非小细胞肺癌P53、CyclinD1蛋白表达及与细胞增殖的关系

　　中华结核和呼吸杂志2000年第23卷第10期

李玉皓　王新允　张乃鑫　宋文静　赵晖　赵天如

　　关键词：非小细胞肺癌（NSCLC）；抑癌基因；P53；癌基因；CyclinD1

　　应用免疫组化方法观察非小细胞肺癌（NSCLC）和正常肺组织中抑癌基因P53和癌基因CyclinD1产物的表达，并进行增殖细胞核抗原（PCNA）的检测，探讨P53、CyclinD1蛋白在NSCLC的异常表达及其与细胞增殖的关系。

　　材料与方法　实验组收集天津医科大学总医院、天津医科大学第二附属医院病理科1990～1997年手术切除NSCLC石蜡包埋标本74例，其中鳞癌36例，腺癌38例，所有病例术前均未行放疗和化疗。对照组正常肺组织取自同期手术切除的炎性假瘤标本肺组织，共10例。免疫组化方法采用链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物(SP)法，P53（DO-1）单克隆抗体、CyclinD1（HD11）多克隆抗体为Santa cruz公司产品，PCNA(ZM-0213)单克隆抗体为美国ZYMED公司产品，工作浓度分别为1∶150、1∶50、1∶50，抗原修复方法为微波160 w10 min，SP试剂盒为ZYMED公司产品，均购自北京中山生物技术有限公司。结果判定：染色阳性信号为细胞核内出现棕黄色颗粒，由两名医师双盲法在高倍视野（×400）下观察肿瘤实质区P53、CyclinD1阳性细胞数，0记作（-），阳性细胞数占肿瘤细胞数25%以下记作（+），25-50%记作（++），＞50%记作（+++）。细胞增殖指数（PI）=PCNA阳性细胞数/细胞总数×100%。统计学处理采用χ²检验、t检验，显著性水准为0.05。

　　结果　(1) P53、CyclinD1蛋白表达：对照组中未见P53蛋白表达，实验组74例NSCLC中有41例呈阳性表达，阳性率为55%，明显高于对照组（χ²=8.7195，P=0.0031），其中（+）22例，占30%，（++）16例，占22%，（+++）3例，占4%。P53蛋白表达与NSCLC组织学类型、组织学分级、临床分期未见相关性(P＞0.05)。伴淋巴结转移的NSCLC p53蛋白表达阳性率高于不伴淋巴结转移者（P=0.0222）。对照组未中见CyclinD1蛋白表达，实验组有28例呈阳性表达，阳性率为38%，明显高于正常肺组织(χ²=4.1001，P=0.0429)，其中（+）15例，占20%，（++）11例，占15%，（+++）2例，占3%。CyclinD1蛋白表达与NSCLC组织学类型、组织学分级、临床分期及淋巴结转移等病理指标未见相关性(P＞0.05)。(2) p53蛋白表达与CyclinD1蛋白表达的关系：NSCLC 74例中，P53蛋白阳性41例，其中Cyclin d1蛋白阳性率为44%(18/41)；P53蛋白阴性33例，其中Cyclin D1蛋白阳性率为30%(10/33)，二者表达未见相关性(χ²=1.4377，P=0.2301)。(3) p53蛋白、CyclinD1蛋白表达与PCNA表达的关系：NSCLC 74例中，P53蛋白阳性组PCNA指数为(61±24)%，阴性组PCNA指数为(43±20)%，二者表达呈正相关(t=3.4430，P=0.0010)；Cyclin d1蛋白阳性组28例PCNA指数为(65±24)%，阴性组46例PCNA指数为(46±21)%，二者表达呈正相关(t=3.4551，P=0.0009)。

　　讨论　P53在NSCLC中出现异常表达提示我们，P53突变与NSCLC发生和转移有关。我们认为，P53不仅在基因诊断NSCLC方面有辅助价值，而且为评价NSCLC的预后提供了有益的参考。CyclinD1在NSCLC中出现异常表达，但与NSCLC各病理参数间未见相关性，与Kwa等^［1］和Marchetti等^［2］的结果一致，提示CyclinD1的过表达在NSCLC的发生过程中起重要的调控作用，有助于NSCLC的形成。

　　P53蛋白与CyclinD1蛋白表达之间未见相关性，提示CyclinD1与P53二者间没有明显的调控作用。P53蛋白、CyclinD1蛋白表达与PCNA表达间呈正相关，提示P53和CyclinD1在促进肿瘤细胞增殖，打破增殖与抑制增殖的动态平衡过程中发挥了作用。

　　基金项目：天津市自然科学基金资助项目(983608111)

　　作者单位：李玉皓(300070天津医科大学病理学教研室)

　　王新允(300070 天津医科大学病理学教研室)

　　张乃鑫(300070 天津医科大学病理学教研室)

　　宋文静(300070 天津医科大学病理学教研室)

　　赵晖(300070 天津医科大学病理学教研室)

　　赵天如(300070 天津医科大学病理学教研室)

　　参考文献

　　1.Kwa HB, Michalides RJ. The prognostic value of NCAM P53 and CyclinD1 in resected non-small cell lung cancer. Lung cancer, 1996;14:207-217.

　　2.Marchetti A, Doglioni C, Barbareschi M, et al. CyclinD1 and retinoblastoma susceptibility gene alterations in non-small cell lung cancer. Int J Cancer,1998;75:187-192.