胃癌组织mdr1基因表达的临床意义

世界华人消化杂志 1999年第2期第0卷 专家述评

作者：刘忠民　寿楠海

单位：刘忠民　　山东省泰安市中心医院普外科　271000； 寿楠海山东医科大学第一附属医院普外科　山东省济南市　250012

关键词：胃肿瘤；多药耐受性；mdr1基因；RNA，信使；基因表达

　　中国图书资料分类号　R735.2

　　摘　要

　　目的　探讨多药耐药基因(mdr1基因)在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系.

　　方法　应用RT-PCR法检测了29例手术切除人胃癌组织中的mdr1 mRNA. 术前未用过化疗.

　　结果　mdr1 mRNA的阳性率为48.3%(14/29)，mdr1 mRNA的表达在肿瘤浸润浆膜者为33.3%(7/21)，明显低于未浸润浆膜者(7/8)，基因的表达与年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移及TNM分期等无关.

　　结论　化疗前胃癌组织中mdr1基因即存在较高的表达率，这为选用化疗药物和MDR逆转剂提供了参考指标. mdr1 mRNA表达减少似与肿瘤进展相关.

Significance of mdr1 gene expression in gastric carcinoma tissue

LIU Zhong-Min¹ and SHOU Nan-Hai²

　　¹Department of General Surgery, Taian Central Hospital, Taian 271000, Shandong Province, China

　　²Department of General Surgery, the First Affiliated Hospital, Shandong Medical University Jinan 250012, Shangdong Province

　　Subject headings　stomach neoplasms; resistance, multiple drugs; mdr1 gene; RNA, messenger; gene expression

　　Abstract

　　METHODS　From Sept 1997 to Jan 1998, a total of 29patients with gastric carcinoma were recruited, and mdr1 mRNA were assayed by RT-PCR. Fresh tumor tissues were surgically resected without chemotherapy before operation.

　　RESULTS　The positive rate of mdr1 mRNA was 48.3% (14/29). The expression rate in patients with serosa invasion was 33.3% (7/21), much lower than in those without serosa invasion (87.5%). The correlation between mdr1 expression and the age and sex of the patients, tumor size, histologic types, lymph node involvement and TNM stage was not significant.

　　CONCLUSION　There are intrinsic drug resistance in almost half of the primary gastric carcinomas prior to chemotherapy. Analysis of mdr1 gene can be helpful in selecting chemotherapeutic drugs and mdr1 mRNA may act as a reference index for using the MDR reversing agents. The absence of mdr1 mRNA expression seems to correlate with advanced disease, which needs to be further confirmed.

　　0　引言

　　肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药性(multidrug resistance, MDR)是化疗失败的重要原因，其中多药耐药基因(mdr1基因)的过度表达是引起MDR的主要机制^［1］. 胃癌组织mdr1基因的表达状况已有报道，但较少涉及mdr1基因表达与胃癌临床病理的关系^［2，3］. 我们应用RT-PCR技术检测了29例胃癌组织的mdr1 mRNA，探讨mdr1基因表达的临床价值.

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　1997-09/1998-01我院普外科手术治疗的胃癌患者29例，其中男19例，女10例，年龄32岁～76岁，平均57.8岁. 患者术前均未接受化疗，检测标本均经我院病理检查证实.

　　1.2　方法　检测的胃癌组织为手术中切取的新鲜肿瘤组织，用生理盐水清洗表面血液，剔除非肿瘤成分，放入平皿中，置冰浴中迅速剪碎及制备匀浆，离心清洗一遍，采用异硫氰酸胍一步法(AGPC法)提取细胞总RNA^［4］. 待测RNA在逆转录酶、适量随机引物和dNTP的作用下合成cDNA. 在一个PCR反应管中加入mdr1片段和内标β₂微球蛋白(β₂-m)片段的引物. 扩增条件及引物序列参见文献［5］.

　　2　结果

　　取15μL PCR扩增产物在20g/L琼脂糖凝胶内电泳，于紫外灯下观察有157bp(MDR扩增带)和114bp(β₂-m扩增带)者为阳性，每次检测均同时设阴性及阳性对照. 组间差异采用χ²检验做统计学处理. 在29例胃癌组织中mdr1-mRNA阳性率为48.3%(14/29)，mdr1 mRNA的表达与临床病理的关系见表1. 统计分析显示mdr1基因的表达与肿瘤浸润深度有关，与年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、病理类型、TNM分期无关.

