骨肿瘤免疫组织化学检测
中华骨科杂志 2000年第0期第20卷 骨肿瘤
作者：丘钜世 李扬 王连唐
单位：中山医科大学病理教研室 广州，510080
肿瘤的抗原性与肿瘤的组织来源及组织分化有密切的联系 。原发性骨肿瘤多来源于间胚叶组织，有着共同的抗原决定簇 ，如中间丝蛋白Vimentin,可籍与其它组织(上皮组织、神经组织 、肌肉组织等）来源的肿瘤相区别。但随着肿瘤组织分化表型 的不同，又出现了各种各样具有相对特异性的抗原。因此使 用相应的抗体去识别不同分化表型的肿瘤，在骨肿瘤的分类、 诊断及鉴别诊断上具有一定价值。
按照骨肿瘤分化表型不同，可分为以下八类。
一、成骨性肿瘤
肿瘤细胞主要向成骨细胞分化，产生骨基质，具有直接形 成骨质或类骨质的特性。在骨基质中主要为Ⅰ型胶原蛋白(TypeⅠcollagen)，此外还有与骨质钙化有关的非胶原基质蛋白，包 括骨钙素(osteocalcin)、骨粘连蛋白(osteonectin)[1]、骨桥蛋白（osteopontin）、骨形态形成蛋白（BMP）及碱性磷酸酶等。这些物质 均可作为骨组织的标志物。但在病理实际工作中，真正应用 上述标志去识别成骨性肿瘤的机会并不多，因为明显的骨质或 类骨质的形成，一般的HE染色便可清楚显示，无需应用组织化 学或免疫组化染色去识别，只是成骨不明显的肿瘤，如成骨 不多的圆形细胞骨肉瘤或成骨不明显的纤维母细胞为主型或软 骨母细胞为主型的骨肉瘤，可运用上述标志物对肿瘤细胞的 成骨倾向加以确定。相反，在成骨性肿瘤中，良性与恶性的区 分，倒是病理医生经常遇到的难题。我们认为除了结合临床 和X线表现，仔细观察瘤细胞的异型性，计算其核分裂相外， 运用免疫组化方法检测某些癌基因或抑癌基因的蛋白表达具有 一定意义。如几乎所有的恶性肿瘤均有抑癌基因p53的改变，p 53蛋白阳性率在骨肉瘤中可高达58％～72％[2，3]，而在良性骨 肿瘤则全为阴性；在骨肉瘤中Rb基因的缺失率达43％～67％[4－6]，而良性肿瘤多为阳性(阳性率为83.3％～100％)[4，7]；癌基因 bcl－2的蛋白表达仅见于恶性肿瘤而不见于良性者[8]。这些结 果丰富了免疫组化的内容。相信随着分子生物学在骨肿瘤研究 中的应用，还可以继续发现新的基因蛋白的改变，若能加以 总结及规范化，可以作为区别骨肿瘤良性与恶性的标志。
二、软骨性肿瘤
肿瘤细胞具有向软骨细胞分化，产生软骨基质，形成软骨 的特性。软骨基质中的纤维成分主要为Ⅱ型胶原，较纤细， 均匀分布于基质中。其非胶原成分主要为软骨粘蛋白（糖蛋白 ），主要含硫酸软骨素，对甲苯胺蓝染料呈异染性；又因为 是糖蛋白，PAS染色阳性反应。在免疫组化染色中，软骨细胞S －100蛋白及溶菌酶Lysozyme出现阳性反应，可作为软骨性肿瘤的 标志物。软骨性肿瘤也与成骨性肿瘤一样，明显的软骨形成是 很容易被识别的，不一定要用免疫组化去证明。而软骨性肿 瘤中良性与恶性的界定，有时却是很不容易的事，当然细胞的 异型性及其形态计量是重要的区分标志。我们认为随着分子 生物学的发展，某些癌基因蛋白的免疫组化结果具有参考价值 ，如c－erbB－2基因蛋白产物在软骨肉瘤中为90％，而在良性软 骨瘤中仅为11％，正常软骨中阴性。可见，该癌基因蛋白在软 骨性肿瘤的诊断中，具有重要意义[9]。
三、骨巨细胞瘤
