肺结核患者T淋巴细胞亚群、红细胞免疫功能与核仁组成区相关嗜银蛋白的关系及临床意义

中华结核和呼吸感染 1998年第8期第21卷 论　　著

作者：王英年　刘瑞贞　赵宗阁　李慧娟　陈苏民　张克佳　岳立成　李文涛　李玉华

单位：266042 青岛，青岛纺织系统肺部疾病研究所(王英年、刘瑞贞、赵宗阁、李慧娟、张克佳、岳立成、李文涛、李玉华)；青岛市胸科医院(陈苏民)

　　关键词： 结核，肺；T淋巴细胞亚群；红细胞；核仁组成区；核蛋白类

　　【摘要】　目的　探讨结核病患者T淋巴细胞亚群、红细胞免疫功能及核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs)的关系及其临床意义。方法　采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法、红细胞花环试验以及AgNORs测定方法，对59例肺结核患者和50名正常对照组分别测定了其外周血T淋巴细胞亚群、红细胞免疫C_3b受体花环率(E-C_3bRR)与红细胞循环免疫复合物花环率(E-ICR)、AgNORs面积(GA)、核面积(NA)及GA/NA比值。结果　患者CD⁺₃、CD⁺₄、CD⁺₄/CD⁺₈比值均明显降低，CD⁺₈升高；E-C_3bRR明显降低，E-ICR明显升高；GA、GA/NA比值均明显降低。与对照组相比均具有非常显著性差异(P＜0.001)。结论　肺结核患者T淋巴细胞亚群、红细胞免疫功能与AgNORs检测结果一致，可作为反映结核患者免疫状态的指标，并可指导临床治疗。

Significance and correlation of T lymphocyte subgroup, erythrocyte immune function and argyrophilic protein in nucleolar organizer regions in tuberculosis patients

Wang Yingnian, Liu Ruizhen, Zhao Zongge, et al. Lung Disease Institute, Qingdao Texile System, Qingdao 266042

　　【Abstract】　Objective　To study the significance and relationship of T lymphocyte subgroups, erythrocyte immune functions and argyrophilic protein in nucleolar organizer regions (AgNORs) in tuberculosis patients.Method　CD⁺₃，CD⁺₄, CD⁺₃/CD⁺₄ were determined using alkaline phosphatase-antialkaline phosphatase (APAAP) method, E-C_3bRR and E-ICR were assayed by observing receptor rate. Granules area of AgNORs (GA) and nuclear area (NA) were studied by image analysis system.Result　CD⁺₃， CD⁺₄, CD⁺₄/CD⁺₈, E-C_3bRR, GA/NA in tuberculosis patients were significantly lower than those in the healthy group (P＜0.001). However, the values of E-ICR, CD⁺₈ were significantly higher than those of control group (P＜0.001).Conclusion　The results of T lymphocyte subgroup, erythrocyte functions and AgNORs are in accord, and might be usefull in assessing diagnosis and prognosis of tuberculosis.

　　【Key words】　Tuberculosis, pulmonary　　T lymphocyte subgroup　　Erythrocyte　　Nucleolus organizer region　　Nuclear proteins

　　研究已知，结核病的发生、发展、转归与药物的疗效在一定程度上还取决于结核病患者自身免疫功能，当前全面、系统的检测免疫功能的方法较少。因此，寻找一种简易可靠的免疫功能检测方法，对了解病情、指导治疗、评价化疗效果及诊断都是当前迫切需要的。我们分别对肺结核患者与正常对照组进行了外周血T淋巴细胞亚群、红细胞免疫、核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs)检测，并就三项检测结果的关系进行了分析和临床意义研究，获得了较为全面的资料，现报告如下。

　　对象与方法

　　1.观察对象：根据临床症状、胸部X线片、痰结核分支杆菌检查选择无合并症的肺结核患者59例，男47例，女12例。年龄20～69岁，平均39岁。对照组：选择健康献血员50名，其中男22名，女28名，年龄22～42岁，平均28岁。

　　2.检测方法：(1)T淋巴细胞亚群测定：采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法。试剂盒由军事医学科学院基础医学研究所提供。(2)红细胞免疫功能测定：红细胞C_3b受体花环率(E-C_3bRR)及免疫复合物花环率(E-ICR)测定采用郭峰等^［1］的方法。试剂由上海长海医院提供。(3)AgNORs测定：按陈立奇等人^［2，3］的方法，应用国产多功能医学图像分析仪检测。试剂用AgNO₃和明胶自行配制(50%AgNO₃和2%明胶)。

