耐药基因在肺癌组织与外周血淋巴细胞中的表达

中华结核和呼吸感染 1999年第5期第22卷 论著摘要

作者：郭军　王宝成　尹格平　孙晓明

单位：250031 济南，济南军区总医院肿瘤中心科

　　多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)的超表达是导致肿瘤细胞产生耐药的重要因素。本研究应用流式细胞免疫学技术,对非小细胞肺癌(NSCLC)组织、胸液癌细胞及外周血淋巴细胞(PBL)的MDR1和MRP基因表达蛋白P-gp和MRP含量进行定量研究。

　　对象与方法　我院自1995年9月～1997年12月住院的肺癌患者57例,男32例,女25例。经病理证实,鳞癌16例,腺癌32例,混合癌9例。术前取静脉血2 ml,术中取肿瘤组织。术后复发28例,再取静脉血及活检肿瘤组织及17例伴胸液患者胸液癌细胞。取样时间为术后5个月(化疗2～3次)、8个月(化疗4～5次)和14个月(化疗7～9次)。对照组为健康成人30名PBL和手术切除的正常肺组织12例,阳性对照为本实验室建立的肝癌耐药细胞株BEL-7402/DOX。鼠抗人P-gp单克隆抗体MRK16及羊抗鼠IgG-FIFC均购于法国国际免疫公司。鼠抗人MRP单克隆抗体(MRPr1)由荷兰Zaman教授惠赠。将NSCLC细胞经机械-酶化学法制备成细胞膜完整的单细胞悬液;提取静脉血中PBL;各种样品经PBS漂洗,再将每份悬液分3份,分别加入20 μl MRK16、20 μl MRPr1、羊抗鼠IgG(对照),离心后再加入20 μl羊抗鼠IgG-FIFC,离心漂洗后应用FACScan型流式细胞检测仪检测结果。P-gp及MRP含量以其细胞膜表面阳性细胞百分率表示。取正常对照细胞P-gp及MRP含量95%可信限(均值+2×标准差)。大于此值为阳性;小于或等于此值为阴性。

　　结果　健康成人PBL P-gp含量为(1.2±0.2)%;MRP含量为(1.7±0.4)%;正常肺组织为(1.3±0.3)%及(1.6±0.3)%。对照组P-gp及MRP含量与非肿瘤肺组织差异无显著性。根据上述含量计算出PBL及正常肺组织的P-gp阳性标准值分别为1.6%和1.9%;MRP的阳性标准分别为2.4%和2.1%。术前PBL细胞P-gp及MRP含量与其对应的肿瘤组织细胞比较差异无显著性;不同病理类型的PBL P-gp及MRP含量差异也无显著性。PBL阳性的患者其对应的癌组织P-gp及MRP均为阳性。28例复发患者中,术前癌组织6例(21%)P-gp阳性,16例(57%)MRP阳性。复发患者术前癌组织P-gp及MRP阳性率显著高于未复发者(χ²=3.31及4.42，P＜0.05),而MRP阳性的患者复发率明显高于P-gp阳性的患者(χ²=4.82，P＜0.05)。二者同时阳性患者复发率与MRP阳性患者复发率差异无显著性(χ²=2.64，P＞0.05)。复发患者术前、化疗过程中5个月、8个月和14个月时PBL与癌组织或胸液癌细胞P-gp含量相关系数为0.335,呈显著正相关关系;MRP含量相关系数为0.476,呈非常显著正相关关系。在化疗过程中,无论在癌组织细胞还是在PBL之中,MRP的增高幅度远高于P-gp,MRP在8个月时到达峰值,之后呈平台期,而P-gp含量呈缓慢上升,但幅度较小。

　　讨论　多药耐药的机理除因MDR1基因的扩增外还与MRP基因的扩增有关^［1］。有报道PBL也可超表达P-gp^［2］。本研究亦发现57例NSCLC患者术前癌组织细胞23%可表达P-gp阳性,32%的患者可表达MRP阳性。术前癌组织P-gp及MRP阳性的复发率显著高于术前阴性的患者,而MRP阳性的患者复发率明显高于P-gp阳性的患者。二者同时阳性患者复发率与MRP阳性患者复发率基本相同。复发患者癌细胞和PBL之P-gp及MRP含量随化疗的次数的增多而逐渐上升,以MRP上升更为明显,提示NSCLC细胞较早期的耐药性可能与MRP的超表达关系更为密切。PBL的P-gp及MRP的含量变化与癌组织或胸液癌细胞的含量改变呈正相关,且MRP的相关性更好。说明通过检测PBL的P-gp及MRP的含量能够间接反映NSCLC患者术前或复发后肿瘤细胞对化疗药物的耐受程度,是临床研究非小细胞肺癌化疗耐药性的一个新途经。

　　参考文献

　　1　Cole SP,Bhardwaj G,Gerlach JH,et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line.Science,1992,258:1650-1655.

　　2　Chaudary PM,Mechetner EB,Roninson IB.Expression and activity of the multidrug resistance P-glycoprotein in human peripheral blood lymphocytes.Blood,1992,80:2735-2741.

(收稿：1998-06-08　　修回：1998-10-09)