全反式维甲酸联合化疗药物对胃癌的治疗作用

中国普外基础与临床杂志 2000年第1期第7卷 基础与实验研究

作者：黄承良　刘厚东　王代科

单位：黄承良 刘厚东(西藏军区总医院普外科　拉萨　850003)；王代科(第三军医大学大坪医院普外科　重庆　400042)

　　关键词： 胃癌；分化治疗；全反式维甲酸

　　摘　要：目的　探讨全反式维甲酸(ATRA)联合5-Fu治疗裸鼠皮下SGC 7901胃腺癌的疗效。方法　以ATRA 1000 μg/d口服； 5-Fu 27 mg/kg腹腔注射，隔天给药； 联合用药组剂量减半。结果　5-Fu、ATRA及两者联合用均能抑制移植瘤生长，治疗7周后，体积抑瘤率分别为56.88%、49.00%和70.00%，瘤重抑瘤率分别为51.64%、56.10%和76.95%；ATRA与5-Fu的抑瘤作用相似(P＞0.05)，联合用药的抑瘤作用较ATRA、5-Fu单用的抑瘤作用明显增强(P＜0.05)，且治疗剂量减少1/2。结论　ATRA和5-Fu联合应用能相互增强其抗癌作用，临床中可采用联合分化诱导治疗胃癌。

　　分类号：R73-36^＋1； R735.2　文献标识码：A

　　文章编号：1007-9424(2000)01-0010-03

THE EFFECT OF ALL TRANS RETINOIC ACID COMBINED WITH 5-FU IN TREATING EXPERIMENTAL GASTRIC CARCINOMA

HUANG Cheng-liang

　　(Department of General Surgery,Lasha Tebet General Military Hospital,Lasha 850003)

　　LIU Hou-dong,WANG Dai-ke.

　　Abstract：Objective　To observe the efficacy of all trans retinoic acid (ATRA) combined with 5-Fu on treating subcutaneously implanted gastric carcinoma SGC 7901 in the nude mice.Methods　Thirty-two nude mice bearing tumor were randomly divided into 4 groups:control group (group A),ATRA 1000 μg/d orally taken group (group B),5-Fu 27 mg/kg group peritoneally injected (group C),5-Fu 13.5 mg/kg combined with ATRA 500 μg/d group (group D).Results　Significant inhibition of tumor growth was shown in the group B,group C and group D as compared with group A (P＜0.01),with the tumor growth inhibition rate and the tumor weight inhibition rate at the 7 weeks after the treatment being 56.88%,49.00%,70.00% and 56.10%,51.64%,76.95%.Conclusion　ATRA combined with 5-Fu can enhance the effects of 5-Fu in treating gastric carcinoma.

　　Key words：Gastric carcinoma　　Differentiation　　All trans retinoic acid▲

　　全反式维甲酸(ATRA)分化治疗急性早幼粒细胞白血病的成功，证明ATRA作为一种分化诱导剂治疗肿瘤有巨大的潜力和良好的前景。就胃癌而言，体外实验已证实ATRA有抑制癌细胞增殖和诱导癌细胞分化的作用^〔1〕。在裸鼠体内也证明ATRA具有相似的抗癌作用^〔2〕。本研究在人胃腺癌裸鼠移植瘤模型上探讨其增效作用，旨在为临床胃癌治疗寻找新途径。

　　1　材料与方法

　　1.1　荷胃癌细胞移植瘤裸小鼠

　　由第三军医大学实验动物中心引进远交系BALB/c nu/nu无胸腺裸小鼠，鼠龄4～6周，两性兼用，共32只。无菌剥取已稳定传代的裸小鼠SGC 7901胃癌移植瘤作供体，将移植瘤组织剪碎，在RPMI-1640培养液中制成细胞悬液，调细胞浓度至5×10⁵个/ml，取0.2 ml接种于裸鼠背部皮下。接种1周后开始实验。

　　1.2　实验分组

　　实验动物随机均分成对照组、ATRA治疗组、5-Fu治疗组及联合用药组4组。

　　1.3　实验方法

　　按等毒性原则设计剂量。A组： 生理盐水1 ml； B组： ATRA 1 000 μg/d； C组： 5-Fu 13.5 mg/kg； D组： ATRA 500 μg/d，5-Fu 13.5 mg/kg。ATRA每天口服给药，生理盐水及5-Fu均腹腔内注射，隔天给药，7周后处死裸小鼠。

　　1.4　观察指标

　　1.4.1一般情况　治疗反应、食欲、精神状态及体重变化。

　　1.4.2移植瘤生长曲线　实验开始后每周测量移植瘤长径(a)、短径(b)，计算移植瘤体积及增长抑制率：

　　1.4.3移植瘤重量抑瘤率　处死裸小鼠，剥取移植瘤瘤体，清除非瘤组织，称量瘤重，计算瘤重抑瘤率：

　　1.4.4病理学检查　将移植瘤体标本用10%甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察。另各取1 mm×1 mm×1 mm大移植瘤组织用3%戊二醛固定，磷酸缓冲液冲洗，1%锇酸固定，逐级乙醇脱水，环氧树脂618包埋，超薄切片，醋酸铀-柠檬酸铅双重染色。JEM-2008EX型透射电子显微镜下观察。

　　1.5　统计学处理

　　数据用表示，行χ²检验或t检验。

　　2　结果

　　2.1　药物对裸小鼠的影响

　　实验过程中裸小鼠饮水、进食正常，个别者腹腔注射5-Fu后，注射处皮肤表面有出血现象，无1例死亡。治疗前、后裸小鼠体重增长值，ATRA组及ATRA+5-Fu组较对照组有明显增加(P＜0.05)，见表1。

