BAX和TGF β RⅡ基因在肺癌组织中的移码突变

中华结核和呼吸感染 2000年第10期第23卷 论著摘要

作者：陈国安　刘天菊　张伟　李申德　杨德昌　孙燕

单位：陈国安 杨德昌(710004 西安医科大学第二附属医院呼吸科)；刘天菊(美国密歇根大学医学院)；张伟 李申德 孙燕(中国医学科学院肿瘤医院)

　　BAX基因和TGF β RⅡ基因分别有促进细胞凋亡和抑制肿瘤细胞生长的作用，若发生突变或功能降低，将失去抗肿瘤生长作用。近来发现在结肠癌中，其突变热点分别位于基因编码区(G)₈和(A)₁₀，以丢失或插入为主，导致的移码突变与微卫星及错配修复基因改变有关^［1］。肺癌中是否存在这一现象，尚少报道。我们对50例肺癌BAX和TGF β RⅡ基因移码突变及微卫星改变进行了检测，探讨BAX和TGFβRⅡ基因在肺癌组织中的移码突变及其与微卫星改变的关系。

　　材料与方法　收集50例经病理确诊的原发性肺癌及相应远离癌组织的正常肺组织。标本取自中国医学科学院肿瘤医院，术后1～3 h内获得，-70 ℃冰箱保存。鳞癌25例，腺癌19例，腺鳞癌5例，小细胞癌1例。其中男39例，女11例，年龄36～71岁。术前均未做过放疗或化疗。按TNM分期，均为Ⅰ～Ⅲ_A期。

　　BAX和TGF β RⅡ基因移码突变检测：BAX和TGF β RⅡ移码突变位点分别是(G)₈和(A)₁₀，均位于基因编码区，主要观察移码突变情况。BAX上游引物为：5′-ATCCAGGATCGA GCAGGGCC-3′，下游引物：5′-ACTCGCTCAGCTTCTTGGTG-3′，退火温度58 ℃；TGFβRⅡ上游引物为：5′-AAGCTCCCCT ACCATGACT-3′，下游引物：5′-TGCACTCATCAGAGCTACAG-3′，退火温度55 ℃。组织DNA提取、聚合酶链反应(PCR)、8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及银染显色均同微卫星检测^［2］。观察结果标本：BAX和TGF β RⅡ基因在外显子上，8% PAGE后一条带为正常，两条带则为移码突变。

　　结果　肺癌组织BAX基因第三外显子(G)₈移码突变12例(24%)。未发现TGF β RⅡ(A)₁₀有移码突变(图1)。BAX移码突变主要是碱基丢失所致，未发现碱基插入突变。因未测序，不知具体的碱基丢失情况。BAX移码突变与肺癌临床病理关系见表1。低分化、Ⅲ_A期及有淋巴结转移者，BAX移码突变发生率有增高趋势，因例数少，未作统计处理。

　　讨论　目前认为在结肠癌中有数个不稳定突变“热点”，可能是微卫星的靶基因，即BAX中的(G)₈，TGF β RⅡ中的(A)₁₀，TGFⅡR中的(G)₈，错配修复基因hMSH3中的(A)₈和错配修复基因hMSH6中的(C)₈^［3］。其突变热点均位于基因编码区内，重复碱基的插入或丢失将导致移码突变，突变率在不同肿瘤中有很大差别。

图1　肺癌组织中BAX与TGF β RⅡ基因移码

　　突变分析

表1　BAX移码突变与肺癌临床病理关系

　　BAX基因突变与微卫星不稳定(MSI)有关^［5］。从我们的结果推测BAX基因与MSI发生相关，在肺癌发病中可能有一定作用。TGF β RⅡ突变，使TGF β不能起作用，可能是致癌的一种原因。TGF β RⅡ基因在伴有MSI的结肠癌病例中的(A)₁₀移码突变率为70%(23/33)，而在整个结肠癌人群中只有6.7%(30/450)^［6］。本组研究未发现，TGF β RⅡ基因的(A)₁₀在肺癌组织中有突变。TGF β RⅡ基因突变是否发生在其它部位及在肺癌发病中的作用有待进一步研究。基金项目：国家自然科学基金资助项目(39500065)

参考文献

　　1.Brimmell M, Mendiola R, Mangion J, et al. BAX frameshift mutations in cell lines derived from human haemopoietic malignancies are associated with resistance to apoptosis and microsatellite instability. Oncogene, 1998, 16:1803-1812.

　　2.陈国安，孙燕，李申德，等.肺癌组织中微卫星DNA的改变.中华结核和呼吸杂志，1999，22：166-168.

　　3.Imai Y, Tsurutani N, Oda H, et al. Genetic instability and mutation of the TGF-β-receptor-Ⅱ gene in ampullary carcinomas. Int J Cancer, 1998, 76：407-411.

　　4.Grady WM, Myeroff LL, Swinler SE, et al. Mutational inactivation of transforming growth factor β receptor type Ⅱ in microsatellite stable colon cancers. Cancer Res, 1999, 59:320-324.

　　5.Percesepe A, Kristo P, Aaltonen LA, et al. Mismatch repair genes and mononucleotide tracts as mutation targets in colorectal tumors with different degrees of microsatellite instability. Oncogene, 1998, 17:157-163.

　　6.Salomons GS, Buitenhuis CKM, Martinez Munoz C, et al. Mutational analysis of BAX and BCL-2 in childhood acute lymphobastic leukaemia. Int J Cancer, 1998, 76:273-277.

(收稿日期：1999-11-11)