子宫内膜异位症并不孕患者腹腔液淋巴细胞及其白细胞介素-2的变化

中华妇产科杂志 1998年第1期第33卷 论著

作者：张淑芝 王慧贤 孟藏者

单位：050000 石家庄，河北医科大学第二附属医院妇产科(张淑芝)；河北医科大学微生物学教研组免疫室(王慧贤)；白求恩国际和平医院妇产科(孟藏者)

关键词：子宫内膜异位症；；不育；女(雌)性；；白细胞介素-2；；淋巴细胞转化

　　 【摘要】 目的 探讨腹腔液中淋巴细胞转化活性及其释放白细胞介素-2(IL-2)的含量与子宫内膜异位症患者不孕的关系。方法 采集15例子宫内膜异位症不孕患者(异位症组)及13例健康生育妇女(对照组)的腹腔液，用形态学观察法测定腹腔液中淋巴细胞转化活性，以生物活性检测法测定腹腔液、腹腔液中淋巴细胞培养上清液的IL-2含量。结果 异位症组淋巴细胞转化率较对照组明显增高(P〈0.001)；异位症组腹腔液及淋巴细胞培养上清液中IL-2的活性明显高于对照组(P〈0.01, P〈0.001)。异位症组淋巴细胞转化率与淋巴细胞培养上清液中IL-2活性有明显的直线正相关(P〈0.001)。结论 IL-2的含量增加可能是异位症不孕的重要因素。

　　Alteration of peritoneal Lymphocyte Transformation and its Interleukin-2 release inPatients with Infertility and Endometriosis zhang Shuzhi,Wang Huixian, Meng Cangzhe.The Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang050000

　　【Abstract】 Objective To study the relationship between alteration of peritoneallymphocyte transformation activity, its interleukin-2(IL-2) release and infertility associatedwith endometriosis. Methods Peritoneal fluid was collected from 15 infertile patients with endometriosis (endometriosis group) and 13 normal fertile women (control group).Lymphocyte transformation activity were determined in peritoneal fluid by morphometry.IL-2 contents were determined in peritoneal fluid and supernatants of cultured pelviclymphocytes by biological method. Results Lymphocyte transformation activityreinforced (P〈0.001) and IL-2 contents increased in peritoneal fluid and supernatantof cultured pelvic lymphocyte in the endometriosis group than those in the control group(P〈0.01, P＜0.001 respectively). There is significant positive correlation between lymphocyte transformation rate and IL-2 activity of cultured supernatant in endometriosisgroup (P?.001). Conclusion The increase of iL-2 content in the samples of endometriosis may play an important role in infertility with endometriosis.

　　【Key words】 Endometriosis infertility, female Interleukin-2 Lymphocyte transformation

　　子宫内膜异位症(异位症)是不孕的常见病因之一。除一部分异位症妇女受孕过程遭受机械性干扰外，其引起不孕的确切原因，特别是轻微异位症，至今仍不十分清楚。有学者认为可能与免疫因素有关，一些细胞因子与本病发生、发展及引致不孕有重要的关系^［1］。本研究通过分析异位症并不孕患者腹腔液淋巴细胞转化活性及腹腔液、腹腔液中淋巴细胞培养上清液的白细胞介素-2(IL-2)的变化，探讨T淋巴细胞的机能变化与异位症不孕之间的关系。

资料与方法

　　一、研究对象

　　随机选取1993年1月至1993年7月在我院妇产科住院患者。其中子宫内膜异位症不孕者(异位症组)共15例，均经B型超声、诊断性刮宫、基础体温测定、输卵管通液术，男方精液分析等检查，排除了生殖器官发育不良、输卵管阻塞、内分泌失调、男方不育等因素，经腹腔镜检查确诊为异位症，不孕时间均在两年以上。按1985年美国生殖协会的分期标准分期^［2］，Ⅰ期者6例，Ⅱ期者9例。对照组为健康生育期要求绝育的妇女，共13例，均曾足月分娩两次。

