鼻咽癌组织p53蛋白积聚与血清EB病毒抗体ⅠgA/VCA的关系

　　癌症1999年第18卷增刊

　　李群　宗永生　刘克拉　张昌卿

　　摘　要　目的：研究鼻咽癌活检组织中 p53积聚与患者血清 eB病毒抗体Ⅰ gA/VCA滴度水平的相关关系。材料和方法：用免疫组化方法检测取自36例鼻咽癌组织中 p53表达和细胞增生情况；用免疫酶标法检测患者血清Ⅰ gA／ vCA滴度。结果：鼻咽癌活检组织中 p53蛋白表达与患者血清Ⅰ gA/VCA几何平均滴度(geometric mean titre,GMT)和细胞增生核抗原(PCNA)表达程度正相关。10例 p53高积聚(+++)患者的Ⅰ gA/VCAGMT(519.88±2.53)明显高于12例无 p53积聚患者(226±2.84)。 pCNA表达强度与Ⅰ gA/VCAGMT亦呈正相关。结论： p53积聚强度与 pCNA呈正相关提示鼻咽癌组织中积聚的 p53已丧失阻止细胞从 g1期进入 s期的生理功能。而 p53积聚强度与患者血清Ⅰ gA/VCAGMT升高呈正相关提示，鼻咽癌细胞中 eB病毒随癌细胞增生加速而增多可能是患者Ⅰ gA/VCA滴度升高的原因。

　　关键词： p53 鼻咽肿瘤 爱波斯坦－巴尔病毒 血清学

　　抗 eB病毒壳抗原的血清免疫球蛋白(Ⅰ gA/VCA)滴度升高作为诊断鼻咽癌的辅助指标应用于临床已多年。晚期患者Ⅰ gA/VCA几何平均滴度(geometric mean titre,GMT)常高于早期患者^〔1〕。另外，鼻咽癌组织中常见 p53积聚，且发现该现象与细胞增殖指标 pCNA表达呈正相关^〔2〕。 porter等曾观察鼻咽癌患者血清Ⅰ gA/VCA滴度与其癌组织中 p53表达的关系，认为两者无关^〔3〕。本文以鼻咽癌高发区广东省的36例鼻咽癌患者为研究对象，观察了两种现象之间的关系，现报告如下。

　　1材料和方法

　　1.1对象和材料

　　随机收集36例就诊于中山医科大学肿瘤医院的鼻咽癌患者血清和鼻咽活检组织，鼻咽癌组织用10％中性福尔马林固定，石蜡包埋。

　　1.2免疫组化方法

　　采用 lSAB免疫组化方法， dAB显色，甲基绿衬染。鼠抗人单克隆抗体 p53(Do－7； m7001)、 pCNA(pc10； m0879)以及 lSAB试剂盒均购自 dAKO公司。抗 p53抗体工作浓度为1∶100，组织经微波处理修复抗原10分钟。抗 pCNA抗体工作浓度为1∶50，组织不经微波处理。

　　阳性结果判断：肿瘤细胞核中出现棕色颗粒为阳性。根据阳性细胞占肿瘤细胞数的比例进行半定量分级：1).p53：阳性细胞数≤10％为(＋)，11％～70％为(++)，≥71％为(+++)，大于两个(＋)者视为积聚。2).PCNA：阳性细胞≤25％为(＋)，26％～50％为(++)，≥51％为(+++)。

　　1.3免疫酶标法

　　检测患者血清中Ⅰ gA/VCA滴度根据曾毅等报道的方法^〔4〕，以 b95－8细胞为靶细胞，采用 aEC作为显色底物，故抗原抗体复合物呈红棕色。玻片上有大于10％的细胞呈红棕色为阳性。