是由梭形或卵圆形的基质细胞与多量散布均匀的多核巨细 胞所组成。其具体组织来源有争议，只能认为是来源于多分化 潜能的间充质细胞。免疫组化表现复杂多样：部分单核基质 细胞呈现纤维母细胞样，只对Vimentin呈阳性反应，而多核巨细 胞则呈阴性反应；部分基质细胞呈单核巨噬细胞样，对M718(CD6 8)、AACT、Lysozyme、HLA－DR呈阳性反应，而多核巨细胞对单核巨 噬细胞类抗体中的M718(CD68)、AACT呈阳性反应，而对Lysozyme及HLA －DR则呈阴性反应。此外还有散在的基质细胞(很可能是langerha ns细胞)对S－100蛋白呈阳性反应等。若经过多代培养后，可以 见到多核巨细胞消失，而只剩下对Vimentin呈阳性的纤维母细胞 样单核基质细胞。近期研究表明抑癌基因p53蛋白阳性表达的骨 巨细胞瘤具有高度肺转移和术后复发倾向[10]。
四、骨髓性肿瘤(小圆细胞肿瘤)
包括Ewing肉瘤、原始神经外胚叶肿瘤、恶性淋巴瘤和骨髓 瘤等。
(一)Ewing肉瘤:有关其组织发生，一直都有争论，Ewing最初(1 921年)称之为“弥漫性内皮瘤”(diffuse endothelioma)，主要考虑此 瘤源自血管内皮细胞。但其细胞形态及免疫组化FⅧ阴性都不 支持内皮细胞来源之说。后因其免疫组化表现间叶组织共有的 标志Vimentin阳性，瘤细胞能产生少量的Ⅰ型、Ⅲ型及Ⅳ型胶 原，浆内富含糖原，碱性磷酸酶阳性，低分子量的cytokeratin弱 阳性，S－100蛋白反应弱阳性等而考虑其来自骨髓的多潜能未 分化间充质细胞；最近根据部分细胞出现菊形团或假菊形团排 列并呈现神经元和神经纤维的标志阳性，因而认为该瘤属骨 及软组织的原始神经外胚叶肿瘤(primitive neuroectodermal tumor,PNET) 的一簇，而称之为Ewing肉瘤/PNET[11]。我们认为在未有足够证据 证实所有Ewing肉瘤均具有上述神经源性标志之前，只将细胞形 态及免疫组化表现为明显的神经组织分化者，独立为骨及软组 织的PNET外，大部分无明显神经组织分化特征的病例仍称之为 Ewing肉瘤为好。
(二)原始神经外胚叶肿瘤(PNET):如上述骨和软组织的PNET在细 胞形态上应是小圆形细胞恶性肿瘤出现较明显的菊形团排列或见有 少量大细胞向神经元细胞分化，而在免疫组化方面，神经组 织标志包括NSE、NF、Leu7及低分子量Keratin等有较明显阳性反应 者称之谓骨和软骨组织的PNET。
(三)恶性淋巴瘤:骨原发性恶性淋巴瘤与骨外淋巴组织发生 的淋巴瘤一样，可分为何杰金淋巴瘤(HL)及非何杰金淋巴瘤(NHL )，骨内的HL少见，而多为NHL。其免疫组化反应与骨外淋巴瘤相 同，如白细胞共同抗原(LCA)呈阳性反应；B细胞淋巴瘤对L26(CD2 0Cy)、HM57(CD79)等呈阳性反应；T细胞淋巴瘤对UCHL1（CD45R）、VCHT1（CD3）等呈阳性反应；组织细胞淋巴瘤对Mac387、Lysozyme呈阳 性反应；而间变性淋巴瘤及HL的R－S细胞对BerH2(CD30)及CD23反应 呈阳性。随着免疫学研究进展，恶性淋巴瘤的分类及免疫组化 不断更新，已形成了一套专门的免疫组化体系。
(四)骨髓瘤:常为多发性故又称为多发性骨髓瘤，由成熟和 不成熟的浆细胞构成。当B细胞分化为浆细胞时，细胞表面的I g(sIg)逐渐丢失，而细胞中央cIg含量增多，有IgM、IgG、IgA、IgD、Kappa、Lambda等出现。
