哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡及凋亡相关基因表达的研究

中华结核和呼吸感染 1998年第12期第21卷 论著摘要

作者：郭晓明　赖克方　王长征　郭先健　钱桂生

单位：400037 重庆，第三军医大学新桥医院全军呼吸病研究所(郭晓明，现在北京军区二五一医院干部病房)

　　哮喘患者肺内嗜酸性粒细胞(EOS)浸润是其显著的病理特征。这种EOS增多, 除了与哮喘体内EOS生成增多外,还可能与E0S正常的凋亡受到抑制有关^［1］。我们观察了哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中EOS的凋亡及EOS凋亡相关基因B细胞淋巴瘤(BCL-2) 、白细胞介素1β转化酶(ICE)的表达。

　　材料与方法　20只健康雄性豚鼠随机分为哮喘组和对照组(每组各10只),哮喘组采用卵白蛋白致敏和激发建立豚鼠哮喘模型。对照组应用生理盐水代替卵蛋白处理。 激发后24小时行支气管肺泡灌洗。用Percoll细胞分离液的梯度密度离心法分离BALF中的EOS。分离的EOS经涂片Wright染色证明EOS纯度为98%以上。将EOS涂于预先用多聚赖氨酸粘附剂处理的玻片，4%多聚甲醛固定后，用于原位细胞凋亡(试剂盒购自德国宝灵曼公司)和免疫细胞化学检测(试剂盒购自博士德公司)，结果用图像分析仪测定阳性细胞单位面积平均吸光度(曾称光密度OD，北京生物医学工程研究所CMIAS007真彩色医学图像分析仪)。

　　数据分析采用非配对资料t检验。

　　结果　哮喘组BALF中的EOS凋亡率显著低于对照组(2.1±1.3 vs.10.1±3.4, P＜0.01)。哮喘组BALF中EOS的BCL-2、 ICE表达强度显著高于对照组(P＜0.01，附表)。哮喘组BALF EOS凋亡率与BCL-2表达呈负相关(r=-0.83, P＜0.01)，与ICE表达呈负相关(r=-0.76,P＜0.05)。

附表　二组患者BCL-2、ICE表达强度（A值）

　　注：^*P＜0.05，^**P＜0.01　　讨论　嗜酸性粒细胞是一种终末分化细胞，当其存活时间终结时，将通过细胞凋亡清除。我们发现哮喘组BALF中EOS凋亡率明显低于正常对照组，提示哮喘动物EOS存在凋亡机制异常。虽然骨髓的EOS生成增多是哮喘在体内EOS增多的主要原因，但哮喘患者肺内EOS正常凋亡受到抑制，也必然会导致EOS数量增多和气道炎症持续存在。BCL-2是一种凋亡抑制基因，通过阻断细胞凋亡的公共信号传递通路，达到抑制或阻断多种细胞及细胞系的细胞凋亡过程。ICE也是一种凋亡相关基因，有多种异构体，不同的异构体对细胞凋亡调控作用也不一样。哮喘豚鼠EOS中BCL-2和ICE表达均明显增强,并与EOS的凋亡率关系密切，提示 BCL-2和ICE可能在抑制EOS凋亡中起重要作用。白细胞介素5(IL-5)等细胞因子具有抑制EOS并上调BCL-2表达的作用^［2］。但这些细胞因子与凋亡相关基因相互作用在哮喘EOS凋亡障碍中的详尽机制仍有待进一步的研究来阐明。

　　本课题受国家自然科学基金资助(基金编号：39670337)

参考文献

　　1　Simon HU, Blaser K. Inhibition of pregrammedeosinopnil death: a key pathogenic event for eosinophil? Immunol Today,1995,16:53-55.

　　2　Ochiai IL, Kagami M, Matsumura S, et al. IL-5 but not interferon-gama inhibits eosinophil apoptosis by up-regulation of bcl-2 expression. Clin Exp Immunol, 1997,107: 198-204.

(收稿：1998-03-30　　修回：1998-07-10)