CD₄₄v3基因蛋白在恶性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义^＊

　　中国肿瘤临床1999年第26卷第8期

姚忠强　李力　覃思繁　姚德生　陈发龙　罗元

　　摘　要　目的：探讨CD₄₄v3基因在卵巢恶性肿瘤组织中的表达情况及其临床意义。方法：用免疫组织化学S－P法，检测41例恶性卵巢肿瘤、20例良性卵巢肿瘤和21例正常卵巢组织中CD₄₄v3基因蛋白的表达情况并分析相关的临床病理因素。结果：1)CD₄₄v3表达阳性率恶性组显著高于良性组和正常组；2)有转移者CD₄₄v3阳性率显著高于无转移者，转移灶阳性率高于原发灶；CD₄₄v3阳性表达者近期疗效比阴性者差；3)CD₄₄v3阳性表达率与临床期别有一定关系，但与病理类型、组织学级别无关。结论：1)CD₄₄v3与肿瘤的发生、发展相关；2)CD₄₄v3与卵巢恶性肿瘤的浸润和转移相关，可以作为预测肿瘤转移潜能指标；3)CD₄₄v3与近期疗效有关，可作为评估预后的指标。

　　关键词：CD₄₄　卵巢肿瘤　免疫组织化学　肿瘤转移

　　CD₄₄是一种细胞表面跨膜糖蛋白，有两种类型，一是标准型的CD₄₄（CD₄₄S）、二是变异型CD₄₄（CD₄₄v），变异型CD₄₄有10个亚型，分别用CD₄₄v1……CD₄₄v10表示，最近的研究表明CD₄₄v参与了多种肿瘤的浸润和转移^[1～3]。为了解CD₄₄v3表达与恶性卵巢肿瘤之间的关系，我们应用免疫组织化学方法，研究了41例卵巢恶性肿瘤中CD₄₄v3基因蛋白表达情况，并探讨其临床意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　对象

　　分为3组：1)恶性卵巢肿瘤组41例；年龄14～72岁，平均40岁。其中上皮性肿瘤33例（粘液性癌10例，浆液性癌11例，子宫内膜样癌2例，低分化腺癌10例）；非上皮性肿瘤8例（内胚窦瘤3例，无性细胞瘤2例、颗粒细胞瘤、未成熟畸胎瘤、睾丸母细胞瘤各1例），按FIGO1985年标准，临床Ⅰ期12例、Ⅱ期4例、Ⅲ期22例、Ⅳ期3例；2)良性卵巢肿瘤20例（粘液性瘤6例、浆液性瘤8例、畸胎瘤6例）；3)正常卵巢组织21例，均来自子宫肌瘤同时行卵巢切除，病理证实无异常者。

　　1.2　试剂

　　鼠抗人CD₄₄v3单抗，R＆D公司产品，购自北京中山生物工程公司，链霉素蛋白－过氧化酶连接法（SP法）试剂盒均购自福州迈新公司。

　　1.3　方法(S－P法)

　　标本以10％福尔马林固定，石蜡包埋，切片（厚5μm），进行S－P法免疫组化染色，按试剂盒说明操作。

　　1.4　染色系统对照

　　用正常兔血清及PBS代替一抗作阴性对照，用已知CD₄₄v3阳性的乳腺癌组织作阳性对照。

　　1.5　阳性标准

　　在显微镜下观察，以细胞膜或细胞浆或细胞核中有棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞，无棕黄色者为阴性细胞，按文献[4]标准评定强度。

　　1.6　数据处理

　　率的比较用χ²检验。

　　2　结果

　　2.1　恶性、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中CD₄₄v3阳性表达情况(表1)

表1　恶性、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中CD₄₄v3阳性表达情况

类别	n	阳性例数（％）
恶性	41	17(41.5)
良性	20	1(5.0)＊
正常	21	0(0.0)＊

　　＊为恶性组与该组比较P＜0.05,良性与正常组比较P＞0.05

　　从表1可以看出CD₄₄v3基因蛋白阳性表达率恶性组高于良性组（P=0.003）和正常组（P=0.0005），良性组与正常组无明显性差别（P=0.3）。

　　2.2　CD₄₄v3阳性表达与临床、病理特征、预后的关系

　　免疫组化结果显示，CD₄₄v3阳性表达率在有转移或浸润者（Ⅱ～Ⅳ期）高于无浸润转移者（Ⅰ期）（P＜0.05),残留病灶＞2cm者阳性表达率显著高于≤2cm者（P＜0.01),转移灶阳性表达率显著高于原发灶(P=0.01),而CD₄₄v3与病理类型及组织学级别无关(P＞0.05），见表2。免疫组化显示CD₄₄v3阴性表达者治疗近期有效率（CR＋PR）显著高于阳性者（P=0.01），见表3。

