非小细胞肺癌化学治疗与血清sAPO-1/Fas、NO的变化

　　中华肿瘤杂志2000年第22卷第3期

周建英　朱旗　姚杭平　陈水芳

　　摘　要　目的　观察化疗药物替尼泊甙(VM-26)、表阿霉素(EPI)、顺铂(DDP)治疗非小细胞肺癌的疗效、毒性及治疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化。方法　42例诊断明确的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者(鳞癌28例，腺癌12例，未分化癌2例)采用VM-26、EPI、DDP联合化疗2个周期。化疗前后分别用双抗体夹心ELISA方法测定血清sAPO-1/Fas含量和用酶还原法测定血清NO含量。结果　化疗的总有效率(完全缓解+部分缓解)为47.6%(20/42)，稳定15例，进展7例。有效组和鳞癌组治疗后血清sAPO-1/Fas水平较治疗前明显下降(P＜0.05)。鳞癌组、有效组和腺癌组血清NO水平较治疗前明显升高(P＜0.05)。结论　VM-26、EPI、DDP联合化疗对晚期NSCLC有较好的疗效。血清sAPO-1/Fas、NO水平可能反映细胞凋亡水平，可作为对化疗药物的敏感指标。

　　主题词：肺肿瘤/药物疗法；癌，非小细胞肺/药物疗法；替尼泊甙；表阿霉素；顺铂；　一氧化氮

　　细胞凋亡是真核细胞最广泛的死亡方式，与肿瘤消退有关。近来研究表明，Fas及FasL是介导细胞凋亡的一对膜蛋白，当FasL与Fas结合时，可在数小时内诱发Fas表达细胞凋亡，细胞体积缩小，核固缩^［1］。NO是存在于体内有多种生物学活性的无机分子，它可以通过影响细胞物质代谢和能量代谢而造成细胞死亡^［2］。其作为一种新发现的抗肿瘤分子，已越来越受到重视。当前，晚期NSCLC治疗较为棘手，化疗疗效尚不能令人满意，除内源性耐药外，也取决于抗癌药诱导细胞凋亡的能力^［3］。因此，能否诱导肿瘤细胞凋亡，已成为新的化疗目标及筛选抗癌药物的标准。

　　1998年1月～1999年1月，我科应用替尼泊甙(VM-26)+表阿霉素(EPI)+顺铂(DDP)治疗NSCLC42例，在治疗前后观察血清sAPO-1/Fas与NO含量变化，为临床应用该方案提供理论依据。

　　材料与方法

　　一、研究对象

　　选用经组织学或细胞学检查确诊的NSCLC 42例。男性33例，女性9例。年龄32～74岁，平均62岁。其中鳞癌28例，腺癌12例，大细胞未分化癌2例。TNM分期采用国际抗癌联盟推出的1997肺癌国际分期修正系统的标准：ⅢA期26例，ⅢB期12例，Ⅳ期4例。

表3　不同病理类型组化疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化

表4　不同疗效组化疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化

　　二、化学治疗

　　1.化疗方法：化疗前常规行血象、肝、肾功能及心电图检查均在正常范围。采用VM-26+EPI+DDP方案。VM-26每日90 mg/m²，静脉滴入，第1，2，3天；EPI按40 mg/m²，静脉冲入，第1天；DDP每日20 mg/m²，静脉滴入，第1，2，3天。配合水化并常规给予5-羟色胺受体拮抗剂(康泉)止吐治疗。

　　2.疗效评定：按WHO实体瘤客观疗效评定标准分为：完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)。有效率为CR+PR。毒副反应按WHO制定的标准分为0～Ⅳ度。

　　三、血清sAPO-1/Fas、NO水平检测

　　1.标本采集：在化疗前及2个周期化疗结束后，分别抽晨起空腹肘静脉血3 ml，分离血清后置-80℃冻存。

　　2.测定方法：本实验sAPO-1/Fas检测采用双抗体夹心ELISA法，试剂灵敏度为100 pg/ml。NO检测采用硝酸还原酶特异地将NO^-₃还原为NO^-₂，NO^-₂与显色剂作用生成有色物质，通过显色深浅测定其浓度的高低，吸光度(A，曾称光密度OD)值大小代表NO水平。试剂盒购自美国Genzyme公司，操作均严格按说明书进行。

　　四、统计方法

　　采用均值±标准差表示，所得结果采用t检验。

表1　42例NSCLC临床疗效

　　结果

　　1.临床疗效：本组患者治疗后临床症状得到缓解，近期总有效率达47.6%(表1)。随访至1999年2月底，中位生存期420天，平均生存期406.43天，X±s为406.43±9.38,95%可信区间388.05～424.81。

　　2.毒副反应：本组病例白细胞总数均有不同程度下降，在用药后第10～15天降至最低值。3例转氨酶轻度升高，2例一过性肌酐升高，治疗结束1周后均恢复正常。无一例出现心脏毒性(表2)。

