聚合酶链反应在血行播散型肺结核诊断中的应用

中华结核和呼吸感染 1998年第8期第21卷 论著摘要

作者：杨渝浩　董德琼　肖瑜　杨朔

单位：563003 贵州省遵义医学院附属医院呼吸内科(杨渝浩、董德琼)，检验中心(肖瑜)，临床医学系(杨朔)

　　对32例血行播散型肺结核、40例浸润型肺结核及30例非肺结核患者的静脉血标本，应用聚合酶链反应(PCR)技术检测结核分支杆菌DNA，并与镜检和培养法比较。

　　对象　血行播散型肺结核组：32例，合并结核性脑膜炎9例，脊柱结核5例，结核性胸膜炎4例，喉结核3例，肠结核、肾结核各2例，子宫结核1例。浸润型肺结核组：40例，均为活动期。非结核组：30例，其中伤寒12例，肺炎10例，急性肾盂肾炎、败血症各4例。均为我院住院及门诊患者，根据病史、临床表现、X线检查、细菌学及病理组织学等实验室检查，或抗结核治疗有效而确诊。

　　方法　(1)标本搜集：所有患者均在未治疗前，分别采集两次静脉血2 ml(抗凝)标本，留晨痰，所有标本置无菌管中送检。(2)试剂及仪器：结核分支杆菌PCR诊断试剂盒及PCR扩增仪由华美生物工程公司提供。(3)方法：①PCR检测：处理标本，取2 ml抗凝血标本低速离心20分钟，取中层白细胞液加1 ml无菌双蒸水振荡混匀，12 000 r/min离心3分钟，倾去上清液，重复以上步骤。取沉淀加入细胞裂解液40μl提取DNA。PCR扩增时间和扩增温度控制，严格按照说明书进行。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析，紫外线透射仪观察，结果见245bp扩增带即为阳性，每次均设阴、阳性对照。②涂片作萋-尼抗酸染色镜检。③结核分支杆菌培养及菌型鉴定按照中国防痨协会结核分支杆菌细菌学检测方法进行。

　　结果　32例血行播散型肺结核、40例浸润型肺结核和30例非结核患者血标本，PCR、镜检及培养法检测结核分支杆菌结果见表1、表2。

　　18例血行播散型肺结核患者痰PCR阳性11例(61%)，浸润型肺结核患者痰PCR阳性率为55%(22/40)。

　　讨论　血行播散型肺结核患者病情危重，由于滥用免疫抑制剂和免疫缺陷病的增加，发病可能增多，且临床表现更不典型^［1］，临床诊断常常依靠影像学特征性表现及细菌学检查。但传统的细菌学检查方法涂片镜检和培养的阳性率一般不超过30%，并且早期患者不咳或仅有干咳，或仅有发热等中毒症状，而无影像学的改变，即使有胸片异常，由于典型改变仅占33.6%，极易误诊为其它疾病，误诊率高达97.2%^［2］。血行播散型肺结核是血行播散型结核病的重要部分，结核分支杆菌感染后经肺静脉入体循环，可播散到全身多数器官，临床常常以高热为主要临床表现，此时应用PCR检测血标本中结核分支杆菌，无疑会大大提高阳性诊断率。本文结果表明，PCR检测血行播散型肺结核血标本中的阳性率为78%～84%，特异性为90%～93%；急性血行播散型肺结核PCR阳性率则高达90%～95%，明显高于镜检(0)和培养(9%)(P＜0.001)，提示PCR检测血标本中结核分支杆菌对诊断血行播散型肺结核有重要意义。另外，本实验中提取血中白细胞方法简单实用，而且采集静脉血可减少标本的污染并解决了难于获取痰标本的问题，因此，PCR技术检测血标本中结核分支杆菌是一个简便、快速、敏感、特异的方法。对血行播散型肺结核，特别是急性血行播散型肺结核的早期诊断和鉴别诊断有重要价值。第二次PCR阳性率高于第一次，说明多次送检标本，可减少假阴性而提高诊断率。

表1　结核分支杆菌三种检测方法结果

　　注：PCR与镜检及培养法比较，经卡方检验P＜0.001

表2　血标本PCR检测结果与血行播散型肺结核分型的关系

　　注：急性血行播散型肺结核与亚急性及慢性者比较，经卡方检验P均＞0.05参考文献

　　1　Reichman LB.HIV infection-A new face of tuberculosis. Bull IUATLD, 1988, 63:19-26.

　　2　雷建平. 125例粟粒型肺结核诊断问题分析. 中华结核和呼吸杂志，1990，13：214-215.

(收稿：1997-12-17　　修回：1998-03-19)