末梢血快速测定幽门螺杆菌IgG抗体
世界华人消化杂志 1999年第9期第7卷 临床经验
作者:杨燕 侯淑萍 孙军强
单位:中国人民解放军空军86513部队医院 天津市 300074
关键词:螺杆菌,幽门;抗体,细菌/ 分析;胃炎;胃溃疡
中国图书馆分类号 R 573.2
Subject headings helicobacter pylori; antibody, bacterial/ analysis; gastritis; stomach ulcer
目前用于Hp诊断的方法很多,如创伤性的有快速尿素酶试验(RUT)、组织病理切片染色、分离培养、聚合酶链反应(PCR)及其相关技术. 非创伤性的有血清学、尿素呼气试验. 下面是我院引用美国Bioage公司原料加工制成非创伤性的采用末梢血(40 μL)快速检测幽门螺杆Hp-IgG抗体.
1 材料和方法
1.1 材料 1998-04/ 10因上消化道症状来我院胃肠门诊就诊,并行内镜检查的胃炎或消化性溃疡患者150例,其中男102例,年龄17岁~77岁,平均47岁. 女48例,年龄21岁~76岁,平均49岁. 全部病例既往均未进行过系统的杀灭Hp的治疗,并且1 mo内未服用过抗生素及铋剂等影响检测结果的药物.
1.2 方法
1.2.1 Hp-IgG检测卡 引进美国Bioage公司原料加工而成的Hp-IgG检测卡,用毛细管吸取被检患者(无名指、耳垂均无冻伤等外部炎症)末梢血40 μL加入测试卡上,5min后于“视窗”中观察结果. 被检血样中的Hp-IgG抗体与试验卡中的Hp高分子量的菌体蛋白抗原、染料结合,形成抗原-抗体附合物并被测试区的抗该复合物的抗体捕捉结合呈现红线. 如标本中无Hp抗体则测试区只结合反应区内的兰色素而形成兰线,即“视窗”内如果同时显示红线和兰线为阳性,只显示兰线为阴性. 没有任何标志出现者为失效,应重新更换测试卡测试.
1.2.2 间接ELISA法 抽取静脉血2 mL,待凝固后离心分离血清备用. 试剂盒由广东珠海丽珠集团、丽珠试剂厂生产,经过加样、水浴、冲洗后测得,用酶标仪于450 mm处读数,吸光度小于临界值为阴性,大于临界值为阳性.
1.2.3 快速尿素酶法(RUT) 试剂盒由福建三强生物化工公司出品. 内镜于胃窦、胃体部各取粘膜活检并放入检测井中,加入检测试剂后5min~10min内观察结果. 出现红颜色为阳性,无色为阴性.
1.2.4 组织涂片染色法 内镜活检标本(与尿素酶法活检部位相同)于玻片上制成涂片,革兰染色,油镜下观察. 见到革兰染色阳性的“S”形或“海鸥”形的典型的弯曲菌样细菌为阳性,否则为阴性.
2 结果
按照4种方法各自的阳性标准,Hp感染的检出情况如表1. 按照目前公认的满足条件,制订本研究的Hp阳性诊断标准为:①涂片见大量典型的“S”形或“海鸥”形的弯曲样细菌者;②涂片见少量典型的弯曲样细菌+RUT或ELISA法阳性者;③RUT和ELISA法同时阳性者,与Hp阳性标准比较,4种方法的检出准确性见表2.
表1 Hp感染的检出情况 (n)
方法 |
测试卡 |
ELISA |
RUI |
涂片 |
Hp(+) |
108 |
110 |
102 |
108 |
Hp(-) |
42 |
40 |
48 |
42 |
合计 |
150 |
150 |
150 |
150 |
表2 Hp感染检出的准确性
方法 |
阳性 |
假阳性 |
阴性 |
假阴性 |
敏感性(%) |
特异性(%) |
测试卡 |
99 |
6 |
40 |
5 |
95.6 |
87.1 |
ELISA |
99 |
7 |
39 |
5 |
95.6 |
83.9 |
RUT |
91 |
0 |
47 |
12 |
88.4a |
79.5a |
涂片 |
104 |
1 |
45 |
0 |
100.0 |
96.8 |
aP<0.05(U>1.9600),vs 涂片、试条、ELISA法. 测试卡检测 Hp感染的阳性预测值为94%,阴性预测值为90%,与涂片法比较符合率为92%,与ELISA法比较符合率为99%.
3 讨论
测试卡测定Hp-IgG所用抗原是直接从培养的Hp中分离提取的多种高分子量的菌体蛋白,与其他弯曲菌,如空肠弯曲菌、胎儿弯曲菌、大肠杆菌等均无交叉反应. 对血液中Hp抗体测定的敏感度和特异度皆高,分别为95.6%与87.1%,证实此法对中国人群中Hp测定的敏感度和特异度均很高,它具有耗时少(5min),准确度高、价廉、患者痛苦极小,与其他快速测定Hp抗体的方法比较,有用血量少(40 μL)省时(全过程只需5min~10min)敏感度高(95.6%),特异度(87.1%)高,因此在临床上对卫生设备简陋地处边远地方的小医院应用适合,尤其适合少年儿童、体弱多病的老年患者. 可作为筛选检查及大规模的Hp感染的流行病学调查和Hp根除后的定期随访.
通讯作者 杨燕
收稿日期 1999-05-08