表1　胃癌mdr1 mRNA与临床病理的关系(n)

^aP＜0.05，vs 浆膜内.

　　3　讨论

　　MDR是指肿瘤细胞对一种药物耐药的同时，对其他结构和机制不同的药物也产生耐药性，是肿瘤化疗失败的主要原因之一. MDR的发生机制很复杂，其中mdr1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)高表达为其主要机制. P-gp是一种能量依赖性药物排出泵，通过ATP提供能量，它可将抗肿瘤药物由胞内泵出胞外，使其细胞毒作用减弱或消失而出现耐药性. 通过检测肿瘤细胞mdr1基因转录的mRNA和编码的P-gp，可以间接判断肿瘤对MDR相关化疗药物的敏感性. 本结果显示，胃癌组织中mdr1-mRNA的表达率为48.3%，具有较高的天然耐药性，这可能是胃癌对化疗效果不佳的一个原因. 对mdr1基因阳性表达的患者，临床上应尽量避免应用MDR相关化疗药物，以提高化疗效果. mdr1 mRNA检测有助于制定合理的化疗方案. 另外，目前发现许多药物可以通过抑制P-gp功能而逆转MDR，提高化疗治愈率^［6］，因此mdr1 mRNA和P-gp检测还可作为选用化疗增敏剂的指标，在指导肿瘤治疗中发挥重要作用.

　　在本实验中，我们对胃癌组织mdr1基因的表达与其临床病理的关系做了研究，发现肿瘤浸润未穿透肌层者，mdr1 mRNA的阳性率为87.5%，明显高于已浸润浆膜层者(33.3%)，但mdr1 mRNA表达与年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学类型及TNM分期无关，这与Wallner的结果相类似^［2］，但Ⅰ～Ⅳ期胃癌患者的mdr1 mRNA的阳性率分别为75.0%，60.0%，45.5%和0%，呈逐渐降低趋势. 其原因可能与MDR肿瘤细胞的致瘤性降低有关^［7］. mdr1基因表达状况能否成为一个独立的预后指标，尚需进一步研究证实.

　　作者简介：刘忠民，男，1966-04-04生，山东省莱芜市人，汉族. 1993年山东医科大学毕业，医学博士，主治医师，主要从事消化外科疾病的基础及临床研究，发表论文11篇.

　　通讯作者　刘忠民，271000，山东省泰安市中心医院普外科，山东省泰安市龙潭路29号.

　　Correspondence to:Dr. LIU Zhong-Min, Department of General Surgery, Taian Central Hospital, 29 Longtanlu, Taian 271000, Shandong Province, China

　　Tel. +86·538·8224161 Ext. 8387

　　4　参考文献

　　［1］　Pastan I, Gottesman MM. Multiple-drug resistance in human cancer. N Engl J Med, 1987;316:1388-1393

　　［2］ Wallner J, Depisch D, Csur A, Gotzl M, Haider K, Pirker R. Mdr1 gene expression and its clinical relevance in primary gastric carcinoma. Cancer, 1993;71:667-671

　　［3］　方刚，臧静，刘复坤，黎介寿，陈龙邦. RT-PCR法检测胃癌组织mdr1基因的表达及其临床意义. 中国肿瘤临床，1997；24：169-171

　　［4］　Chomezynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenal-chloroform extraction. Anal Biochem, 1987;162:156-159

　　［5］　王珊，金先庆，杨纯正，许元富，熊冬生，许嘉陵. 儿童实体恶性肿瘤多药耐药基因的表达. 中华小儿外科杂志，1997；18：259-261

　　［6］　Kellen JA. The reversal of multidrug resistance in cancer. Anticancer Res, 1993;13:959-962

　　［7］ Mizoguchi T, Yamada K, Furukawa T, Hidaka K, Hisatsugu T, Shimazu H. Expression of mdr1 gene in human gastric and colorectal carcinomas. J Natl Cancer Inst, 1990;82:1679-1683

收稿日期　1998-06-29