　　3.数据判定：(1)T淋巴细胞亚群：在高倍镜下观察计数200个单核细胞，计算阳性细胞百分率。(2)红细胞免疫功能：红细胞C_3b受体花环率及免疫复合物花环率计算参照文献［1］。计数200个红细胞，以1个红细胞结合2个或2个以上酵母菌为1个花环，算出百分率。(3)AgNORs：显微镜下测量每个细胞核的GA和NA，由图像分析仪自动计算出GA/NA总平均值。

　　4.统计学处理：所有数据均以±s表示，组与组间均数比较用t检验。

　　 结果

　　一、肺结核患者T淋巴细胞亚群、红细胞免疫功能及AgNORs检测数据与各年龄组关系

　　结果显示肺结核患者各项检测数据与年龄组差异无显著性(表1)。

　　二、肺结核患者T淋巴细胞亚群、红细胞免疫功能及AgNORs检测数据与病情关系

　　结果表明，不同病情之间红细胞免疫功能与嗜银蛋白差异有显著性(表2)。

　　三、肺结核患者与对照组T细胞亚群、红细胞免疫功能及AgNORs检测数据对比分析

　　1.肺结核患者与对照组T淋巴细胞亚群检测数据对比分析结果显示，肺结核患者与对照组T淋巴细胞亚群检测数据差异有显著性(表3)。

　　2.肺结核患者与对照组红细胞免疫功能检测数据对比分析结果显示，肺结核患者与对照组红细胞免疫功能检测数据差异有显著性(表4)。

表1　肺结核患者各项检测数据与各年龄组的比较

指标	≤30岁		31～40岁		41～50岁		51～60岁		＞60岁
	例数	±s	例数	±s	例数	±s	例数	±s	例数	±s
T细胞亚群
CD＋3	26	0.53±0.10	9	0.55±0.10	5	0.59±0.04	10	0.51±0.10	9	0.57±0.80
CD＋4	26	0.37±0.07	9	0.39±0.05	5	0.42±0.06	10	0.35±0.09	9	0.36±0.06
CD＋8	26	0.27±0.05	9	0.29±0.03	5	0.26±0.05	10	0.29±0.06	9	0.27±0.03
CD+4/CD+8	26	1.30±0.30	9	1.40±0.30	5	1.50±0.40	10	1.20±0.40	9	1.30±0.30
红细胞免疫
E-C3bRR	15	0.077±0.023	4	0.058±0.020	3	0.063±0.032	6	0.071±0.011	2	0.040±0.014
E-ICR	15	0.078±0.008	4	0.086±0.010	3	0.063±0.027	6	0.088±0.007	2	0.085±0.007
嗜银蛋白
GA(μm2)	26	713.5±140.8	9	647.1±87.1	5	693.0±122.2	10	742.5±95.3	9	691.0±141.0
GA/NA	26	4.2±0.6	9	4.2±0.8	5	3.8±0.5	10	4.4±0.9	9	3.6±0.6

　　注：以上各年龄组间同类数据相比较P值均＞0.05

表2　各项检测数据与肺结核病情的比较

指标

空洞

痰菌涂片

初复治

有洞

无洞

P值

菌(+)

菌(-)

P值

初治

复治

P值

例数

±s

例数

±s

例数

±s

例数

±s

例数

±s

例数

±s

T细胞亚群

CD+3

27

0.54±0.10

32

0.55±0.09

＞0.05

41

0.53±0.10

18

0.57±0.09

＞0.05

42

0.54±0.10

17

0.55±0.10

＞0.05

CD+4

27

0.37±0.07

32

0.38±0.07

＞0.05

41

0.36±0.07

18

0.40±0.06

＞0.05

42

0.38±0.07

17

0.37±0.07

＞0.05

CD+8

27

0.28±0.05

32

0.26±0.05

＞0.05

41

0.28±0.05

18

0.26±0.04

＞0.05

42

0.28±0.05

17

0.25±0.04

＞0.05

CD+4/CD+8

27

1.30±0.40

32

1.40±0.30

＞0.05

41

1.30±0.30

18

1.50±0.30

E-C3bRR

11

0.071±0.024

19

0.069±0.022

＞0.05

17

0.058±0.016

13

0.085±0.022

＜0.05

24

0.070±0.020

6

0.066±0.030

＜0.05

E-ICR

11

0.087±0.009

19

0.076±0.013

＞0.05

17

0.081±0.015

13

0.079±0.007

＞0.05

24

0.079±0.013

6

0.085±0.008

＞0.05

嗜银蛋白

GA(μm2)

