三种抗原检测抗幽门螺杆菌抗体的临床意义评价

中国免疫学杂志 1999年第2期第15卷 免疫学技术与方法

作者：干小仙　丁建祖　沈慧英　沈丽英　陈一平

单位：干小仙　丁建祖　沈慧英　沈丽英　(浙江省医学科学院，杭州310013)；陈一平　(浙江省德清市第二人民医院，德清313200)

关键词：幽门螺杆菌；抗原；斑点金标免疫渗滤法

　　中国图书分类号　R392-33

　　摘　要　目的：寻求敏感性高、特异性强的HP抗原和简便、可靠的检测HP抗体的方法，用于诊断HP感染。方法：分别以HP尿素酶、全菌破碎物、培养上清液为抗原。采用斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)检测HP培养、病理组织学检查、尿素酶试验均阳性和均阴性的血清各50份；胃镜检查各类胃病患者血清258份，并以ELISA试剂盒做平行检测对照。结果：三种抗原的敏感性分别为100%、96%和76%；50份阴性血清的阴性符合率分别为98%、92%和64%；258份各类胃病的抗体检出率分别为61%、62%和52%；与ELISA符合率各为98.8%、96.5%和58.9%。将抗原浓度稀释至0.05 mg/ml时，尿素酶抗原和全菌破碎物抗原的特异性抗体检出率仍达85%和75%。培养上清液抗原的敏感性和特异性明显低于前二种抗原(P＜0.01)。尿素酶抗原和全菌破碎抗原的敏感性和特异性明显低于前二种抗原(P＞0.05)。结论：提示该全菌破碎物抗原用于DIGFA检测HP抗体、敏感性高、特异性强，且简便、快速、无需任何仪器设备。适合于临床和流行病学调查应用。

Evaluation on the clinical diagnosis of various HP antigens for detection of anti-HP antibodies by DIGFA

　　Institute of Parasitic Diseases,Zhejiang Academy of Medical Sciences,Hangzhou 310013

　　Abstract　Objective:To select available Helicobacter pylori(HP)antigens and develop a simple and reliable assay for detection of HP infection,with high sensitivity and specificity.Methods:Urease,crude abstract of whole HP,supernatant of HP culture were used as antigens to detect anti-HP antibodies in serum by Dot Immunogold Filtration Assay(DIGFA).50 sera from patients infected with HP,50 sera from normal adult and 258 sera from out-patients with various stomach troubles were tested using three antigens by DIGFA,respectively and paralleled with results of ELISA kit.Results:Sensitivities of three antigens were 100%,96% and 76%,specificities of them were 98%,92% and 64%,respectively.Positive rates of 258 sera from out-patients were 61%,62% and 52% when detected using three antigens.Coincidental rate with ELISA were 98.8%,96.5% and 58.9%,when the concentration of antigens was 0.05 mg/ml,the positive predictive rates using urease,crude abstract antigens were still as high as 85% and 75%.The sensitivity and the specificity of supernatant of HP culture antigen were significantly lower than those of urease antigen and crude abstract antigen(P＜0.01).There is no significant difference between those of urease and crude abstract antigens(P＞0.05).Conclusion:It suggested that the crude abstract of whole HP is an available antigen with high sensitivity and specificity for detection of HP infection by DIGFA,which is fitful to clinical diagnosis and epidemiological investigation.

　　Key words　Helicobacter pylori　Antigen　DIGFA

　　幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染的诊断方法近年来有了很大进展，特别是血清学检测方法，因其为非侵入性检查方法，并且经济简便而倍受重视，所用抗原的特异性是关系到此方法诊断符合率高低的关键。为此，我们取实验室制备的三种抗原，用金标免疫渗滤法(Dot Immunogold Filtration Assay, DIGFA)进行HP抗体的对比检测。

　　1　材料与方法

　　1.1　HP菌液　由浙江医科大学微生物学教研室方平楚教授惠赠。

　　1.2　抗原制备

　　1.2.1　尿素酶抗原，略加改良提纯^［1］，HP菌液用洗脱液(0.05 mol/L Tris-HCl，pH8.0)稀释至适当浓度，经超声粉碎后，高速离心取上清液，然后用Sephadex G-200(Pharmacia公司)过柱，收集其活性峰，经浓缩后，-20℃保存备用。