表1　ATRA单用及联用5-Fu治疗前、后裸小鼠体重变化(g,）

　　与对照组比较，*P＜0.05

　　2.2　肿瘤生长情况观察

　　各治疗组移植瘤生长速度均较对照组明显减慢。从移植瘤生长曲线(附图)可见，第4周后，对照组移植瘤生长速度远远快于各治疗组(P＜0.01)，而联合用药组又较ATRA组及5-Fu组生长缓慢(P＜0.05)。从大体形态可见，对照组移植瘤瘤体大，呈结节状，表面有溃疡灶，而ATRA、5-Fu及联合用药组移植瘤均较对照组明显缩小，表面光滑，无出血及溃疡。

　　附图　ATRA单用或联用5-Fu治疗后移植瘤生长曲线

　　2.3　ATRA单用或联用5-Fu对人胃癌移植瘤的抑制作用

　　ATRA、5-Fu及ATRA和5-Fu联合应用对人胃癌移植瘤生长均有抑制作用。各治疗组体积抑瘤率分别为56.88%、49.00%和70.00%； 瘤重抑瘤率分别为56.10%、51.64%和76.95%。ATRA组与5-Fu组的抑瘤作用相近(P＞0.05)，联合用药组的抑瘤作用较ATRA组及5-Fu组明显增强(P＜0.05)，见表2。

表2　ATRA单用或联用5-Fu治疗后移植瘤体积及重量抑瘤率(）

　　与对照组比较，*P＜0.01； 与联合用药组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

2.4　病理观察

　　光镜下见皮下移植瘤SGC 7901胃癌细胞呈巢状分布，癌细胞异型性明显。ATRA组癌细胞较对照组稀疏，细胞形态由多形性变为柱状，胞浆丰富，核浆比例下降，核分裂象少见。而5-Fu组，光镜下见以坏死癌细胞为主，呈结构模糊的片状坏死，并可见炎性细胞浸润。联合用药组，在分化较好的癌细胞间可见坏死癌细胞及炎性细胞浸润。超微结构显示，对照组癌细胞异型性明显，特别是核的异型性较大，核大深染，核膜不规则，有染色质边聚； 5-Fu组主要为坏死癌细胞，核碎裂甚至消失； ATRA组及联合用药组癌细胞异型性明显减少，胞浆相对增多，可见较多线粒体、分泌空泡，染色质边聚消失，并可见较多凋亡细胞和凋亡小体。

　　3　讨论

　　以维甲酸为基础药物联合其他分化剂能起相加或协同的生物学效应。联合应用分化诱导剂不仅能增加分化作用，而且还能降低各自的治疗剂量^〔3〕。一些细胞因子也可增加维甲酸的诱导分化作用，如干扰素、肿瘤坏死因子，可大大增加维甲酸诱导癌细胞向正常细胞转化的能力^〔4〕。维甲酸联用化疗药物是增强其抗肿瘤作用的方法之一。根据体外实验结果，选用ATRA与5-Fu联用，探讨它们对胃癌移植瘤的抗癌作用。实验结果表明，在等毒性原则安排药物剂量的情况下，ATRA与5-Fu联用，具有增强抗移植瘤生长作用，而且两者联用后能相互减少药物的治疗剂量，并减轻药物对机体的不良反应。

　　5-Fu为嘧啶拮抗剂，可抑制胸腺嘧啶核苷合成酶，干扰核苷及DNA合成，导致细胞损伤或死亡。5-Fu主要作用于S期细胞。ATRA在体内的抗癌机理尚不十分清楚，有一点是肯定的，ATRA能阻断鸟氨酸脱羧酶的活化，引起多胺枯竭，使细胞积聚在G₁期，从而产生肿瘤细胞生长的抑制作用^〔5，6〕。维甲酸阻断G₁期细胞进入S期，使S期细胞减少，而5-Fu则对已进入S期的细胞产生杀伤作用，这可能是两者不同的抗癌机理，维甲酸联用5-Fu后抗癌作用的增强，可能是两者抗癌作用相加的结果。

　　根据维甲酸对癌细胞周期动力学影响特点，可对维甲酸联合应用化疗药物作进一步研究，以探讨出最佳联合用药方案，为临床分化治疗胃癌提供理论和实验依据。

　　作者简介：黄承良(1968年-)，男，浙江上虞人，硕士，主治医师，主要从事消化道肿瘤的诊治

　　研究。

　　参考文献：

　　［1］沈月霞，何振平，吴兆平等.维甲酸对胃癌细胞的诱导分化作用〔J〕.中华肿瘤杂志，1994； 16(1)∶15

　　［2］黄承良，王代科，刘宝华.全反式维甲酸对人胃腺癌裸小鼠移植瘤的抗增殖及诱导分化作用〔J〕.中国普外基础与临床杂志，1998； 5(3)∶129

　　［3］Breitman J,He R.Combination of retinoic acid with either sodiumbutyrate dimethylsulfoxide of hexamethyhene bisacetmide synergistically induce differentiation of the human myeloid leukenia cell line HL-60〔J〕.Cancer Res,1990;50(3)∶6268

　　［4］Peek K,Blllag W.Potentiation of retinoid induced differentiation of HL-60 and U937 cell line by cytokines〔J〕.Eur J Cancer,1991; 27(1)∶53

　　［5］韩　锐主编.肿瘤化学预防及药物治疗〔M〕.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1991∶64～415

　　［6］Lotan R,Lotan D.Inhibitory of retinoic acid of retihylacetate on the growth of untransformed and tumor cell in vitro〔J〕.J Natl Cancer Inst,1987; 59(6)∶1717

收稿日期：1998-12-17

修稿日期：1999-03-03