食管癌患者外周血粘附分子检测的临床意义＊

　　中国肿瘤临床1999年第26卷第7期

吕桂泉　许沈华　冯建国　牟瀚舟

　　摘　要　目的：为了解食管癌患者外周血（PeripheralBlood,PB）粘附分子CD₄₄水平的临床意义。方法：用流式细胞术检测52例食管癌患者术前外周血中CD₄₄水平，进行临床病理分析并与100例正常人外周血中CD₄₄作统计学比较。结果：正常人外周血中CD₄₄％为46.14±1.34，正常人外周血中CD₄₄％与年龄、性别比较无统计学意义，52例食管癌患者外周血中CD₄₄％与年龄、性别比较也无统计学意义。而中段食管癌患者、外生型、溃疡型、中分化、低分化、晚期或复发患者、淋巴结转移4个以上的、A型、O型血患者的外周血中CD₄₄％水平均高于正常人（P＜0.05）。结论：食管癌外周血中CD₄₄％升高可提示肿瘤复发或属于晚期患者。CD₄₄％水平越高，肿瘤分化程度越差。CD₄₄％升高与肿瘤大体类型有关，外生型和溃疡型较高。O型血和A型血CD₄₄％较高。用流式细胞仪检测食管癌患者术前外周血中CD₄₄水平，可为临床提供判断患者预后的参考依据。

　　关键词：CD₄₄　流式细胞仪　食管癌　外周血

　　粘附分子（CD₄₄）与恶性肿瘤的转移有关^[1～3]，但大多数报道都是检测恶性肿瘤细胞CD₄₄的表达，未见用流式细胞仪检测食管癌患者外周血（PeripheralBlood,PB）中CD₄₄水平的报道。为了解食管癌患者PB中CD₄₄水平的临床意义，作者检测52例食管癌患者术前PB中CD₄₄水平，并进行临床病理分析及与100例正常人进行比较。

　　1　材料与方法

　　1.1研究对象

　　1997年7月15日～1998年4月21日浙江省肿瘤医院胸外科住院的食管癌患者，术前检测了外周血中CD₄₄水平的患者共52例，均经复查病理诊断和病历资料。男46例，女6例；年龄26～70岁，平均年龄53.6±1.39岁。对照组取本院正常健康职工100例。男21例，女79例；年龄19～66岁，平均年龄38.66±2.35岁。

　　1.2试剂

　　本研究使用的抗体均为荧光异硫氨酸荧光素（FITC）或藻红蛋白（PE）标记的鼠抗人单克隆抗体。

　　CD₄₄－FITC，CD₅₆－PE（NK细胞），CD₁₉－FITC（美国B－D公司产品），CD₃－FITC，CD₄－FITC，CD₈－PE（北京医科大学免疫室产品）。

　　1.3方法

　　取正常人或患者外周血2ml加入到含有抗凝剂（25U/ml肝素）的试管中。取20μl抗体加入到12×75mm的塑料小管中，每例做5管，A管CD₁₉－FITC，B管CD₄－FITC/CD₈－PE，C管CD₃－FITC/CD₅₆－PE，D管CD₄₄－FITC，E管阴性对照。在每管中加入100μl新鲜的抗凝全血，充分混匀后在室温静置15～30分钟，每管加2ml溶血素（0.159mol/LNH4Cl，0.01mol/LKHCO3, 0.01mmol/LNa2－EDTA）。充分混匀后。在室温于暗处静置10～12分钟。离心（300g）5分钟，倾去上清。加2mlPBS(含0.1％叠氮钠)震荡，混匀，离心(200g)5分钟，倾去上清，加PBS－离心后每管加0.5ml1％的副甲醛固定液，当天上机检测分析。流式细胞仪（FACSCalibur美国B－D公司）分析窗内2000个以上细胞。用Cellguest软件分析阳性标记细胞百分率。CD₄₄分析用直方图，免疫细胞亚群分析用点阵图。

　　1.4统计方法

　　统计学处理采用t检验。

　　2　结果

　　2.1正常人PB中CD₄₄范围

　　正常人PB中CD₄₄最小值为14％，最大值为71％，平均46.14±1.34，根据总体均数99％可信限为公式，所得值范围为42.7％～49.6％。

　　2.2肿瘤发生部位

　　52例食管癌患者均有发生部位记载。临床记录中上和中下都统计在中部。食管癌患者PB中CD44％与肿瘤发生部位的关系见表1。

表1　食管癌患者PB中CD₄₄％与肿瘤发生部位的关系

　　 ＊与正常人比较P＜0.0012.3肿瘤大体类型

　　50例食管癌患者有肿瘤大体类型记录（1例患者剖胸探查肝转移未切除。另1例患者准备手术B超报告肝转移后未手术，这2例患者只有活检报告）。食管癌患者PB中CD₄₄％与肿瘤大体类型的关系见表2。

表2　食管癌患者PB中CD₄₄％与肿瘤大体类型的关系

　　 ＊与正常人比较P＜0.01＊＊与正常人比较P＜0.05

　　注：外生型（包括菜花型、蕈伞型、窿突型）2.4肿瘤分化程度

　　52例食管癌患者中50例手术标本，2例活检。病理报告1例为腺癌，51例为分化程度不同的鳞状细胞癌。食管癌患者PB中CD₄₄％与肿瘤分化程度的关系见表3。

表3　食管癌患者PB中CD₄₄％与肿瘤分化程度的关系

　　 ＊与正常人比较P＜0.001＊＊与正常人比较P＜0.052.550例有手术标本食管癌患者PB中CD₄₄％与患者淋巴结转移的关系(表4)

