多药耐药相关蛋白及P-糖蛋白在胃癌组织中表达的意义

　　中国医科大学学报2000年第29卷第1期

陈波　赵岩　金锋　赵凤凯　王梅先　王舒宝

　　摘　要　目的：分析多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein, MRP)、P-糖蛋白(P-gp)在胃癌组织中表达，研究其与胃癌生物学行为及预后的关系。方法：采用免疫组化法检测53例胃癌组织MRP、P-gp表达的情况，分析其与相关临床资料的关系。结果：MRP、P-gp表达与临床分期、浸润深度、组织学类型无关。MRP表达与淋巴结转移显著相关(P＜0.01)。MRP、P-gp表达与5年生存率无关。结论：MRP在胃癌组织中的单一表达能一定程度上反映胃癌的生物学行为。MRP、P-gp均不能较好的反映胃癌的预后。

　　关键词：胃肿瘤　P-糖蛋白　多药耐药性　多药耐药相关蛋白

　　多药耐药(multidrug resistance, MDR)是导致胃癌化疗失败的一个重要因素。研究表明MDR是由MDR1基因编码的分子量为170 kd的细胞膜蛋白(P-glycoprotein, P-gp)引起，它作为能量依赖的药物泵，将化疗药物主动泵出细胞外，从而导致细胞耐药性^［1］。最近发现多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein, MRP)与非P-gp介导的MDR有关^［2］，作者对53例胃癌组织进行MRP、P-gp共同表达进行观察，并结合随访资料进行相关研究。

　　1　材料与方法

　　1.1　对象　1980年7月～1990年7月中国医科大学第一临床学院肿瘤科胃癌手术标本53例：男38例，女15例，年龄35～70岁。患者术前均未用化疗及放疗。术后常规化疗标本用福尔马林固定，石蜡包埋，选5例正常粘膜分别做MRP、P-gp对照。

　　1.2　试剂与方法　鼠源性MRP、P-gp，均购自福州迈新生物技术公司。免疫组化采用SP法。主要步骤：石蜡切片脱蜡和水化后，加1滴过氧化酶阻断液，室温下孵育10 min，并用微波抗原修复；加非免疫性动物血清，置室温下孵育10 min，封闭非特异性抗原反应；加一抗MRP、P-gp，4℃冰箱内过夜；加入二抗，室温下10 min；加链霉素-过氧化酶溶液，室温下10 min；DAB显色，苏木素复染封片。

　　阳性结果标准：以细胞膜上和(或)胞浆内出现棕黄染色为阳性细胞，整张切片中阳性细胞数占5%～10%即为阳性^［3］。

　　统计学处理：采用χ²检验。

　　2　结果

　　53例胃癌组织中，MRP阳性表达24例，P-gp19例，阳性率为44.4%(24/53)及35.2%(19/53)。10例正常胃粘膜内均未见阳性染色。P-gp、MRP在细胞膜及细胞浆内均有明显表达。其表达结果经χ²检验与肿瘤分期、组织学类型、浸润深度等临床因素均无关(P＞0.05)。MRP在有淋巴结转移病例中的阳性表达率为53.33%(24/45)，显著高于无淋巴结转移的阳性表达率(P＜0.01)，P-gp的阳性表达虽经统计学检验与淋巴结转移无关，但阳性表达率40.00%(18/45)比无淋巴结转移率12.5%(1/8)高(表1)。对其中47例胃癌均随访5年以上，其中MRP阳性表达病例的5年生存率为13.64%(3/22)，P-gp阳性表达病例的5年生存率为10.53%(2/19)，均低于二者阴性表达病例5年生存率的45%(11/25)及28.56%(8/28)，但差别均无显著性(P＞0.05)。

表1　MRP和P-gp在胃癌组织中的表达Tabel 1　Expression of MRP and Pgp in the tissue

　　of gastric carcinoma

　　3　讨论　　P-gp是由MDR 1基因编码的分子量为170 kd的细胞膜蛋白，它作为能量依赖的药物泵，将化疗药物主动泵出细胞外，而MRP是由Cole等^［2］在研究非MDR小细胞癌细胞株时发现的，其分子量为190 kd^［4］。通过二者在胃癌组织中表达的研究，我们发现，二者表达与浸润深度，组织学类型、临床分期等因素无关。MRP在淋巴结转移中阳性表达率显著高于淋巴结无转移的阳性表达率，P-gp的阳性表达经统计学检验与淋巴结转移阴性无关，但其在有淋巴结转移的阳性表达率40.00%(18/45)要比无淋巴结转移的阳性表达率12.5%(1/8)高。说明MRP及P-gp能够在一定程度上反映的肿瘤浸润转移的生物学特性。由此说明，多药耐药机制是一个相对独立的机制，它可能在组织发生癌变的同时便被启动，产生作用。所以与胃癌生物学行为关系不够密切。

　　本文结果亦表明，二者表达阳性的5年生存率均与表达阴性的5年生存率无显著差别(P＞0.05)。陈金联等^［5］报道MRP与胃癌预后有一定的关系。这可能与本研究选择病例数较小有关，也可能某些病例在术前未产生多药耐药性，而在术后化疗中获得多药耐药性，从而影响胃癌术后的5年生存率。

　　总之，MDR机制复杂多样，胃癌组织中存在多种耐药机制，共同作用产生耐药性。单一机制的表达能反应一定的胃癌浸润转移的生物学特性，但不能较好的反映胃癌的预后。所以在临床检测中，应联合应用MRP、P-gp等不同机制的抗体。

　　参考文献

　　1　Gottesman MM, Panstan I. biochemistry of multidrug resistance mediated by the multidrug transporter. Annu rev Biochem, 1993；62:385_427

　　2　 Cole SPC, Bhardwaj G, Gerlach JH, et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line. Science,1992,258:1650_1654

　　3　Sinocrope FA, Hart J, Brasitus TA, et al. Relationship of p-glycoprotein and carcinoembryonic antigen expression in human colon carcinoma to local invasion, dNA ploid and diseasere lapse. Cancer, 1994,74:2908_2917

　　4　 Hipfner DR, Gauldie SD, Deely RG, et al. Detection of the Mr 190,000 multigrug resistance protein, MRP, with monoclonal antibodies. Cancer Res,1994,54:5788_5792

　　5　 陈金联，吴云林，周同，等.多药耐药相关蛋白在胃癌表达中的意义.上海第二医科大学学报，1997，4：247～249