表2　CD₄₄v3阳性表达与临床、病理特征的关系

类别	总例数	阳性例数（％）	P
临床期别
Ⅰ期	12	2(16.7)
Ⅱ～Ⅳ期	29	15(51.7)	0.038
病理类型
上皮性	33	17(51.5)
非上皮性	8	5(5/8)
组织学级别
1	4	2(2/4)
2	27	11(40.7)
3	10	4(40.0)
残留病灶(cm)
≤2	26	7(26.9)	0.01
＞2	15	10(66.7)
病灶
原发灶	41	17(41.5)
转移灶	23	17(73.9)

表3　CD₄₄v3阳性表达与近期疗效的关系

类别	n	近期疗效（CR＋PR）
		n(％)	P
CD44v3(＋)	17	9(52.9)
(－)	24	21(87.5)	0.01

　　3　讨论

　　3.1　CD₄₄v3与卵巢肿瘤良、恶性的关系

　　CD₄₄基因蛋白是一种分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属于粘附分子，主要参与细胞－细胞、细胞－基质之间的特异性粘连过程。近年来的研究表明，在许多类型的肿瘤中，CD₄₄参与了肿瘤的浸润和转移^[1,3]。免疫组化结果均显示CD₄₄v3在恶性卵巢肿瘤中表达阳性率显著高于良性组和正常组（P＜0.05),良性组与正常组间无明显差异(P＞0.05），提示CD₄₄v3基因表达与卵巢癌的恶性行为有关，这与Dall，Kallakury等对其它肿瘤的研究结果相似^[3,5]。

　　3.2　CD₄₄v3与临床特征、病理组织学类型的关系

　　免疫组化结果均显示，CD₄₄v3在有浸润转移组（Ⅱ～Ⅳ期）表达阳性率均比无浸润转移组（Ⅰ期）高（P＜0.05),转移灶的阳性率显著高于原发病灶(P=0.01),表明肿瘤细胞中CD₄₄v3的出现与肿瘤的浸润转移有关,即阳性表达者更易发生浸润和转移，更能加速病程的发展。这与文献报道的其它系统肿瘤情况相符^[3,5]。其机理目前普遍认为是变异型CD₄₄作为一种透明质酸的受体，能与细胞外间质及基底膜的透明质酸结合，调节细胞的运动及形态，同时“锚”定在宿主细胞外间质及基底膜上，CD₄₄阳性细胞更容易与后毛细小静脉中的高柱状内皮细胞结合，使肿瘤更容易进入淋巴系统和循环系统，同时透明质酸降解产物还能启动血管的发生，为侵袭转移奠定基础，这些因素均能使CD₄₄v3阳性肿瘤细胞获得更强的浸润和转移能力^[3,6]。CD₄₄v3表达在不同的病理类型和组织学级别之间均无显著性差异。

　　3.3　CD₄₄v3阳性表达与手术残留病灶大小和预后的关系

　　免疫组化结果显示，CD₄₄v3在残留病灶直径＞2cm肿瘤中表达阳性率明显高于直径≤2cm（P＜0.01),其机理可能是CD₄₄v3阳性者更易发生浸润转移,转移灶多、生长快、易融合，处在的临床期别晚，以至手术难以完全切除。CD₄₄v3阴性者治疗有效率（CR+PR）比阳性者高（P＜0.05),因而可以作为评估疗效和预后的指标。

　　＊本文课题受国家自然科学基金（编号3956081）及广西科技厅（桂科配9631012）资助

　　作者单位：广西医科大学肿瘤医院（南宁市　530021）

参考文献

　　1　Wielenga VJM,Heider KH, Offerhaus GJA,et al. Expression of cD₄₄ variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression.Cancer Res,1993;53:4754

　　2　Mayer B, Jauch KM, Gunthert U, et al. De novo expression of CD₄₄ and survival in gastric cancer.Lancet,1993;342:1019

　　3　Dall P,Heider KH, Sinn HP, et al. Comparison of immunohistochemistry and RT－ pCR for detection of CD₄₄－ expression:a new prognostic factor in human breast cancer. Int J Cancer,1995;60:471

　　4　Ristamki R,Anssuu H,Ovesoderstrom K,et al. CD₄₄V6 expression in non－ Hodgkin's lymphoma. J Pathol,1995;176:259

　　5　Kallakury BV, Yang F, Figge J,et al. Decreased levels of CD₄₄ protein and mRNA in prostate carcinoma, correlation with tumor grade and ploidy. cancer,1996;78:1461

　　6　Haynes BF, Telen MJ, Hale LP. CD₄₄－ A molecule involved in leukocyte adherence and T－ cell activation. Immunol Today,1989;10:423