　　异位症组与对照组年龄为33.6±6.6岁(±s，下同)，32.8±4.0岁，经统计学处理，两者差异无显著性。

　　二、方法

　　1.腹腔液采集：均在月经周期的第7～13天。在腹腔镜直视下，以无菌操作技术抽吸异位症组及对照组妇女的腹腔液。将所取腹腔液离心，取沉积细胞计数与培养，吸取离心后腹腔液-20℃冻存，待测IL-2活性。

　　2.IL-2诱生：取腹腔液沉积细胞用Hanks液洗涤两次，然后将其置入含有10%小牛血清的细胞培养基(RPMI 1640，美国GIBCO公司产品，型号14072)中，经37℃温箱孵育1小时，使贴壁的细胞与未贴壁的细胞分开。将未贴壁的细胞取出置入含10μg/ml刀豆素A(ConA,美国Sigma公司产品)及10%小牛血清的RPMI 1640培养基中，按2×10⁶个/ml细胞配成淋巴细胞悬液，37℃培养48小时，收取培养上清液，待测IL-2活性。

　　3.IL-2活性的测定^［３］：将DBA/2小鼠脾脏磨碎后配成5×10⁶个/ml单细胞悬液，加入含ConA 10 μg/ml及含10%小牛血清的RPMI 1640的培养基，37℃培养48小时后，制得IL-2反应细胞。将上述反应细胞配成1×10⁶个/ml的细胞浓度，加入96孔板，每孔100μl，再分别加入待测IL-2的腹腔液和淋巴细胞培养上清液100μl，每份标本重复2孔。放入37℃二氧化碳培养箱中培养48小时，在培养结束前8小时，加入0.5μCi/50 μl ³H-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR，购自中国科学院原子能研究所)。培养结束后，用多头细胞收集器收获细胞至49型玻璃纤维滤纸上，80℃烤箱烘烤30分钟，然后将其放入闪烁瓶内，于液体闪烁计数仪上测定各孔样本的每分钟计数率(cpm)。再通过查标准曲线，确定IL-2活性单位(参比山东医学科学院产IL-2单位)。实验的批内误差?%。

　　4.淋巴细胞转化试验：取腹腔液中分得的未贴壁的淋巴细胞，调整至2×10⁶个/ml的浓度，于含10 μg/ml ConA及10%小牛血清的RPMI 1640培养基中培养72小时，离心得沉积细胞，涂片经姬姆萨-瑞氏染色，油镜下观察淋巴细胞转化率。镜下观察，转化的淋巴细胞体积增大，直径约12～20 μm，形态不整齐，常有小突起，核变大，染色质疏松，明显出现核仁，胞浆变宽。核与胞体比例变小，胞浆呈明显强嗜碱性，常出现胞浆空泡。根据淋巴细胞的形态观察，计算淋巴细胞转化率，公式如下：淋巴细胞转化率=［转化的淋巴细胞数/(转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细胞数)］×100%。

　　三、统计学方法

　　采用完全随机设计的t、t′检验及直线相关分析法。

结果

　　一、IL-2活性的测定结果

　　异位症组腹腔液及腹腔液中淋巴细胞培养上清液的IL-2活性，明显高于对照组，二者比较，差异有显著性，见附表。

附表 腹腔液及腹腔液中淋巴细胞培养上清液

　　iL-2活性比较(kU/L， ±s)

　　二、淋巴细胞转化试验结果

　　异位症组腹腔液中淋巴细胞转化率为72.47%±4.07%，而对照组为64.00%±5.23%，二者比较，差异有极显著性(P?.001)。

　　此外，异位症组淋巴细胞转化率与淋巴细胞培养上清液中IL-2活性之间，呈明显的直线正相关(r=0.744 2, P?.001)。

讨论

　　一、异位症并不孕患者IL-2的产生及其免疫学作用

　　IL-2是由活化的辅助性T细胞产生的细胞因子。IL-2的生物学活性极为重要，是保障机体执行正常免疫功能的必要因子。许多研究表明，子宫内膜异位症属于自身免疫性疾病^［4］，异位在腹腔内的子宫内膜蛋白质可诱发机体产生体液和细胞免疫应答，致使具有重要免疫功能的淋巴细胞活性增强。