　　1.4统计学处理： t检验，χ²检验和等级相关分析。

　　2结果

　　2.1　 p53表达与患者血清Ⅰ gA/VCA滴度的关系

　　p53表达率(1＋～3＋)和 p53积聚率(2＋～3＋)分别为944％(34/36)和667％(24/36)。鼻咽癌组织中 p53表达与患者血清Ⅰ gA/VCA滴度呈正相关（ p＜0.05）（表１）

　　p53高积聚(3＋)的患者Ⅰ gA/VCAGMT(519.88±2.53)明显高于无 p53积聚患者(226±2.84)（ p＜0.05）。

　　表1　36例鼻咽癌组织中 p53蛋白表达与患者血清Ⅰ gA/VCA滴度的关系

　　2.2　 p53表达与 pCNA表达的关系

　　鼻咽癌组织中 pCNA表达率100％(36/36)。 p53与 pCNA表达呈正相关（ p〈0.001〉（表2）

　　表2　36例鼻咽癌组织中 p53蛋白与 pCNA表达的关系

　　2.3PCNA表达与患者Ⅰ gA/VCA滴度的关系

　　鼻咽癌组织中 pCNA表达与Ⅰ gA/VCA滴度也呈正相关（ p＜0.05）（表3）

　　表3　鼻咽癌组织中 pCNA表达与患者血清Ⅰ gA/VCA滴度的关系

　　3讨论

　　鼻咽癌组织中 p53积聚是常见现象^〔2〕。大多数鼻咽癌患者血清Ⅰ gA/VCA滴度升高^〔5〕。本文结果再次证实上述结论。两者在鼻咽癌发生发展过程中有无关系是一个令人感兴趣的问题。

　　野生型 p53调节细胞生长的作用主要在于它能控制细胞从 g1晚期进入 s期^〔6〕。鼻咽癌中虽有 p53积聚，但其基因的5－8外显子突变率很低^〔7〕，这种积聚的 p53是否已丧失控制细胞进入 s期的功能?本文结果显示鼻咽癌组织中 p53蛋白表达与 pCNA表达呈正相关，与本研究组以前用抗 p53多抗 cM－1检测249例鼻咽癌组织中 p53蛋白和 pCNA表达的结果一致^〔2〕。 pCNA表达于增殖周期细胞，在细胞周期的 s期合成最多。但不见于 g0期细胞。故是反映细胞增殖的指标。上述研究结果说明鼻咽癌组织中积聚的 p53蛋白已丧失了抑制细胞生长的功能。 p53可通过其下游基因 p21WAF1调控 pCNA的作用。失活的 p53蛋白对一系列 p53下游靶基因的调节作用丧失，最终可导致鼻咽癌细胞中 pCNA升高^〔8，9〕。本文 p53蛋白和 pCNA表达均与患者血清中ⅠgA/VCA滴度呈正相关的结果提示 p53蛋白积聚增多与患者血清Ⅰ gA/VCA升高之间的正相关关系可能与 p53失活后引起肿瘤细胞增殖加快有关。

　　众所周知， eB病毒 dNA片段的复制是与肿瘤细胞 dNA合成同时进行的，因此子细胞与母细胞拥有同等数量的 eB病毒基因拷贝^〔10〕。其机理可能是 eB病毒的延迟促进子(Qp)在细胞增生时被激活，打开了 eBNA－1mRNA的转录程序，而 eBNA－1mRNA则启动了 eB病毒 dNA也就越多。这可为患者血清Ⅰ gA/VCAGMT与其癌组织中 p53和 pCNA的表达强度呈正相关提供理论上的依据。

　　综上所述，鼻咽癌组织中 p53高积聚和血清Ⅰ gA/VCA高滴度这两个指标可能具有临床意义。

　　基金项目：本课题获国家自然科学基金资助(39730200,39470295)李群(现在海南医学院病理学教研室工作)作者单位：宗永生　中山医科大学病理教研室(广州，510089)

　　刘克拉　张昌卿　中山医科大学肿瘤防治中心(广州，510060)

　　参考文献

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　　2.钱洪流，宗永生，张昌卿.鼻咽癌中 p53蛋白积聚的生物学特征和临床意义〔 j〕.临床与实验病理学杂志，1996，12(1)：15～18

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