^99mTc标记单克隆抗体膀胱内灌注诊断膀胱癌

中华外科杂志 1998年第1期第36卷 临床论著

作者：李宁忱　俞莉章　张春丽　布卡　张民　潘中允　顾方六

单位：100034北京医科大学第一医院泌尿外科，北京医科大学泌尿外科研究所（李宁忱、俞莉章、张民、顾方六），核医学科（张春丽、潘中允）；北京医科大学免疫学系（布卡）

关键词：膀胱肿瘤；抗体，单克隆；放射免疫检测

　　可靠方法 采用抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1通过2-巯基乙醇直接还原法标记^99mTc(^99mTc)制备了^99mTc-BDI-

　　1。结果 标记率为69.9％，放化纯度大于95％。33例患者接受了通过膀胱内灌注的放射免疫显像诊断，其中4例非膀胱癌患者均未见显像，29例膀胱癌患者肿瘤显像阳性率为88.5％。

　　原发和复发肿瘤均可获得清晰的显像，显像肿瘤最小为0.5cm，肿瘤细胞分级包括G1~G3。

　　显像结果与膀胱镜检结果完全符合者占65.2％，11例多发肿瘤中有7例（63.6％）显像结果在肿瘤数目、位置及大小上与膀胱镜检有所差异。结论 该方法为膀胱癌的诊断提供了一种的安全有效的手段。

　　【关键词】 膀胱肿瘤 抗体，单克隆 放射免疫检测Radioimmunoimaging of bladder tumor with the intravesical administration of technetium -99m labelled

　　monoclonal antibody Li Ningchen,Yu Lizhang,Zhang Chunli,et al.Institute of Urology,Department of Urolo

　　gy,First Hospital of Beijing Medical University,Beijing 100034.

　　【Abstract】 Objective To make radioimmunoimaging of bladder tumor simple,safe and reliable.

　　methods Anti-human bladder carcinoma cell line BIU-87 monoclonal antibody-BDI-1 was labelled with

　　technetium -99m by direct mercaptoethanol reducing method.Results the labelling rate was 69.6% and the radiochemistry pruity was higher than 95%. 33 patients received radioimmunoimaging of bladder tumor with

　　the intravesical administration of technetium-99m labelled monoclonal antibody.The false positive rate was

　　zero.88.5% of all 29 bladder cancer patients had got positive immunoscintigraphy results, and 65.2% of

　　them were confirmed by cystoscopic results.Both primary and recurrent tumor could be detected clearly

　　and the smallest tumor detected was 0.5cm in diameter.There were some differences between the

　　radioimmunoimaging and cystoscopic results in 7 of 11 multitumor cases,which included tumor size,number

　　and location.Conclusion It is required to use more suitable isotopes and/or monoclonal antibodies to

　　increase its sensitivity.

　　【Key words】 Bladder neoplasms antibodies,monoclonal Radioimmunodetection 膀胱癌的放射免疫显像诊断是一种新的诊断手段，它是将抗人膀胱癌单克隆抗体与放射性核素结合进行导向诊断，近年已有应用¹³¹Ⅰ为标记核素通过静脉或膀胱灌注进行膀胱癌放射免疫诊断的研究报道^{［１，２］}。为了使膀胱癌的放射免疫显像诊断更加简便、安全、可靠，我们采用了一种新的放射性核素^99mTc(^99m tc)与抗膀胱癌单克隆抗体（BDI-1）的免疫偶联物进行膀胱内灌注，并对该方法的敏感性及特异性进行了观察，报告如下。

　　注：本课题受国家教委博士点基金资助 作者单位：100034北京医科大学第一医院泌尿外科，北京医科大学泌尿外科研究所（李宁忱、俞莉章、张民、顾方六），核医学科（张春丽、潘中允）；北京医科大学免疫学系（布卡）

　　 资料和方法

　　１．单克隆抗体的制备及动物实验：单克隆抗体的制备见参考文献［３］，^９９mTc-单克隆抗体偶联物的动物实验见参考文献［４］。

　　２．^99mTc标记抗人膀胱癌单克隆抗体及其鉴定：标记过程见参考文献［５］，标记后的免疫偶联物进行标记率和放化纯度、免疫活性等一系列鉴定。

　　３．标记物安全性检测：为了保证标记抗体的安全使用，参照我国和美国人用单克隆抗体制剂的制备和试验的考虑要点，按照我国药典静脉注射用药的实验项目及方法，对BDI-1及其标记物^99mTc进行热源试验、急性毒性试验、无菌及过敏试验^［６］。

　　４．病例选择：共对33例患者进行了^99mTc-BDI-1免疫偶联物的膀胱内灌注，其中男性29例，女性4例，年龄41～77岁，平均61.7岁。33例患者中膀胱癌患者29例，均经膀胱镜活检证实。其中初发癌19例，复发癌10例，单发癌18例，多发癌11例。另外4例为经膀胱镜证实无膀胱肿瘤的其他患者（前列腺增生2例，肾癌2例）。

