性异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法^[4]。cDNA合成采用美国Promega公司提供的逆转录cDNA合成试剂盒，按厂家操作规程合成，PCR扩增引物按文献^[5～7]设计，由中科院上海生物工程研究中心合成，序列为上游引物：5′－GCAGAGTAATTCTCAGAGCTTCTCTACAT－3′；下游引物：5′－TTGATGTCAGAGTAGAAGTTGTTGGATGG－3′。TaqDNA聚合酶、dNTP购自上海Promega公司、分子量参照物pGEM－7zf(＋)HaeⅢMarkers购自华美生物工程公司。每次反应均设计对照3个：1)空白对照：反应体系只加水；2)阴性对照：不加样品，余相同；3)质控对照：不加引物，余相同。PCR扩增用三步PCR法：90℃变性60秒，62℃复性30秒，72℃延伸30秒，30循环。PCR产物电泳用8％PAG电泳，用银染方法染色。与Makers对照，以出现与目的基因碱基数（86bp）相同的区带为阳性。

　　1.6数据处理

　　率的比较用χ2检验。

　　2　结果

　　2.1恶性、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中CD₄₄v₉基因表达(表1)

表1恶性、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中CD₄₄v₉mRNA阳性表达情况

　　 ＊P为恶性组与该组比较，良性组与正常组比较P=0.0478　　　从表1可以看出CD₄₄v₉mRNA基因阳性表达率恶性组高于良性组（P=0.03）和正常组（P=0.001），良性组高于正常组（P=0.0478）。

　　2.2CD₄₄v₉基因表达与临床、病理特征、预后关系

　　CD₄₄v₉基因阳性表达率在有转移或侵袭者（Ⅱ～Ⅳ期）显著高于无转移者（Ⅰ期）（P=0.008），转移灶显著高于原发灶（P=0.02），而CD₄₄v₉与病理类型、组织学级别、残留病灶大小无关（P＞0.05）见表2。CD₄₄v₉基因表达与近期疗效（CR＋PR）无关（P=0.25），见表3。

表2　CD₄₄v₉基因表达与临床、病理特征的关系

表3　CD₄₄v₉基因阳性表达与近期疗效的关系

　　3 讨论

　　 CD₄₄基因蛋白是一种分布极广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属于粘附分子，主要参与细胞－细胞、细胞－基质之间的特异性粘连过程，近年来的研究表明，在许多类型的肿瘤中CD₄₄参与了肿瘤的侵袭和转移^[1～3]。

　　3.1CD₄₄v₉与卵巢肿瘤良、恶性的关系

　　RT－PCR结果显示CD₄₄v₉基因在恶性卵巢肿瘤中阳性表达率（48.4％）显著高于良性组（20.0％，P=0.03）和正常组（0，P=0.001），良性组高于正常组（P=0.0478），即肿瘤组高于正常组，提示CD₄₄v₉基因表达可能与卵巢肿瘤发生、发展、恶性行为有关，这与Dall对乳腺癌研究的结果相似^[7]。

　　3.2CD₄₄v₉与临床期别、病理组织学类型、预后的关系

　　将临床Ⅰ期（无侵袭和转移）与Ⅱ～Ⅳ期（有侵袭和转移）比较，CD₄₄v₉在有侵袭转移组表达阳性率均比无侵袭组高（P〈0.05），表明肿瘤细胞中的 cD₄₄v₉的出现与肿瘤的侵袭和转移有关，即有基因表达者更易发生侵袭和转移，更能加速病程的发展。CD₄₄v₉表达在不同的病理类型和组织学级别之间均无显著性差异，阳性表达率与残留病灶大小、近期疗效无关，这与文献^[7～9]报道相符。

　　3.3CD₄₄v₉与侵袭和转移的关系

　　RT－PCR显示有转移组的CD₄₄v₉表达阳性率均明显高于无转移组（P=0.008），转移灶的表达阳性率显著高于原发病灶（P=0.02），说明CD₄₄v₉与卵巢肿瘤发生侵袭转移有关，有表达者较无表达者更易发生侵袭和转移，这与文献报道的其它系统肿瘤情况相符^[7～9]。其机理目前普遍认为是变异型CD₄₄作为一种透明质酸的受体，能与细胞外间质及基底膜的透明质酸结合，调节细胞的运动及形态，同时“锚”定在宿主细胞外间质及基底膜上，CD₄₄阳性细胞更易与毛细血管后小静脉中的高柱状内皮细胞结合，使肿瘤更易进入淋巴系统和循环系统，同时透明质酸降解产物还能启动血管的发生，为侵袭转移奠定基础，这些因素均能使CD₄₄v₉阳性肿瘤细胞获得更强的侵袭和转移能力^[7,8,10,11]。＊本文课题受国家自然科学基金资助(编号39560081)

　　作者单位：广西医科大学肿瘤医院（南宁市530021）

参考文献

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