放射免疫显像在前列腺癌中的应用
中华泌尿外科杂志 1998年第12期第19卷 简 报
作者:钭理强 张传波 俞莉章 张春丽 郭应禄
单位:100034 北京医科大学第一医院,泌尿外科研究所(钭理强、俞莉章、郭应禄);北京医科大学第三医院泌尿外科(张传波);北京医科大学第一医院放射科(张春丽)
我们报告抗前列腺癌膜抗原单抗YDPC应用于裸鼠前列腺癌肿瘤模型放射免疫显像(RIS)的结果。
材料和方法 抗前列腺癌膜抗原单抗YDPC由本室制备。以间接免疫荧光和Western Blot方法鉴定所制备单抗所识别抗原的性质。前列腺癌细胞抗原的提取方法按Trizol试剂盒说明。
人前列腺癌细胞株PC-3M由本室保存,人直肠癌细胞株lovo由加拿大Alberta实验室Diener教授提供。裸鼠和Balb/c小鼠购于北京医科大学实验动物中心。裸鼠肿瘤模型的建立:裸鼠右侧肩部皮下接种PC-3M和lovo细胞5×106/只,约3~4周后长成直径1cm的肿物,即可用于RIS。99mTc标记单抗采用二巯基乙醇直接还原法,纯化用SephadexG-50,分别计算标记率、放化纯度及标记抗体对PC-3M细胞表面抗体最大结合力。裸鼠分实验组6只,对照组2只。尾静脉注射一定剂量的标记单抗后,分别于6和24小时进行显像。显像条件为低能准直器,能量140keV,矩阵128×128,窗宽20%,采集20分钟。显像完毕后处死裸鼠,取肿瘤组织和正常组织,称湿重后γ计数器测定,计算每克肿瘤组织的吸收率(%ID/g)。
结 果 将YDPC杂交瘤细胞接种注射降植烷Balb/c小鼠后,收集腹水1∶10 000稀释后作间接免疫荧光实验,可见细胞膜表面有明显的荧光染色。但多次Western Blot结果均无明显的条带被YDPC单抗识别。
YDPC经二巯基乙醇还原法标记后,用薄层层析法(HLC)检测,其标记率为42%,放射化学纯度大于95%。Scatchard作图法计算YDPC对细胞膜表面抗原的亲和力为7.71×109M-1。11 100kBq标记抗体注射后6小时肿瘤开始显像,24小时后肿瘤显像清晰。对照组裸鼠直肠移植肿瘤一直没有明显的放射性浓聚。显像后每只小鼠取血100μl,解剖裸鼠各组织,以γ计数器测定。6小时和24小时的肿瘤吸收率分别为1.9%和2.1%ID/g。
讨 论 为了更好达到RIS诊断转移性前列腺癌的目的,关键是发现一种前列腺组织特异的且针对细胞膜抗原的单抗。早期RIS多采用抗PAP和抗PSA的单抗。但应用于检测前列腺癌转移灶时敏感性很低,其主要原因是它们属于针对胞浆成分的单抗。我们所制备的单抗具有较高的特异性。间接免疫荧光实验表明前列腺癌细胞膜表面具有荧光染色。我们试图进一步明确YDPC所识别抗原的性质,但多次提取前列腺癌细胞抗原后的Western Blot结果均为阴性,推测在抗原提取过程中被降解之故。
本实验在体外鉴定后进行小鼠前列腺癌肿瘤模型的显像。从99mTc标记YDPC在前列腺癌模型中的生物分布及肿瘤的RIS结果看,在短时间内99mTc标记YDPC开始特异集中在肿瘤局部,并随时间延长,肿瘤组织变得逐渐清晰可见,而本底逐渐减弱。
(收稿:1997-09-08 修回:1998-08-10)