　　５．灌注方法及显像：所有患者灌注前均做BDI-1单克隆抗体的皮肤过敏试验（10μg/1

　　00μl），用生理盐水作对照。插入导尿管排空尿液，经导尿管膀胱内灌注50ml免疫偶联物；其中含^99mTc 185MBq，单克隆抗体0.1mg。保留1小时，然后用生理盐水冲洗膀胱三次，每次100ml。冲毕，膀胱内保留100ml生理盐水进行γ照相。γ照相机（Staream-400Ac

　　r）能量360KeV，窗宽20％，中能通用准直器，每帧300Kcts。

　　所有资料存入计算机，先由核医学科医师判断异常放射性浓聚灶，然后泌尿外科医师与核医学医师共同对膀胱镜及组织活检比较判断显像结果。

结果

　　^99m Tc标记率为69.9％，放化纯度＞95％。其免疫活性分数为81％，亲和常数为

　　3.2×10^９/mol。

　　裸鼠模型显像证明此单克隆抗体与^99mTc偶联后，能与肿瘤相关抗原特异性结合，获得良好的显像（图1）。 家兔进行热源试验结果证明经纯化制备的单克隆抗体及其^99mTc标记物无热源反应。^99mTc-BDI-1以人用剂量的200倍及500倍注射小鼠尾静脉，未见任何毒性反应，无菌试验及皮肤过敏试验阴性。

　　 33例患者中，4例非膀胱癌患者经显像后均未见放射性浓聚区，表明^99mTc-BDI-1与正常膀胱粘膜无反应，假阳性率为0。

　　接受灌注的29例膀胱癌患者中，3例因患者不能憋尿或冲洗过程中下腹部皮肤放射性污染显像失败，其余26例顺利显像。其中3例未见肿瘤显像，假阴性率11.5％。肿瘤显像的阳性率为88.5％（图2）。在23例有肿瘤显像的患者中，有15例放射浓聚区与膀胱镜检结果完全符合，占65.2％。另8例患者的显像结果与膀胱镜检大致符合；但在肿瘤的数目、位置及大小上有微小差别，其中7例为多发肿瘤患者。

　　所有接受灌注显像的患者除11例（33.3％）患者出现插尿管后的轻度尿路刺激症状外，未见其它不良反应。灌注后1、2、3天每日检测部分患者血样，每次血中放射性含量不超过给药量的0.5％，证明膀胱内灌注免疫偶联物不易进入血流。

讨论

　　核素标记的肿瘤导向诊断是一种逐步成熟的诊断新技术。膀胱肿瘤由于膀胱的特定解剖结构与位置以及膀胱肿瘤来源的相对单一性，被认为是最适合于膀胱内灌注进行放射免疫显像诊断及导向治疗的实体瘤之一^［７］。近年的有关研究主要以¹³¹Ⅰ为标记核素^{［１，２］}。但¹³¹Ⅰ因释放β射线、能量高、半衰期长（8天）、浓聚于甲状腺、气化而被吸入等原因，容易增加患者及医务工作者放射性损伤的机会，有一定的局限性。而^99mTc则具有标记方法简单，稳定性好，半衰期短（6小时），显像分辨率高且容易获得等特点，是一种适合显像用的理想的放射性核素。正因为如此，我们将^99mTc标记抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1，用于膀胱癌的放射免疫显像诊断。

　　本组结果显示，^99mTc-BDI-1对肿瘤组织具有高度的特异性。33例接受膀胱灌注显像的患者中，4例阴性对照均未见浓聚。膀胱癌患者中，显像率为88.5％，显像的肿瘤最小为

　　0.5cm，肿瘤的细胞分级包括G1，G2及G3。除移行细胞癌外，尚有1例鳞状细胞癌、1例鳞状细胞与移行细胞混合癌及1例膀胱嗜铬细胞癌，说明BDI-1所针对的抗原具有较高的普遍性，是一种理想的导向载体。在本组23例显像的膀胱癌患者的结果中，与膀胱镜检结果完全符合者占65.2％，其余8例在肿瘤的数目、位置或大小上有差异，其中7例为多发膀胱肿瘤。这可能是由于膀胱本身为立体结构，而在灌注后显像时是平面成像，从而造成了结果上的差异。

　　此外，如灌注后膀胱冲洗不够彻底，亦可出现伪影对显像结果产生影响。

　　膀胱内灌注^99mTc-BDI-1的放射免疫显像，为膀胱癌的诊断提供了一种新的安全有效的方法。如何进一步提高此种诊断的准确程度及能否通过^99mTc与化疗药物的结合膀胱内灌注以达到治疗表浅性膀胱肿瘤或预防肿瘤复发的目的有待深入研究。

　　（本文图1，2见插页图第５页）

参考文献

　　１俞莉章，顾方六，韩铁山，等.抗膀胱癌单克隆抗体膀胱内灌注放射免疫显像诊断.中华泌尿外科杂志，1993，14:252-253.

　　２Boeckmann W, Baum RP, Schuldes H, et al. Tumor imaging of bladder carci

　　noma andmetastases with radiolabeled monoclonal anti-CEA antibodies.

　　br J Cancer, 1990, 62(SupplX):81-８３.

　　３马爱红，谢蜀生，俞莉章，等.抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1的制备和鉴定.中华泌尿外科杂志，1990，11：195-１９６.

　　４布卡，俞莉章，张春丽，等.抗人膀胱癌单克隆抗体的^-99mTc标记及荷瘤裸鼠放射免疫显像. 中华外科杂志，1996，34：10-12.

　　５Schwarz A, Steinserabber A. A novel approach to^99mTc-99m labeledmon

　　oclonal antibodies. J.Nucl.Med., 1987,28:721-７２２.

　　６中华人民共和国药典.第二部.北京：化学工业出版社，人民卫生出版社，1990.106-１０７.

　　７Russel P, Kingsley E, Humphrey J, et al. Can monoclonalantibodies be u

　　sed for radioimmunotherapy of superficial bladder cancer. Cancer for

　　um, 1993,17:123-１２５.

　　（收稿：1996-12-11 修回：1997-09-27)

　　（本文编辑：秦学军）