五、其他结缔组织的骨肿瘤
按其表型分化倾向而呈现该类组织的免疫组化特性如:
1.成纤维性肿瘤（成纤维性纤维瘤、纤维肉瘤等）:产生的 基质主要为Ⅰ型及Ⅲ型胶原，对中间丝抗体Vimentin反应呈阳性。
2.组织细胞性肿瘤(良性及恶性纤维组织细胞瘤):除有成纤 维性肿瘤的抗原特性外，对组织细胞性抗体如Lysozyme、AACT、Ma c387呈阳性反应。
3.肌源性肿瘤:对肌肉特异的抗体如HHF35、actin等反应阳性， 横纹肌则对myoglobin亦呈阳性反应。
4.脉管性肿瘤(血管和淋巴管):内皮细胞对FⅧ、CD31反应阳性 ，血管基底膜对Ⅳ型胶原抗体阳性，肌层或外皮细胞对肌源 性抗体(见上)反应呈阳性。
5.脂肪组织肿瘤:细胞除脂滴可通过苏丹Ⅲ组化染色显示外 ，S－100蛋白染色呈阳性反应。
六、其他肿瘤
1.神经鞘瘤及神经纤维瘤:对神经纤维（NF）及S－100蛋白染 色呈阳性反应。
2.脊索瘤:对S－100蛋白、角蛋白(Keratin)、上皮细胞膜抗原(E MA)均呈阳性反应。
3.长骨造釉细胞瘤：其上皮分化部分对上皮性抗体如Keratin 等呈阳性反应。向纤维母细胞分化部分对Vimentin呈阳性反应。
七、转移瘤
多数为癌转移，包括肺癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、乳腺 癌等，对上皮性抗体反应阳性；神经源性肿瘤(神经母细胞瘤 等)对神经元的中间丝NSE及S－100蛋白等反应阳性。
八、骨的瘤样病变
需用免疫组化进行诊断或鉴别诊断:
1.嗜酸细胞肉芽肿(又称langerians细胞肉芽肿）:langerhans细胞 对S－100蛋白反应阳性，在诊断及鉴别诊断上有较大意义。
2.骨皮质纤维性缺损和非骨化纤维瘤：主要由成纤维细胞 及组织细胞构成，故对Vimentin、Lysozyme、AACT、Mac387等呈阳性反应。
最后，骨组织及骨肿瘤的制片，常要通过强酸脱钙过程， 这对某些抗原产生严重破坏，故有时出现抗原表达减弱或全部 丧失，出现假阴性表现时，应考虑改用缓和脱钙的方法，尽 量减少在脱钙过程中抗原的丢失。
参考文献
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8，陈平圣,丘钜世,王连唐,等.侵袭性骨肿瘤凋亡相关癌基因 蛋白（c－myc,c－fos,bcl－2）的表达.中华骨科杂志,1997,17:642－ 644.
9，李宁,沈璐华,祝庆孚,等.C－erbB－2原癌基因产物在软骨肉 瘤中的增强表达.中华病理学杂志,1994,23:37－39.
10，Masui F, Ushigome S, Fujii K. Giant cell tumor of bone: a clinicopathologic study of prognostic factors. Pathol Int, 1998,48:723－ 729.
11，Dehner LP. Primitive neuroectodermal tumor and Ewing s sarcoma. Am J Surg Pathol,1993, 17:1－ 13.
(收稿日期:2000-01-25)
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