诱发大鼠肝癌过程中IL-2,淋巴细胞转化率变化
世界华人消化杂志 1999年第5期第0卷 临床经验
作者:毛华 赵敏芳 冯建均 袁爱力
单位:毛华 赵敏芳 冯建均 第一军医大学珠江医院 广东省广州市 510282; 袁爱力 第一军医大学南方医院全军消化研究所
关键词:肝肿瘤;白细胞介素-2;淋巴细胞转化
Subject headings liver neoplasms; interleukin-2; lymphocyte transformation
中国图书馆分类号 R 735.7
白介素2(IL-2)是体内一种重要的免疫活性因子,通过促进B细胞分裂、增殖以及NK细胞的活性作用,提高机体的免疫功能. 我们应用二甲基奶油黄(DAB)诱发大鼠肝癌模型,观察诱癌过程中IL-2与淋巴细胞转化率改变及其相互关系.
1 材料和方法
1.1 材料 60只♂ Wistar大鼠(第一军医大学实验动物中心提供,合格证号91003),体重132.4 g±20.9 g,6 wk~8 wk. 随机分成对照、实验甲、乙、丙4组,每组15只,分笼喂养,一鼠一笼. 动物饲养房保持通风、干燥,室温在22℃~25℃,定期更换鼠笼垫料. 用二甲基奶油黄(DAB,广州化学试剂厂)拌染的颗粒饲料(黄粮)按要求喂养,实验组加DAB,对照组未加DAB. 实验甲组在喂养后4 wk~6 wk,实验乙组在10 wk~12 wk,实验丙组在喂养后14 wk~16 wk分批杀死. 观察肝脏大体形态,病变部位取材后置于10%福尔马林溶液中固定于HE染色.
1.2 方法 ①大鼠IL-2的产生与测定:无菌取大鼠脾脏,研磨后溶解红细胞,用10%小牛血清RPMI-1640液将细胞浓度调整为5×106/ mL. ConA 终浓度10 μg/ mL,置于37℃, 5% CO2培养箱孵育48 h后,离心10min,收集上清,置于-20℃储存待用. 采用鼠脾细胞增殖检测法测定大鼠IL-2活性[1],IL-2标准品(1000 u/ mL)由第一军医大学生物技术中心王小宁博士惠赠. ②大鼠外周血淋巴细胞转化率测定:参照改良的吴氏法[2]进行. 调整大鼠脾淋巴细胞浓度为6×106/ mL,ConA 终浓度为10 μg/ mL,96孔培养板每孔加入0.2 mL淋巴细胞,置于37℃,5% CO2培养箱孵育42 h后,每孔加入1μci[3H]TdR,继续培养6 h,多头细胞收集仪收集细胞至玻璃纤维滤纸上,加入10%三氯醋酸溶液,烘干后置于盛有闪烁液的闪烁瓶中,β计数器测定脉冲数.
2 结果
实验各组 IL-2活性见表1,肝癌组大鼠淋巴细胞DNA合成能力比正常组降低10倍左右(表2),正常组和肝癌组大鼠IL-2活性与淋巴细胞转化率呈正相关,r=0.78,P<0.05,肝炎组和肝癌组大鼠IL-2活性与淋巴细胞转化率无关(P>0.05).
表1 诱发大鼠肝癌过程中不同时期IL-2活性变化
组别 |
n |
IL-2(μ/ mL) |
F |
对照 |
15 |
24.54±4.82 |
|
肝炎 |
15 |
19.82±2.54a |
4.19 |
肝硬变 |
12 |
15.00±2.73b |
|
肝癌 |
14 |
4.52±1.748b |
|
aP<0.05,bP<0.01,vs 正常组.
表2 各组淋巴细胞转化率改变
组别 |
n |
淋巴细胞转化率 |
对照 |
15 |
11916.8±2077.36 |
肝炎 |
15 |
8209.55±1177.46a |
肝硬变 |
12 |
4631.9±554.54b |
肝癌 |
14 |
753.75±132.66b |
aP<0.05,bP<0.01,vs 正常组.3 讨论
肝癌发生、发展过程中,体内免疫机制受到严重损害,其中包括各种免疫杀伤细胞活性下降、IL-2活性受抑制,使肿瘤得以发展[3]. 白介素2通过增加细胞毒T细胞活性、促进NK细胞增殖并产生干扰素、促进B细胞产生免疫球蛋白而发挥抗肿瘤和抗感染作用[4]. 我们在用DAB诱发大鼠肝癌过程中动态检测IL-2活性结果表明,肝炎、肝硬变、肝癌组明显低于正常对照组(P<0.05或0.01),肝癌组低于肝炎组(P<0.05). 提示癌变过程中,IL-2活性呈进行性下降,检测体内IL-2活性可以了解病情发展和机体免疫状态. 在肝炎期动态观察IL-2活性,如显著低于肝炎组水平时,应考虑出现肝癌的可能,为早期发现肝癌提供敏感指标. 在正常和癌变机体中IL-2活性随着淋巴细胞转化率降低而下降,但在非特异性炎症、肝硬变阶段,机体中IL-2活性与淋巴细胞转化率无明显相关,可能与辅助T淋巴细胞的数量减少有关[5].
诱发大鼠肝癌过程中,机体的免疫功能下降与IL-2活性和淋巴细胞转化率降低有关,提高大鼠机体IL-2活性,可以减少大鼠肝癌的发生[6]. 检测IL-2活性和淋巴细胞转化率,可以了解机体免疫状态和疾病的预后. 肝炎期IL-2活性显著降低,可能提示有肝癌发生. 因此,肝炎期检测IL-2活性测定,可能成为诊断早期肝癌一个重要指标.
通讯作者:毛华
4 参考文献
[1] Kromer G, Smithe GF. Avlan lymphokine; an improved method for chicken IL-2 production and assay. A Con A-erythrocyte complex induces higher T cell proliferation and IL-2 production than dose free mitogen. Immunol Rev Methods, 1984;73:273-277
[2] 吴梧桐. 淋巴细胞转化率的测定. 生物化学与生物物理学报,1988;20:21-24
[3] Mason DW, Kromer G, Nakagana E, Hotergen G,Yonthr T. Function of T-lymphocyte subsets isotated by means of monoclonal antibodies. Immol Rev, 1983;74:57-63
[4] Blay JY, Gemlo BT. Cytokines in patients with metastatic cancer treated with recombine IL-2 and lymphokine actitated killed cells. Cancer Res, 1988;48:5846-5851
[5] 宋卫生,毛华,徐明符. 中华麦饭石对肝癌大鼠免疫功能影响. 免疫学杂志,1997;13:176-178
[6] 宋卫生,毛华,徐明符. 中华麦饭石阻止DAB诱发大鼠肝癌研究. 肿瘤,1997;17:209-212
收稿日期:1998-09-16