27

677.2±111.2

32

724.9±133.4

＜0.05

41

703.0±117.8

18

703.0±143.6

＞0.05

42

710.3±131.6

17

685.2±108.3

＜0.05

GA/NA

27

3.7±　0.4

32

4.5±　0.5

＜0.05

41

4.0±　0.6

18

4.4±　0.6

＜0.05

42

4.2±　0.6

17

3.9±　0.6

＞0.05

　　表3　肺结核患者与对照组T淋巴细胞亚群检测数据比较

指标	患者		对照组		P值
	例数	±s	例数	±s
CD+3	59	0.54±0.10	50	0.73±0.07	＜0.001
CD+4	59	0.37±0.07	50	0.50±0.06	＜0.001
CD+8	59	0.27±0.05	50	0.22±0.03	＜0.001
CD+4/CD+8	59	1.30±0.30	50	2.10±0.30	＜0.001

　　表4　肺结核患者与对照组红细胞免疫功能检测数据比较

指标	患者		对照组		P值
	例数	±s	例数	±s
E-C3bRR	30	0.070±0.023	50	0.132±0.030	＜0.001
E-ICR	30	0.080±0.012	50	0.027±0.011	＜0.001

　　3.肺结核患者与对照组嗜银蛋白检测数据对比分析结果表明，肺结核患者各项指标与正常人相比差异有显著性(表5)。

表5　肺结核患者与对照组嗜银蛋白检测数据比较

指标	患者		对照组		P值
	例数	±s	例数	±s
GA(μm2)	59	703.1±125.0	50	809.1±92.4	＜0.001
GA/NA	59	4.1±0.7	50	5.7±0.6	＜0.001

　　 讨论

　　一、各项检测方法应用原理及其意义

　　1.T淋巴细胞不仅是细胞免疫的主要效应细胞，而且是更重要的免疫调节细胞，其免疫调节作用是通过其亚群细胞实现的。本文结果表明：肺结核患者外周血CD⁺₃、CD⁺₄降低，CD⁺₈升高，CD⁺₄/CD⁺₈比值降低，构成了肺结核T淋巴细胞亚群的特点^［4，5］。表明淋巴细胞亚群与肺结核有一定关系，与文献^［6］报道相符。

　　2.Siegel等^［7］提出红细胞不仅有运输气体的呼吸功能，而且具有免疫吸附功能。红细胞的免疫功能主要通过膜上的C_3b受体(CR1)与C_3b特异性的免疫粘附作用，C_3b受体活性可作为红细胞免疫功能的重要指标。本资料结果显示：肺结核患者E-C_3bRR较对照组明显降低，而E-ICR明显升高(P＜0.001)。提示肺结核患者红细胞免疫粘附功能较正常人明显降低。

　　3.AgNORs是位于某些染色体上特殊部位的核糖体基因(rDNA)，通过其转录而形成核糖体RNA，在蛋白质合成中起极其重要的作用。AgNORs就是核仁组成区嗜银蛋白，是位于NOR上与rDNA相关的酸性非组蛋白，它可用银染方法显示。研究表明，AgNORs可能就是调节rDNA转录的聚合酶Ⅰ的亚单位，起保持rDNA链伸展的作用，对核糖体的形成及细胞内蛋白质合成至关重要，可作为NOR及其rDNA转录活动的标志，用来反应核仁结构和功能的变化。近年来，有学者将其应用于肿瘤研究，发现对肿瘤良恶性及分型分级等有一定价值^［8］。由于淋巴细胞免疫功能也可由各自细胞的rDNA转录活性表达出来，基于此原理，对59例肺结核患者与50例健康人进行检查，发现GA/NA明显下降，可能同机体免疫功能受到抑制有关，从而认为AgNORs方法可作为判断肺结核患者免疫功能状态的一个新的简便的检测方法。