表2　化疗方案毒副反应

　　注：(　)内为%　　3.各组血清sAPO-1/Fas、NO含量：化疗后鳞癌组血清 sAPO-1/Fas水平较治疗前明显降低 (P＜0.05)，鳞癌组和腺癌组血清NO水平较治疗前明显升高(P＜0.05，表3)。化疗前后近期有效组(CR+PR)血清sAPO-1/Fas、NO水平的改变有显著意义(P＜0.05，表4)。

　　讨论

　　APO-1/Fas相对分子质量为44600，系跨膜糖蛋白，属神经生长因子与肿瘤坏死因子受体超家属成员，是一个细胞凋亡信号受体，可以诱导APO-1/Fas蛋白所在细胞凋亡^［1］。正常肺泡细胞上皮及肺癌细胞中均有Fas的表达^［4］。APO-1/Fas在膜外时以可溶性形式出现(sAPO-1)，患恶性肿瘤时sAPO-1含量上升。sAPO-1可以通过和细胞Fas分子竞争结合FasL而阻断Fas介导的细胞凋亡。因此，血清sAPO-1/Fas的增高，可能为肿瘤细胞逃避Fas介导的细胞凋亡，引起肿瘤细胞无限生长所致。NO是内皮源性舒张因子的主要活性成分，具有免疫防护作用，能够杀伤病原微生物及阻止细胞癌变。Hibbs等^［5］首先发现，活化巨噬细胞产生的NO具有抑制细胞生长和细胞毒性作用，能抑制与巨噬细胞共同培养的肿瘤细胞的许多代谢活动，导致瘤细胞内铁大量丧失，细胞死亡。在体内消灭肿瘤细胞是一复杂过程。Dive等^［6］认为，抗癌因子抗癌是由于诱导了敏感肿瘤的凋亡，而调节肿瘤凋亡的基因是癌基因，指出肿瘤化疗的目标是诱导细胞凋亡。

　　目前，大多数抗癌药物都能引起其敏感细胞的凋亡，但不同肿瘤细胞对化疗的反应不同。我们以VM-26、EPI、DDP化疗药物联合治疗晚期NSCLC，CR+PR达47.6%。治疗前后对比，鳞癌组和近期有效组血清sAPO-1/Fas水平明显降低，提示Fas介导的细胞凋亡对这两组患者有重要作用^［7］；而腺癌组患者治疗前后sAPO-1/Fas的改变并不显著，这可能与腺癌细胞中Fas的表达较低^［8］或对该化疗不敏感所致。鳞癌组、腺癌组和近期有效组血清NO水平显著增加，提示化疗后肿瘤细胞凋亡增加，故可作为对化疗药物敏感的指标。另外，鳞癌组治疗前血清sAPO-1/Fas水平高于腺癌组和大细胞未分化癌组(P＜0.05)，可能与肿瘤细胞类型、异型性及细胞本身的增殖、凋亡情况有关^［7］，值得进一步研究。

　　根据我们的实验结果和有关文献报道，我们认为VM-26、EPI、DDP联合化疗耐受性良好，毒副反应小，是治疗晚期NSCLC的一个有效方案。血清sAPO-1/Fas和NO水平的变化可能反映细胞凋亡水平，可以作为化疗的敏感指标。

　　作者单位：周建英（310003杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)

　　朱旗（310003 杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)

　　陈水芳（310003杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)

　　姚杭平（浙江大学医学院传染病研究所）

　　参考文献

　　1，Nagata S, golstein P. The Fas death factor. Science, 1995,267:1449-1456.

　　2，Stamler JS. Redox signaling nitrosylation and related target interactions of nitrc oxide. Cell, 1994,78:931-936.

　　3，Mcdonnell TJ, Meyn RE, Robertson LE. Implications of apoptotic cell death regulation in cancer therapy. Semin Cancer Biol, 1995,6:53-60.

　　4，Fine A, Anderson NL, Rothstein TL, et al, Fas expression in pulmonary alveolar type Ⅱcells. Am J Physiol, 1997,273:64-71.

　　5，Hibbs JB, Taintor RR, Vavrin Z. Macrophage cytotoxity: role for Larginine deiminase and iminonitrogen oxidation to nitrite. Science, 1987,235:473-476.

　　6，Dive C, Evans CA, Whetton AD. Induction of apoptosis-new targets for cancer chemotherapy. Semin Cancer Biol, 1992,3:417-420.

　　7，Volm m, Koomagi R. The implications for proliferaton and apoptosis for lung cancer metastasis. Oncol Rep, 1999,6:373-376.

　　8，Nambu Y, Hughes SJ, Rehemtulla A, et al, Lack of cell surface Fas/APO-1 expression in pulmonary adenocarcinomas. J Clin Invest, 1998,101:1102-1110.