肿瘤细胞多药耐药性与膀胱癌侵袭行为的相关性研究
现代康复 2000年第4期第4卷 实验研究
作者：向军 李昕 李旭 刘龙 赵黎明
单位：沈阳军区总医院，辽宁沈阳110015
肿瘤细胞多药耐药性的产生是膀胱癌术后化疗疗效不佳的主要原因之一，但肿瘤原发耐药和继发耐药个体差异性较大，可能与肿瘤自身的生物学特性有关，为研究膀胱癌多药耐药性与癌细胞侵袭行为的关系，本研究采取免疫组化方法对61例膀胱癌组织中mdr－1,Cathespin－D(Cath－D,组织蛋白酶D)的蛋白表达进行测定，报告如下。
1材料来源
1991～1993年间有随访结果的膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本61例。男44例，女17例。年龄29～76岁，平均58岁。G1期14例，G2期21例，G3期18例。pT314例。复发33例，平均间隔4～20个月，28例无复发。有8例正常膀胱粘膜标本作对照。
2试剂与方法
试剂：一抗为鼠抗人mdr－1抗体，免抗人Cath－D抗体，DAB显色剂，链霉亲合素－生物化过氧化酶复合物(SABC)，免疫组化剂盒购自博士德公司。
方法：SABC法。免疫组化步骤按试剂盒说明进行，PBS代替一抗空白对照。染色为棕黄色为阳性。每张切片计数4个视野，每个视野数200个细胞。阳性细胞＜10％为阴性(－)，11％～30％为低度表达(＋)，50％以上为高度表达(＋＋＋)。统计学χ2检验和相关分析。
3结果
3.1Mdr－1和Cath－D阳性染色该染色细胞浆Cath－D的表达与膀胱癌分级，分期及复发的关系如表1所示，在病理分级、分期间均有显著性差异(P＜0.05)。mdr－1的表达与膀胱癌分级，分期没有统计学差异(P＞0.05)。但与预后相关密切。术后复发者mdr－1阳性率50％，(14/28)，未复发者mdr－1阳性率87.9％，(29/33)，二者间有显著差异(P＜0.05)，术后复发者中Cath－D阳性率42.9％。(12/28)，未复发者Cath－D阳性率78.8％，(26/33)，二者间有显著差异(P＜0.05)。
3.2mdr－1和Cath－D表达相关关系如图1。
图1mdr－1与Cath－D基因阳性表达
相关性(r=0.797n=61)
表1 mdr－1,Cath－D表达与膀胱癌分级分期复发的关系
| 分级分期 |
n |
mdr－1 |
Cath－D |
| 阳性数 |
％ |
阳性数 |
％ |
| G1 |
14 |
10 |
71.4 |
4 |
28.6 |
| G2 |
29 |
19 |
65.5 |
18 |
62.1 |
| G3 |
18 |
14 |
78.8 |
16 |
88.9 |
| pTa |
17 |
13 |
76.5 |
5 |
29.4 |
| pT1 |
9 |
6 |
66.7 |
6 |
66.7 |
| pT2 |
21 |
14 |
66.7 |
15 |
71.4 |
| pT3 |
14 |
10 |
71.4 |
12 |
85.7 |
4讨论 膀胱肿瘤具有易复发的生物学特性，并且由于化疗后可产生多药耐药性，使膀胱肿瘤的预后不良。多药耐药基因mdr－1编码的P170蛋白是一种跨膜蛋白，可以将抗癌药物泵出细胞，使细胞内药物浓度降低，从而使细胞产生对多种药物的抗药性。这种抗药性发始发机制目前仍不清楚，国内有研究发现膀胱肿瘤mdr－1的阳性表达有随恶性程度升高而表达增加的趋势，但在本实验中，未见二者间明确的统计学关系(P＞0.05)，但初发肿瘤Mdr－1的阳性率明显低于复发患者(P＜0.05)。多药耐药性的产生在不同期别，级别的肿瘤之间个体差异性较大，肿瘤多药耐药性是否与肿瘤的生物学行为有关仍不清楚。为研究二者关系，本实验针对肿瘤侵袭行为相关基因Cath－D与MDR/P170在膀胱癌组织中同时进行检测，Cath－D是一种溶酶体酸性蛋白酶，能溶解细胞外基质，促进肿瘤转移。Mcquire等在研究中发现乳腺癌随分级，分期的升高Cath－D表达增加[1][Mcquire WL,Pandm AK,Allred DC,et al.Prog nosis and treatment decision in patient with beest cancer without axillary node mvaluement,Cancer,1992,70:1 775]。目前已认为Cath－D的高表达侵袭性生物行为及不良预后有关。在膀胱肿瘤Cath－D研究中观察到Cath－D在高级别，高期别的肿瘤中阳性表达率增高(P＜0.05)，在复发肿瘤中Cath－D的阳性表达率明显高于无复发者(P＜0.05)。因此作者认为Cath－D可以作为膀胱移行细胞癌恶性行为及不良预后的标志物。Cath－D阳性和阴性组间mdr－1，基因产物P170蛋白表达也显示了显著差异，结果提示Cath－D阳性表达中mdr－1阳性率明显高于Cath－D阴性表达者中mdr－1的阳性率(P＜0.01),二者的表达具有相关性(r="0.79,P<"0.05)。据此提出mdr－1表达可能与分期、分级不存在一定的相关关系，但可能由于组间误差的影响及个别组样本数较少，导致不同的结果。综上讨论可以认为，膀胱移行细胞癌是否容易产生多药耐药性与癌细胞侵袭行为有一定程度的关联，临床化疗时对于Cath－D阳性的病例应考虑给予适当的耐药性逆转剂进行辅助治疗。
收稿：1999－12－29
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