HBV DNA在肝癌细胞中的整合模式

世界华人消化杂志 1999年第7期第7卷 研究快报

作者：张利宁　孙汶生　曹英林　马春红　宋　静

单位：山东医科大学微生物与免疫学教研室　山东省济南市　250012

关键词：乙型肝炎病毒；肝肿瘤；DNA，病毒；整合模式

　　中国图书馆分类号　R735.7

　　Subject headings　liver neoplasms; hepatitis B virus; DNA, viral; integration model

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　66例HCC标本来自山东省省立医院、山东医科大学附属医院及济南市千佛山医院，手术后经病理证实均为原发性肝细胞癌. 标本置-20℃冰冻保存，用于抽提DNA.

　　1.2　方法　探针的制备按地高辛甙元标记试剂盒(Boehringer Manhein公司，德国)要求，用随机引物法制备地高辛标记的HBV全基因探针和HBVx, s, pre-s,c四个基因片段探针，探针感度高于1pg^［1，2］. Southern杂交从组织中抽提的细胞DNA用限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ，HindⅢ消化，在0.7%琼脂糖凝胶上电泳，然后用Southern印迹的方法将DNA转移到硝酸纤维素膜上，用HBV全基因探针进行杂交^［3］. 纯整合型HCC中HBV四个基因片段的检测为将32例纯整合型的细胞DNA分别点在硝酸纤维素膜上，按常规分别以HBVx, s, pre-s和c基因片段探针进行斑点杂交.

　　2　结果

　　2.1　HBV在HCC中的存在状态　66例HCC标本中HBV的检出率为76%(50/66)，其中64%(32/50)仅有HBV DNA整合(为纯整合型)，36%(18/50)既有整合的HBV DNA又伴有游离的HBV DNA(即混合型)，无单纯游离型.

　　2.2　纯整合型HCC中HBV四个基因　杂交结果显示HBVx, s, pre-s, c基因的整合率分别为87%(28/32)，62%(20/32)，62%(20/32)和25%(8/32)，其中HBV X基因的整合率明显高于s基因(P＜0.05)、pre-s基因(P＜0.05)和c基因(P＜0.01).

　　3　讨论

　　近几年来的研究发现HBV在染色体上的整合是随机的. 整合于染色体上的HBV DNA是不完整的，病毒基因组多有一定程度的缺失^［4］. Hino et al^［5］发现整合于染色体上的HBV DNA片段的一端多位于病毒直接重复序列DR1和DR2附近，另一端则视整合片段的大小不同而位于HBV DNA的不同位置. 进而提出HBV整合的四种可能模式，即以DR1为始点，顺时针和逆时针方向的Ⅰ，Ⅱ模式和以DR2为始点，顺、逆时针方向整合的Ⅲ，Ⅳ模式. 我们发现HBV x基因整合率最高，HBV s基因片段整合率次之，HBV c基因的整合率最低，该结果提示山东地区原发性肝细胞癌中HBV DNA的整合是DR1为始点逆时针方向整合的Ⅱ型模式为主.

　　通讯作者　张利宁

　　4　参考文献

　　1　曹岩娜，孙汶生，宋静. 地高辛甙元标记HBV-DNA探针的制备. 山东医科大学学报，1993；31：279

　　2　孙汶生，高丰光，曹英林. HBV DNA及HBx DNA亚片段在肝癌细胞内的整合及作用. 中华传染　病学杂志，1997；15：68

　　3　孙汶生，张利宁，曹英林. HBV DNA基因型与肝细胞肝癌的预测性相关研究. 山东医科大学学报，1995；33：181

　　4　Sommer G, Sterneck M, Otto S, Will H. A new class of defective hepatitis B virus genomes with an internal poly(dA)sequence. Virology, 1997;239:402-412

　　5　Hino O, Ohtake K, Rogler CE. Feature of two hepatitis B virus(HBV) DNA integrations suggest mechanisms of HBV integration. J Virol, 1989;63:2638

收稿日期　1999-02-05　收回日期　1999-04-03