　　Hill等^［５］的研究表明，异位症不孕者腹腔液内淋巴细胞活性增高，IL-2产生增多。本研究结果显示，异位症并不孕患者腹腔液及腹腔液中淋巴细胞培养上清液中IL-2活性明显高于对照组，其腹腔液淋巴细胞转化率明显增加，并且IL-2与淋巴细胞转化率之间具有明显的直线正相关，这证实异位症不孕患者的T淋巴细胞处于激活状态，活性明显高于正常生育者。

　　二、IL-2与异位症患者不孕的关系

　　很多学者通过试验证实，IL-2有对抗妊娠的作用^［6，7］，将IL-2给予小鼠，发现其对植入前的胚泡有毒性作用，能抑制妊娠，给合窝交配后受精的雌鼠注射IL-2和注射盐水对比，发现注射IL-2组生育力明显下降，分娩小鼠数显著低于对照组^［8］。

　　另外，IL-2尚可诱导或促进多种细胞毒细胞的活性，增强T、B细胞的功能，这些效应都可通过吞噬精子和卵子，产生抗子宫内膜抗体，增强机体的体液免疫和细胞免疫应答等生殖免疫作用而干扰受孕^［9，10］。本研究结果显示，异位症组淋巴细胞活性增强，IL-2产生增多。这一结果可以解释为什么轻微异位症患者、盆腔无明显的解剖学改变即可发生不孕。

　　三、淋巴细胞转化活性的改变及其意义

　　T淋巴细胞是机体产生特异性细胞免疫应答的重要细胞。在体外利用刀豆素A刺激淋巴细胞，根据其转化为淋巴母细胞的程度，可判定体内T淋巴细胞的应答功能和机体的细胞免疫机能。本研究中，异位症组淋巴细胞转化率明显增强，这表明机体T细胞免疫活性增强，体内产生了较强的免疫应答，参与分泌过多的IL-2等一系列免疫反应。

　　本研究结果表明，异位症不孕与IL-2产生增多有一定的关系。有许多不孕患者虽已患有异位症，但在腹腔镜检查时并未发现肉眼所见的明显异常，对于这类原因不明的不孕患者，通过测定其IL-2的含量将有助于对疾病的诊断。

参考文献

　　1 Ronnbery l. Endometriosis and infertility. Ann Med, 1990, 22(2):91-96.

　　2 The American Fertility Society. Revised American Fertility society classification of endometriosis. Fertil Steril, 1985, 43:351-352.

　　3 杨贵贞主编.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科学技术出版社，1991.44-50.

　　4 Dcruz OJ, Wild RA. Evaluation of endometrial tissue specific complement activation in women with endometriosis. Fertil Steril, 1992, 57:787-795.

　　5 Hill JA, Ahclerson DJ. Lymphocyte activity in the presence of peritoneal fluid from fertile women and infertile women with and without endometriosis. am J Obstet Gynecol,1989, 161:861-864.

　　6 Chaouat G, Menu E, Clark DA, et al. Control of fetal survival in CBA*DBA/2 mice by lymphokine therapy. J Reprod Fertil, 1990, 89:447-458.

　　7 Lala PK, Scodras JM, Graham CH, et al. Activation of maternal killer cells in the pregnantuterus with chronic indomethacin therapy, IL-2 therapy, or a combination therapy is associated with embryonic demise. Cell Immunol, 1990, 127:368-381.

　　8 Tezabwala BU, Johson PM, Rees PC. Inhibition of pregnancy ability in mice following IL-2 administration. Immunology, 1989, 67:115-119.

　　9 Weed JC, Arquembourg PC. Endometriosis: can it produce an autoimmune response resulting in infertility? Clin Obstet Gynecol, 1980, 23:885-893.

　　10 Tartakovsky B, Goldstein O, Brosh N. Colony-stimulating factor-1 blocks early pregnancy in mice. Biol Reprod, 1991, 44:906-912.

(收稿：1997-08-15 修回：1997-10-05)

　　(本文编辑：姜民慧)