胃癌nm23和P53蛋白表达及癌浸润转移的关系

世界华人消化杂志 1999年第1期第0卷 专家评述

作者：王仰坤　马乃绪　娄海玲　李　涌　王　丽　潘　红　张志波

单位：解放军91医院病理科　山东省兖州市　272000

关键词：胃肿瘤；nm23基因；p53基因；基因表达；肿瘤转移

　　中国图书资料分类号　R735.2

　　摘　要

　　目的　探讨胃癌淋巴结增生转移与P53,nm23蛋白表达的关系.

　　方法　应用S-P免疫组织化学方法，检测87例伴有淋巴结反应性增生和(或)癌转移的胃癌进行P53，nm23蛋白表达.

　　结果　P53蛋白阳性表达52.9%，淋巴结反应性增生比淋巴结伴有癌转移者阳性表达率低，差异有显著性(P＜0.01). nm23蛋白阳性表达77%，淋巴结反应性增生者比淋巴结伴有癌转移者阳性表达率高，差异有显著性(P＜0.01).

　　结论　P53和nm23蛋白阳性表达均与胃癌的淋巴结增生有关，多有相反的阳性表达，呈显著的负相关关系.

Relationship between P53, nm23

　　hyperplasia in gastric cancer

WANG Yang-Kun, MA Nai-Xu, LOU Hai-Ling, LI yong, WANG Li, PAN Hong and ZHANG Zhi-Bo

　　department of Pathology, Chinese PLA 91 Hospital, Yanzhou 272000, Shandong province, China

　　Subject headings　stomach neoplasms; nm23 gene; p53 gene; gene expression; neoplasm metastasis

　　Abstract

　　cONCLUSION　Lymphatic hyperplasia in gastric cancer is negactively correlated to P53 and nm23 expression.

　　0　引言

　　肿瘤的转移是恶性肿瘤的重要生物学行为，常是导致患者死亡的重要原因.肿瘤抑制基因p53的突变是人们研究较深入的基因，突变型p53促进细胞的转化^［1,2］. nm23基因的缺失、扩增和突变，与肿瘤的转移有关^［3］.但目前对这两种基因研究的结论尚不一致. 我们对87例胃癌采用免疫组织化学方法，观察胃癌淋巴结反应性增生和癌转移与p53,nm23基因表达的关系.

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　收集胃腺癌根治术标本87例及局部肿大淋巴结469枚(包括淋巴结反应性增生211枚和淋巴结癌转移258枚)，其中T1期4例，T2期15例，T3期23例和T4期45例.组织学类型：乳头状腺癌8例，管状腺癌17例，低分化腺癌35例，粘液腺癌22例和印戒细胞癌5例.标本经福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚度切片，常规HE染色.本组有淋巴结反应性增生者32例(指每例有多枚淋巴结，无1枚淋巴结伴有癌转移的病例)，有淋巴结癌转移者65例(指每例有多枚淋巴结，有1枚或1枚以上的淋巴结伴有癌转移的病例).本组年龄31岁～68岁，平均56.3岁. 男55例，女32例.

　　1.2　方法　①观察淋巴结反应性增生变化，并将淋巴结反应性增生分为早、中、晚3期.早期：淋巴组织弥漫增生，髓索加宽交错，少数病例仅在边缘窦有较少和(或)较小的淋巴滤泡，增生的淋巴索间免疫母细胞和核分裂易见.中期：主要是淋巴滤泡相对增生，但滤泡的体积较小，生发中心亦多不活跃. 淋巴结滤泡占切片面积的2/5至3/5，被膜窦多闭合.晚期：淋巴窦扩张明显，淋巴滤泡几乎不见.淋巴窦内大量巨噬细胞，有的聚集成群，与转移性癌细胞不易鉴别.②观察淋巴结转移癌的变化，并将淋巴结转移癌分为四期^［4］.Ⅰ期：淋巴结的结构未受破坏，边缘淋巴窦或其他区域有单个或数个癌细胞侵犯，呈现散在或3～5个细胞形成的癌灶；Ⅱ期：转移的癌细胞在整个淋巴结的切片面积占1/3以下，多有完整的淋巴滤泡，扩张的淋巴窦内充满癌细胞，淋巴结被膜完整；Ⅲ期：转移的癌细胞在整个淋巴结的切片面积占2/3以上，淋巴结被膜完整；Ⅳ期：淋巴结及其被膜均被转移的癌组织侵犯，或侵及周围的纤维脂肪组织、肌纤维、腺体等，仅残存较少的淋巴组织.

　　采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P)，抗P53单克隆抗体(DO-7，与野生型和突变型P53蛋白均起反应)、抗nm23单克隆抗体和Spkit为美国Maxin biotech公司产品，即用型，购自福州迈新公司. DAB显色，苏木素衬染.用PBS代替第一抗体，作阴性对照，以已知的阳性标本切片作阳性对照，背景不着色为判断标准.各组间的比较采用χ²检验.

　　2　结果

　　2.1　P53,nm23蛋白表达与肿瘤浸润深度　P53蛋白为胞核着色(图1)，乳头状腺癌和管状腺癌的阳性表达率略低于低分化腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌，但差异无显著性(P＞0.05).癌肿的浸润深度与阳性表达有明显关系，是随着肿瘤浸润深度的增加而阳性表达率增加，T1期、T2期与T4期比较差异有显著性(P＜0.01). nm23为胞浆着色(图2)，乳头状腺癌和管状腺癌的阳性表达率高于低分化腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌，但差异无显著性(P＞0.05).癌肿的浸润深度与阳性表达率有关，是随着肿瘤浸润深度的增加而阳性表达率降低，T1期、T2期与T4期比较差异有显著性(P＜0.01，表1).