表4　食管癌患者PB中CD₄₄％与患者淋巴结转移的关系

　　 ＊与正常人比较P＜0.012.6食管癌患者PB中CD₄₄％与患者临床分期的关系(表5)

表5　食管癌患者PB中CD₄₄％与患者临床分期的关系

　　 ＊与正常人比较P＜0.012.7食管癌患者PB中CD₄₄％与患者血型的关系(表6)

表6　食管癌患者PB中CD₄₄％与患者血型的关系

　　 ＊与正常人比较P＜0.001＊＊与正常人比较P＜0.053　讨论

　　CD₄₄是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白。CD₄₄蛋白主要参与细胞－细胞，细胞－基质之间的特异性粘连过程式^[1]。Matsumura等^[2]首先报道临床肿瘤标本CD₄₄s和CD₄₄v的结果，发现正常组织和癌组织标本都能检测到标准的CD₄₄s表达，而CD₄₄v在正常组织只偶尔能检测到低水平表达的小分子量CD₄₄变异体拼接转录子，非转移肿瘤患者的肿瘤标本，其CD₄₄转录子在大小、数量及表达水平方面介于正常组织和恶性肿瘤之间。Herrlich等^[3]认为许多人类肿瘤细胞及非霍奇金淋巴瘤的侵袭行为与CD₄₄高表达有相关性，这可能是肿瘤细胞在体内生长，能通过表达85KD的CD₄₄蛋白而得到加强，也可能是由于CD₄₄蛋白与一些未知的细胞基质外成分相互作用的结果。

　　国外文献报道用Westernblot_[4],RT－PCR＆SouthernBlot^[5]，ELASA^[6]分析测定胃癌和结直肠癌患者外周血CD₄₄及其变异体，并研究其与消化道肿瘤负荷及转移、肿瘤的侵犯范围、淋巴结转移等的关系，但未见用流式细胞仪检测食管癌患者外周血CD₄₄水平并研究其临床意义方面的相关文献报道。国内文献报道用免疫组织化学方法检测食管癌组织中CD₄₄v4/5表达及其与转移的关系^[7]。而用流式细胞仪检测食管癌患者外周血中CD₄₄水平与以上方法比较具有更快速、简便、准确的特点并研究其临床意义，可为临床提供判断患者临床分期，有否转移及预后的参考指标。

　　作者用流式细胞术检测52例食管癌患者术前外周血中CD₄₄水平，进行临床病理分析并与100例正常人外周血中CD₄₄％作统计学处理比较。结果显示正常人外周血中CD₄₄％为46.14±1.34，与年龄、性别比较无统计学意义。52例食管癌患者外周血中CD₄₄％与年龄、性别比较也无统计学意义。而中段食管癌患者CD₄₄％（56.63±3.00）、外生型CD₄₄％（63.33±9.65）、溃疡型CD₄₄％（53.76±2.92）、中分化CD₄₄％（53.58±2.79）、低分化CD₄₄％（66.71±7.68）、晚期或复发患者CD₄₄％(73.14±7.20)、淋巴结转移4个以上的CD₄₄％(59.17±5.21)、A型血患者CD₄₄％(54.07±4.77)、O型血患者CD₄₄％（73.14±7.20）等九个分析项目的CD₄₄％水平均高于正常人（P＜0.05）。52例食管癌患者PB中CD₄₄％检测显示：食管癌外周血中CD₄₄％升高可提示肿瘤复发或属于晚期患者。CD₄₄％水平越高，肿瘤分化程度越差。CD₄₄％升高与肿瘤大体类型有关，外生型和溃疡型较高。O型血和A型血CD₄₄％较高。用流式细胞仪检测食管癌患者术前外周血中CD₄₄水平，可为临床提供判断患者预后的参考依据。

　　＊本文课题受浙江省医药卫生科研基金资助

　　作者单位：浙江省肿瘤医院（杭州市310022）

参考文献

　　1　高随宽．CD44分子与肿瘤.国外医学分子生物学分册，1995;17(5):217～19

　　2　Matsumura Y,Tarin D.Significance of CD₄₄ gene products for cancer diagnosis disease evaluation.Lancet,1992;340(46):1053～5

　　3　Herrlich P,Zoller M,Pals ST,et al.CD₄₄ splice variants:metastases meet lymphocytes.Immunol Today,1993;14(8):395～9

　　4　Gou Yajun,Liu Guangluo,Wang Xiaoning,et al.Potential use of soluble CD₄₄ in serum as indicator of tumor burden and metastasis in patients with gastric of colon cancer.Cancer Res,1994;54(2):422～6

　　5　Suh SI,Baek WK,Park JW,et al.Idenification of CD₄₄ splice variant in Korean colorectal cancers lines.J Korean Med Sci,1995;10(3):169～75

　　6　Harn HJ.Soluble CD₄₄ isoforms in serum as potential markers of metastatic gastric carcinoma.J Clin Gastroenterol,1996;22(2):107～10

　　7　李道明．食管鳞癌组织中CD44v4/5表达及其与转移的关系．河南医科大学学报．1997;32(3):39～43