血管内皮生长因子的检测在冠心病患者中的意义^①

　　中国免疫学杂志2000年第16卷第2期

钱孝贤　吴伟康　郑振声　余步云　汤美安

　　摘　要：目的：为了探讨血管内皮生长因子(VEGF)的检测在冠心病患者中的意义。方法：应用双抗夹心ELISA法检测了55例冠心病(CHD)患者和34例正常对照者的血清VEGF水平。结果：CHD患者血清VEGF水平（498.98±304.50） pg/ml明显高于正常对照组（121.49± 30.29 ）pg/ml，P＜0.01；其中急性心肌梗塞（AMI）患者组血清VEGF水平（809.21±191.16） pg/ml明显高于心绞痛患者组（292.14±148.56） pg/ml，P＜0.01，而且两者均高于正常对照组。结论：提示VEGF可能是反映心肌缺血的敏感指标。

　　关键词：血管内皮生长因子　急性心肌缺血　心肌梗塞　心绞痛

　　血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）是1989年从培养的牛垂体滤泡星状细胞中分离出的一种多肽，它可促进新生血管的形成，因此受到医学界重视^［1］。大量的动物实验证明VEGF可促进缺血组织的血管再生、改善血液供应、缓解症状、在治疗缺血性疾病方面具有较好前景^［2，3］。但是，VEGF的临床研究刚刚开始，在冠心病患者中的意义探讨则更少，国外仅有少量病例报道，国内目前少见这方面的研究，本文应用双抗夹心ELISA法检测了55例冠心病(Coronary heart disease,CHD)患者血清VEGF的水平，探讨其在冠心病发病机制中的意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　研究对象　CHD患者来自本院的住院病人，共55例，均符合WHO cHD的诊断标准,其中心绞痛患者33例，男18例，女15例，年龄45～70（57±12）岁，病程3～10年；急性心肌梗塞（AMI）患者22例，男14例，女8例，年龄40～65（60±9）岁，病程2～7年。对照组：体检健康者34例，男19例，女15例，年龄28～55（45±8）岁，性别、年龄与疾病组无显著性差异。

　　1.2　方法

　　1.2.1　采血方法　心绞痛患者和对照组均于清晨空腹抽取静脉血，AMI患者入院时即刻采血，血标本在抽血后30 min内低温离心分离血清，分装置于-70℃冰箱中保存待检。

　　1.2.2　检测方法　VEGF检测试剂购于R&D Systems，采用双抗夹心ELISA法，步骤简述如下：在已包被鼠抗人VEGF单克隆抗体的聚丙乙烯96孔酶标板中，每孔加入100μl样本稀释液，再分别加入标准品和待检血清100 μl，其中标准品VEGF165含量等倍稀释，浓度为2000，1 000，500，250，125，62.5，31.5 pg/ml，以稀释液为空白对照，所有标本均设双孔检测。加样后置室温2 h，充分洗涤3次，甩干；每孔分别加入标记辣根过氧化氢酶的抗人VEGF多克隆抗体200μl，置室温2 h，充分洗涤3次，甩干；分别加入底物100 μl，显色15 min；加入2 mol/L的硫酸50 μl终止反应；在酶标仪上波长为450 nm波段测定各孔的光密度值，以VEGF标准品浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，做直线相关回归，根据待测标本的光密度值在直线上查出相应的VEGF含量。

　　1.2.3　统计方法　 样本均数用（X±s）表示，两组之间均数比较用t检验，多组间均数比较用单因素方差分析。

　　2　结果

　　CHD、心绞痛和AMI组患者血清VEGF水平均高于正常组，而且AMI患者组血清VEGF水平高于心绞痛患者组（见表1）。

表1　CHD、心绞痛和AMI患者血清VEGF水平

　　Tab.1　The serum VEGF levels of CHD, angina and AMI patients

Note: Compared with control，1) P＜0.01, 2) p＜0.05;compared with angina,3) P＜0.01

　　3　讨论

　　VEGF是近年来发现的一种促血管生长因子，是分子量为35～45 kD的糖蛋白，由2个分子量为17～22 kD的相同亚单位经过二硫键形成的二聚体^［4］。人至少有4种VEGF，分别由121、165、189和206个氨基酸组成，其中VEGF189和VEGF 206分泌后即与细胞膜、基底膜或细胞外基质中含肝素的糖蛋白结合，测不出游离成分；VEGF121以游离的形式存在；VEGF 165则以上述2种形式存在，是发挥生物学效应的主要成分^［4］。心肌细胞、平滑肌细胞以及一些肿瘤细胞均可分泌VEGF，缺血（缺氧）是刺激VEGF分泌的重要因素^［5］。

　　本研究结果发现CHD患者血清VEGF水平明显高于正常组（P＜0.001），特别是AMI患者血清VEGF明显高于心绞痛患者（P＜0.001），两者血清VEGF水平均高于正常组的水平，提示VEGF可能是反映心肌缺血的敏感指标。有研究发现AMI患者血清VEGF明显增高，当溶栓再通后其水平可恢复正常，从而认为VEGF对缺氧（缺血）的敏感性较高^［6］。本研究发现，心肌缺血严重的AMI患者血清VEGF水平明显高于心肌缺血较轻的心绞痛患者，所得结果与上述研究的结论相吻合。

　　由于VEGF的检测方法不太复杂，血标本采集方便，VEGF有可能成为临床上一种新的反映心肌缺血的指标。

　　①广东省卫生厅科研基金项目（批准文号A1998189)

　　作者简介：钱孝贤，男，31岁，主治医师，博士生，主要从事心肌缺血发病机制的研究；

　　吴伟康，男，51岁，教授，博士生导师，主要从事心肌缺血的病理生理研究作者单位：钱孝贤（中山医科大学第三临床学院心内科　广州　510630）

　　吴伟康（中山医科大学病理生理学教研室，广州510630）

　　郑振声（中山医科大学卫生部辅助循环重点实验室，广州510630）

　　余步云（中山医科大学第三临床学院心内科　广州　510630）

　　汤美安（中山医科大学第三临床学院心内科　广州　510630）

　　参考文献：

　　［1］Ferrara N, Henzel W J. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells. Biochem Biophys Res Commun， 1989; 161(2): 851

　　［2］Banai S, Taklitsch M T, Shou M et al. Angiogenic-induced enhancement of collateral blood flow to ischemic myocardium by vascular endothelial growth factor in dogs. Circulation， 1994; 89(5): 2183

　　［3］Bauters C, Asahaha T, Zheng L P et al. Recovery of disturbed endothelium-dependent flow in the collateral-perfused rabbit ischemic hindlimb after administration of vascular endothelial growth factor. Circulation，1995;91(11): 28023

　　［4］ Ferrara N, Henzel W J, Jakeman L et al. The vascular endothelial growth factor family of polypeptides. J Cell Biochem， 1991; 47: 211

　　［5］ Bunai S, Shweiki D, Pinson A et al. Upregulation of vascular endothelial growth factor expression induced by myocardial ischemia: implications for coronary angiogenesis. Cardiovasc Res， 1994; 28(8): 1176

　　［6］ Seko Y, Imai Y, Suzki S et al. Serum levels of VEGF in patients with acute myocardial infarct undergoing reperfusion therapy. Clin Sci Colch， 1997;92(5): 453