表1　各型胃癌的P53,nm23表达与淋巴结增生的关系

图1　低分化腺癌P53蛋白胞核阳性表达　S-P法　×200

　　图2　高分化腺癌nm23蛋白胞浆阳性表达　S-P法　×200

　　2.2　P53,nm23表达与淋巴结反应性增生　各型胃癌中P53阳性表达增强的病例，局部淋巴结反应性增生较少，仅见一些晚期的反应性增生淋巴结；而P53不表达的病例，局部淋巴结反应性增生较多，可见大量早期的反应性增生淋巴结.本组淋巴结反应性增生32例中，P53阳性表达9例，阴性23例.相反，各型胃癌nm23阳性表达增强的病例，局部淋巴结反应性增生较多，可见大量早期的反应性增生淋巴结；而nm23不表达的病例，局部淋巴结反应性增生者较少，仅见一些晚期的反应性增生淋巴结.本组淋巴结反应性增生的32例中，nm23阳性表达26例(表2).

表2　P53，nm23表达与胃癌浸润深度及其淋巴结增生的关系

　　2.3　P53,nm23表达与淋巴结癌转移　P53阳性表达是随淋巴结癌转移的数量增多、程度增加(尤其是Ⅳ期的淋巴结癌转移)而增加，本组淋巴结伴有癌转移的65例胃癌中，有37例呈不同程度的阳性表达；nm23阳性表达是随淋巴结癌转移的数量增多、程度增加(尤其是Ⅳ期的淋巴结癌转移)而减少，淋巴结伴有癌转移的65例胃癌中，有41例呈不同程度的阳性表达(表3).

表3　P53，nm23表达在淋巴结反应性增生与淋巴结癌转移之间的比较

　　2.4　淋巴结反应性增生与淋巴结癌转移的比较　P53在淋巴结反应性增生中多是低表达，淋巴结有癌转移者多是高表达，差异有显著性(P＜0.01). nm23在淋巴结反应性增生中多是高表达，淋巴结有癌转移者多是低表达，差异有显著性(P＜0.01).胃癌淋巴结增生性病变P53和nm23基因蛋白表达呈负相关.3　讨论

　　p53基因点突变主要位于第5～8号外显子内.野生型P53蛋白的T_1/2为6min～20min，而突变型P53蛋白由构象等改变，其T_1/2可延长20倍左右.因此，一般认为用免疫组化法检测的P53蛋白均为突变型蛋白^［5］. p53基因突变是多种恶性肿瘤发生和发展的原因之一.本研究表明，P53蛋白表达与淋巴结反应性增生的分期和淋巴结伴有癌转移的分期有密切关系.淋巴结反应性增生组与淋巴结伴有癌转移组比较，差异有显著性(P＜0.01)，说明p53基因突变不仅与胃癌的发生有关，而且在淋巴结癌转移的发生中起着重要的作用.因此，早期预测淋巴结癌转移的趋势，了解淋巴结反应性增生和淋巴结癌转移及其分期，对制定合理治疗方案，将有利于患者预后的改善.

　　nm23定位于人体17号染色体长臂(17q22)，编码产物为由152个氨基酸组成的Mr17000蛋白质，与核苷二磷酸激酶(NDPK)高度同源^［6］. nm23表达与肿瘤进展和预后的关系，文献报道尚不一致，多数文献报道与患者的生存时间呈正相关^［3］.本研究应用nm23单克隆检测87例胃癌，发现淋巴结反应性增生数量多，或者有较多早期淋巴结反应性增生者nm23阳性表达率增多，反之减少；淋巴结伴有癌转移的数量多，或者有较多Ⅳ期的淋巴结癌转移者，nm23阳性表达减少，反之增加.本组研究结果表明，nm23表达与淋巴结反应性增生的数量和分期呈正比；与淋巴结伴有癌转移的数量和程度呈反比.这可能nm23基因在细胞恶性转化后抑制了肿瘤的转移作用，这种nm23产物去抑制肿瘤转移与胃癌淋巴组织增生的密切关系有待深入研究.

　　P53，nm23蛋白与肿瘤的浸润深度，淋巴结反应性增生和淋巴结癌转移的分期多有相反的阳性表达，呈显著的负相关. p53在胃癌的T1期、T2期与T4期比较，差异有显著性(P＜0.01)；而nm23在胃癌的T1期、T2期与T4期比较，差异有显著性(P＜0.01).淋巴结反应性增生32例，P53阳性表达28.1%(9/32)，nm23阳性表达81.3%(26/32)；淋巴结有癌转移65例，P53阳性表达56.9%(37/65)，nm23阳性表达63.1%(41/65). p53突变多发生在细胞的癌变过程中，nm23失活多发生在细胞的转移过程中.本组早期胃癌和淋巴结反应性增生阶段，P53低表达而nm23高表达；而晚期胃癌和淋巴结伴有癌转移阶段，P53为高表达而nm23低表达.提示p53基因突变对nm23基因失活有一定影响作用，联合检测对胃癌的进展、转移、了解机体的免疫状态，以及预后更有其重要意义.

　　作者简介：王仰坤，男，1954-10-25生，河南省项城市人，汉族.1977年武汉军区军医学校毕业，副主任医师，主要从事胃肠病理研究，发表论文68篇，获军队科技进步奖13项.

　　通讯作者　王仰坤，272000，山东省兖州市解放军91医院病理科.

　　Correspondence to:WANG Yang-Kun, Department of Pathology, chinese PLA 91 Hospital, Yanzhou 272000, Shandong Province, China

　　tel. +86·537·3413106 Ext. 3466

　　4　参考文献

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　　［4］ 王仰坤，马乃绪，王学玲，孙苗根.淋巴结转移癌分期的病理学研究. 肿瘤研究与临床，1996；8 (2)：76-78

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收稿日期　1998-06-29