十二指肠溃疡伴幽门螺杆菌感染者胃窦组织中T淋巴细胞的检测

中华微生物学和免疫学杂志 2000年第4期第20卷 检测技术

作者：祝扬　聂昭华　张敏　陈秀珍

单位：解放军第261医院消化科

　　经胃镜，尿素酶及病理检查证实的十二指肠溃疡(DU)并幽门螺杆菌(Hp)感染者44例，并以年龄与前者近似胃镜下确诊的Hp(-)慢性浅表性胃炎(CSG)30例为对照。胃镜下取胃窦组织5～6块，应用免疫组织化学法(IHC)及流式细胞术(FCM)对组织内T细胞亚群CD3、CD4和CD8含量分别进行检测。FCM检测，采用微小组织标本制作机先将胃窦组织研碎，取出悬液，尼龙沙网过滤，电子温控离心机200×g离心，洗涤后制成1×10⁶/ml的单细胞悬液。采用三色免疫荧光(CD3-PreCP、CD4-FITC、CD8-PE 10μl)直接染色，孵育并洗涤后加入1%多聚甲醛液1ml，应用FACS420型流式细胞仪检测。从44例Hp(+)DU及30例Hp(-)CSG患者胃窦粘膜组织标本分离淋巴细胞，经处理后从每份单细胞悬液标本中所采集的淋巴细胞数在10000个左右，Hp(+)患者CD4增殖较Hp(-)者为低(13.1±1.4 vs 22.2±3.1，P＜0.01)，CD8则增高，与对照组相比差异非常显著(43.9±2.8 vs 30.4±3.7，P＜0.01)。IHC，采用ABC技术，检测结果5例Hp(+)DU与4例Hp(-)CSG患者胃粘膜组织显示，Hp(+)患者胃窦组织上皮小凹、腺颈部及腺体CD4明显增殖，与Hp(-)者相比，差异有显著性(分别为6.9±0.6 vs 2.1±0.7；19.5±1.8 vs 3.1±0.8；10.6±4.7 vs 1.0±0.9；P＜0.05)。CD8淋巴细胞数虽有增高，但与Hp(-)患者之间差异未见显著性。

　　国内目前分析胃粘膜组织T淋巴细胞亚群表达的传统方法仍主要采用IHC。本文IHC检测，Hp(+)DU胃固有层CD4淋巴细胞明显高于Hp非感染者，而CD8淋巴细胞虽然亦有增高，但与对照组相比无统计学差异。采用FCM，可见CD4增殖反应降低，而CD8则呈增高。其间的差异推测可能与实验方法、抗原来源、及标本抽样误差等因素有关。IHC虽然不失为稳定、灵敏的方法，但其抗原不易保存；染色可能会对抗原显示带来影响；组织切片时易造成细胞损伤，无疑会丢失众多的细胞信息。因此，受检的T淋巴细胞难以代表组织中的表达。选用FCM，利用其高灵敏度、高分辨率及多参数分析等优点，从中体会到其检测T淋巴细胞的两大优点：①可搜集足够的胃粘膜组织，并能从组织中将指定的淋巴细胞从细胞群体中分离出来。其纯度高，特异性好，使测定参数更能客观的反应胃粘膜的淋巴细胞含量。②可对细胞表面标志分子变化进行定量研究，通过图像分析，提取有用的信息。这种定量分析的结果更为客观，从而能克服实验中主观因素的影响。

(收稿日期：2000-03-06)