多发早期胃癌增殖细胞核抗原表达的研究

　　中国肿瘤临床1999年第26卷第2期

胡祥　安伟德　毕伟　刘革

　　摘　要　目的:研究不典型增生与多发胃癌的多阶段多中心发生的相互关联性。方法:选取53例早期胃癌的胃标本,全部制成病理切片利用ABC免疫组化法分析多发胃癌的PCNA表达状况。结果:分化型多发早期胃癌及不典型增生粘膜中的PCNA阳性细胞率明显高于单发早期胃癌例,作为癌前病变的不典型增生粘膜PCNA阳性细胞率明显高于正常粘膜、肠上皮化生粘膜,而且PCNA阳性细胞率随着不典型增生的异型程度的增高而明显上升,重度不典型增生、邻接癌灶的不典型增生粘膜的PCNA阳性细胞率与癌之间无显著异差。结论:不典型增生是分化型多发胃癌多阶段发生中的一个重要环节。

　　关键词：多发早期胃癌　不典型增生　增殖细胞核抗原

　　胃癌组织学发生的研究已有许多报告,然而有关多发胃癌研究较少。尤其背景粘膜上存在的不同程度的不典型增生病变与多中心、多阶段癌发生的关联的研究尚无报道。正常细胞的癌变过程被认为是由于基因的异常变化导致细胞从正常细胞增殖过程中逸脱向细胞增殖活性增高的癌细胞变化的过程。因此,本研究应用免疫组织化学染色方法,研究了增殖细胞核抗原在多发胃癌、癌前病变中的表达,从细胞增殖动态角度分析探讨了多发胃癌的组织学发生过程。

　　1　材料与方法

　　1.1　一般资料

　　早期胃癌53例,其中多发早期胃癌20例(分化型12例,低分化型8例)作为研究对象,对照组为单发早期胃癌33例(分化型胃癌17例,低分化型16例)。

　　1.2　方法

　　胃癌切除组织标本用10％福尔马林固定72h后,按5mm宽、5cm长将胃全部做成病理切片,石蜡包埋,其后做4μm厚的连续切片,供HE染色和PCNA免疫组化染色,与癌邻接的不典型增生作为癌旁不典型增生,以区别孤立的不典型增生。

　　胃癌的组织学分类按日本胃癌处理规约^[1],不典型增生的组织学判定按Ming的标准^[2]，不典型增生的分级按胡祥分级标准^[3]。肠上皮化生的种类分成完全型与不完全型两大类。

　　PCNA的染色方法为ABC免疫组织化学染色法,第一抗体为鼠抗PCNA单克隆抗体(PC10,1:50稀释,DACO公司),第二抗体为生物素标记的羊抗鼠IgG抗体(1：50稀释,Amecsham公司)。正常鼠血清代替第一抗体作为阴性对照,阳性对照为正常扁桃体组织。阳性产物位于细胞核,呈颗粒状,弥漫性,棕黄色或深棕色为PCNA阳性细胞,PCNA阳性细胞率的计数为正常与肠上皮化生粘膜由粘膜的表层上皮至深部均等测定1000个上皮细胞中的阳性细胞数;不典型增生和癌则测定不典型增生的上皮细胞和癌细胞1000个中的PCNA阳性的细胞数,用百分率表示。

　　1.3　数据处理

　　计量资料组内比较采用Wilcozon检验,P＜0.05,具有显著性差异。

　　2　结果

　　2.1　分化型多发早期胃癌的PCNA阳性细胞率

　　正常粘膜与肠上皮化生粘膜的PCNA阳性细胞率,在单发、多发癌之间无显著差异,但癌与不典型增生的PCNA阳性细胞率,多发癌分别为44.1％和30.8％,比单发癌的30.6％,24.0％显著增高(P＜0.01)(图1)。

图1　多发胃癌例和单发胃癌例的PCNA阳性细胞率(分化型早期胃癌)

　　2.2　肠上皮化生粘膜的PCNA阳性率

　　分化型多发早期胃癌正常胃粘膜的PCNA阳性细胞率,幽门腺与胃底腺两者都显著性的低于肠化生粘膜。完全型肠上皮化生粘膜为21.1％,不完全型为21.0％,两者之间未见明显差异。但肠上皮化生的程度不同，其PCNA阳性细胞率轻度为18.7％,中度为20.6％，高度为21.6％,中度和高度肠上皮化生的PCNA阳性细胞比轻度明显升高(P＜0.05)(图2)。

图2　正常粘膜和肠上皮化生粘膜的PCNA阳性细胞率(分化型多发早期胃癌)