　　二、各项检测结果的关系

　　本文结果表明肺结核患者外周血CD⁺₃、CD⁺₄降低，CD⁺₈升高，CD⁺₄/CD⁺₈比值降低，与对照组有极显著性的差异，构成了肺结核T淋巴细胞亚群的特点。肺结核患者E-C_3b受体较对照组明显降低，而E-ICR明显升高(P＜0.001)，提示肺结核患者红细胞免疫粘附功能较正常人显著降低，此结果与T淋巴细胞亚群CD⁺₃、CD⁺₄均降低结果一致。肺结核患者GA/NA明显下降，证明机体免疫功能受到抑制。此指标与T淋巴细胞亚群、红细胞免疫功能检测所得结果一致，亦可作为肺结核患者免疫功能的检测方法。而且红细胞免疫功能与AgNORs及患者病情严重程度有关，可作为反映免疫功能状态的良好指标。

　　三、本研究的现实及临床实用意义

　　近年来，结核病疫情回升所造成的危害使全球为之震惊。最近WHO指出：结核病袭击了社会的各阶层，已成为年轻人、成年人及HIV感染者的主要杀手。加之耐多药结核病的迅速增多与流行，当前急需研究新的防治方法。研究证明，免疫机制在结核病的发生发展过程中起着重要作用。结核分支杆菌侵入机体后人体能否发病及发病后病情的轻重，不仅取决于结核分支杆菌的数量和毒力，也取决于机体的免疫状态；机体免疫状态的高低还直接影响着肺结核化疗疗效的好坏。我们从三个方面对59例(检测红细胞免疫功能者30例)肺结核患者及50名健康对照人群进行了对比分析，为结核病的免疫治疗提供了实验依据。

　　通过本研究，总结验证了检测机体免疫功能状态的方法，对临床具有较大的实用价值：(1)可指导临床治疗：本资料三项检测方法都发现肺结核患者免疫功能低下，并与患者病情严重程度有关，与临床方面相符。运用以上方法，在患者治疗前后进行免疫功能检测，可为临床医师判断病情、选定药物、制定合理化疗方案提供参考依据。(2)可估计预后，判断疗效：如机体免疫功能低下，表明预后差，治疗难度大。化疗后复查如患者免疫功能增强，表明化疗有效。如免疫功能检测数据未能好转，提示病情未能控制，应及时调整治疗方案。(3)有助于鉴别诊断：如化疗方案合理，病情好转，免疫指标也应随之回升。反之，如化疗方案已经较强，病情理应好转，但免疫功能检测数据未见好转，应考虑诊断是否正确，提示我们应作进一步检查。(4)通过本研究发现，肺结核患者免疫功能低下是本病发生、发展的主要内在因素，因此，合理选用免疫调节剂应成为治疗本病的重要措施，从而为临床调节剂用于结核病治疗奠定了实验理论依据。

　　总之，本资料为临床诊断结核病免疫功能提供了一套新的、简便可行的检测方法，值得临床上进一步应用验证。

参考文献

　　1　郭峰.红细胞免疫及调节功能测定.免疫学杂志，1990，6：60-62.

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　　3　陈立奇.对rDNA转录活性的图像分析.遗传学报，1990，1：75-80.

　　4　朱中元，张贵琛，陈允风，等.结核患者的细胞免疫和体液免疫功能分析.中国实验临床免疫学杂志，1993，5：37-40.

　　5　李长玉，李殿云，王会茹.初治菌阳肺结核病人T淋巴细胞亚群水平的变化.中国防痨杂志，1990，12：120.

　　6　余绍珍，王庭贵，李伟勇，等.活动性肺结核病人治疗前后外周血T淋巴细胞亚群变化及其临床意义探讨.中华结核和呼吸杂志，1992，15：311-312.

　　7　Siegel I, Gleicher N. The red cell immune adherence (RCIA) assay: its application in cancer and autoimmune disease. Immunol Comm, 1981, 10:433-434.

　　8　汤英龙，曹朝，丁悦，等.AgNOR计数、分型对乳腺针吸细胞学的诊断价值.福建医学检验，1996，1：10-11.

(收稿：1998-01-05　　修回：1998-03-25)