　　1.2.2　HP全菌破碎物抗原将HP悬液置-20℃，反复冻融3次，冷浸3 d，用超声波粉碎后，经高速离心，取上清液即可。

　　1.2.3　HP培养上清液抗原，取HP悬液上清液，经微孔膜(φ0.23 μm)过滤，滤液经高速离心，取上清液于-20℃保存。

　　1.3　血清样本

　　1.3.1　HP阳性血清、阴性血清各50份，由浙江医科大学附属第二医院提供。血清质控标准：HP培养、胃粘膜组织涂片检查、尿素酶试验3项指标中，有2项以上阳性者为阳性，三者皆阴性者为阴性。

　　1.3.2　内窥镜检查患有各类胃病病人血清258份，由德清市第二人民医院提供。

　　1.4　检测方法及操作流程　按沈丽英等报道的DIGFA进行^［2］，用幽门螺杆菌ELISA试剂盒(深圳晶美生物工程公司，进口)做检测对照，操作按说明进行。

　　2　结果

　　2.1　敏感性、特异性比较　实验选择HP阳性、阴性血清各50份，用3种抗原进行HP抗体测定，结果显示，尿素酶、HP全菌破碎物及上清液抗原的敏感性依次为100%、96%和76%；特异性分别为98%、92%和64%(表1)。将三种抗原的检测结果分别做两两比较，经χ²检验，其敏感性和特异性在尿素酶和细菌破碎物抗原之间无显著性差异(P＞0.05)。但培养上清液抗原与前二种抗原比较，差异具有非常显著性意义(P＜0.01)。

表1　三种抗原检测抗HP抗体的敏感性、特异性(n=50)

　　Tab.1　Sensitivity and specificity in detection of anti-HP antibodies using 3 antigens(n=50)

　　2.2　不同抗原浓度比较　取HP阳性血清20份，血清浓度不变，将抗原稀释成0.25、0.20、0.15、0.10和0.05 mg/ml，分别取1 μl在硝酸纤维素膜上点样，然后按上述操作流程检测HP抗体，结果见表2。在不同浓度下，前二种抗原对HP特异性抗体检测结果无明显差异(P＞0.05)。当抗原浓度为0.05 mg/ml时，检出率仍达85%和75%。而HP培养上清液抗原浓度下降，其特异性抗体的检出率明显下降，至0.05 mg/ml时，检出率为零。

　　2.3　3种抗原对内窥镜检查患有各类胃病的患者血清抗体检测结果　本组258例，用不同抗原分3组进行DIGFA测定，同时用ELISA试剂盒(进口)检测做比较，结果见表3。

表2　不同浓度抗原DIGFA检测HP抗体结果(n=50,mg/ml)

　　Tab. 2　The effect of various concentrations of antigens on detection of anti-HP antibodies by DIGFA(n=50，mg/ml)

表3　258例内窥镜检查患者DIGFA检测结果与ELISA比较

　　Tab.3 Comparison between results of 258 cases gastroscopied by DIGFA and ELISA

　　3　讨论

　　3.1　尿素酶抗原的纯化可用离心和层析等方法得到纯度不同的尿素酶^［3，4］，本研究用Sephadex G-200过柱获得的尿素酶抗原检测HP抗体，其敏感性达100%，特异性为98%，比HP全菌破碎物抗原和HP培养上清液抗原为高。这与Mobley等报道基本一致^［5］。说明HP尿素酶为HP共有的特异性抗原成分，因此血清中该抗原的特异性抗体测定，在检测与HP相关性胃炎的诊断中尤其重要。

　　3.2　据Perez-Perez等报道，用HP全菌超声粉碎抗原检测HP抗体的特异性达94.4%，敏感性为93.1%^［6］，我们的结果与之相近，当抗原稀释至0.05 mg/ml时，其敏感性仍达75%，说明该粗制HP抗原在高敏感检测系统中仍能取得比较满意的结果，并且制备简单、得率高。

　　3.3　纯化尿素酶和HP全菌破碎物抗原与进口的标准ELISA试剂盒比较，检测符合率分别为98.8%和96.5%，而培养上清液与其检测符合率较低，仅78.9%。提示前二种抗原的DIGFA法检测HP感染的灵敏度与进口试剂接近，并且DIGFA简易、快速、敏感、特异性高，不需任何仪器，所以较适合于临床及基层医院和流行病学调查应用。

　　作者简介：干小仙，女，33岁，副研究员

　　4　参考文献

　　1　陈晶晶，杨昭徐，蒋秀高.幽门螺杆菌全菌抗原与尿素酶纯化抗原ELISA检测在人群血清学诊断中的应用.中华流行病学杂志，1996；17(1):44

　　2　沈丽英，宋振亚，陈一平 et al.检测幽门螺杆菌抗体的金标免疫渗滤法的建立及应用.浙江实用医学，1997；2(4):14

　　3　Dunn B E, Campbe G P, Perez-Perez G I. Purification and characterization of urease from Helicobacter pylori. J Bio Chem，1990;265(16):9464

　　4 Hu L T, Harry L, Mobley T et al. Purification and N-terminal analysis of urease from Helicobacter pylori. Infect Immun， 1990;58(4):992

　　5 Mobley H L T, Cortesia M J, Rosenthal L E et al. Characterization of urease from campylobacter pylori. J Clin Microbiol，1988;26(5):831

　　6 Perez-Perez G I， Blaser M J. Conservation and diversity of Campylobacter pyloridis major antigens. Infect Immun，1987;55(5):1256

〔收稿1998-02-19　修回1998-09-10〕