　　2.3　不典型增生的细胞阳性率

　　分化型多发早期胃癌的背景粘膜上存在的不典型增生病变的PCNA阳性细胞率为30.8％,显著地高于正常和肠上皮化生粘膜(P＜0.0001)。另外,依不典型增生的程度分级,其PCNA阳性细胞率轻度为35.0％、中度为31.9％、重度为38.9％,随着异型性的增高PCNA阳性细胞率升高,重度不典型增生与癌之间无显著差异(图3)。

图3　异型性PCNA阳性细胞率(分化型多发早期胃癌)

　　癌旁不典型增生的PCNA阳性细胞率41.2％,比孤立存在的不典型增生30.8％高(P＜0.0002),与癌之间无显著性差异(图4)。

图4　癌邻接异型增生部的PCNA阳性细胞率(分化型多发早期胃癌)

　　低分化型多发早期胃癌的PCNA阳性细胞率31.3％,比低分化型单发早期胃癌24.9％明显地提高(P＜0.05)(图5),但在不典型增生则未表现出这种特点。

图5　正常粘膜和肠上皮化生粘膜的PCNA阳性细胞率(低分化型早期胃癌)

　　3　讨论

　　本研究结果显示肠上皮化生粘膜的增殖活性高于正常粘膜,但明显低于不典型增生病变与癌灶。随着肠上皮化生程度的增高,细胞活性增殖活性增加。从细胞增殖活性的角度，看肠上皮化生粘膜显示出位于正常与癌之间的特性Monson^[4]、中村^[5]认为肠上皮化生为分化型癌的发源地,是一种癌前病变或癌前状态。板桥^[6]从CEA免疫染色的结果推测不完全型肠上皮化生与癌的发生有密切关系，但也有人持反对意见。羽生^[7]认为不是直接由肠上皮粘膜发生癌,而是在肠上皮化生过程中,由腺颈部的增殖细胞产生异型腺管,进而形成癌。本研究结果未显示出肠上皮化生与癌变有直接关系,但随着肠上皮化生程度的增加细胞增殖活性上升，高度肠上皮化生粘膜显示出增殖不稳定状态。

　　分化型多发癌背景粘膜上的不典型增生病变的PCNA阳性细胞率高达30.8％,从增殖活性看位于癌和正常粘膜、肠上皮化生粘膜的中间。另外,随着异型度的增加增殖活性也增高。尤其是重度不典型增生和癌旁不典型增生的PCNA阳性细胞率与癌的增殖活性接近,表现出一种增殖亢进状态。由此可见不典型增生在形态学上虽不是癌,但从增殖活性角度,它已由正常的细胞增殖过程中逸脱出来进入增殖亢进状态。特别是重度不典型增生和癌旁不典型增生,根据它们的细胞增殖活性,提示它们是一种具有更大的癌变潜能的病变。

　　本研究中分化型多发癌和分化型单发癌背景粘膜的增殖活性比较,正常与肠上皮化生粘膜的PCNA阳性细胞率之间无显著性差异。但是不典型增生和癌的增殖活性却显示出多发癌病例高于单发癌病例，也就是说，分化型多发癌的胃中并存的不典型增生比分化型单发早期胃癌更具有恶变潜能,显示出不典型增生病变在分化型多发癌的多中心性、多阶段性发生中具有重要意义。

　　然而,关于低分化型多发早期胃癌的增殖活性的探讨,尽管比低分化型单发早期胃癌有较高的增殖活性,但在正常粘膜、肠上皮化生粘膜和不典型增生病变并未显示出上述特征,说明其与分化型多发早期胃癌的组织学发生有着不同的过程。

　　作者单位：大连医科大学附属第一临床学院普通外科(辽宁省大连市116011)

　　参考文献

　　1　日本胃癌研究会编.胃癌取报い规约.改订12版.东京:金原出版,1993：60－89

　　2　Ming SC.Gastric dysplasia significance and pathologic criteria. Cancer,1984;54:1794

　　3　胡祥.多发胃癌の组织发生と异型腺の关连に关する研究.大阪医科大学杂志，1995;52:23

　　4　Hall PA.Proliferating cell nuclear antigen(PCNA)immunolocalization in paraffin section:an index of cell proliferation with evidence of deregulated expression in some neoplasms. J Pathol,1990;162:285

　　5　中村恭一,管野晴夫,高木国夫，等.胃癌の组织发生－原发性微小胃癌中心とした胃癌光显.电显的ならび に统计的研究－.癌の临床,1969;15:627

　　6　板桥正幸，广田映五,他.胃癌背景粘膜－特に肠上皮化生について－.Prog Dig Endos,1984；24:52

　　7　羽生丕.人胃のいわゆる境界领域异型上皮の临床的.病理组织学的研究－とくにその组织发生について－日消病会志，1979；76:23